Опиоидэргическая модуляция функционально-метаболической активности нейтрофильных лейкоцитов

Тип работы:
Диссертация
Предмет:
Физиология
Страниц:
142


Узнать стоимость

Детальная информация о работе

Выдержка из работы

Функционально-метаболический потенциал нейтрофильных лейкоцитов определяет выраженность воспалительной реакции как асептического характера, так и развивающейся в ответ па проникновение в организм инфекционных возбудителей (Козлов И.Г. и соавт., 2002). Нарушение целостности тканей вызывает активацию нейтрофильных лейкоцитов, которая сопровождается перестройкой метаболизма, выработкой активных форм кислорода, стимуляцией хемокинеза и фагоцитоза (Schratzberger P. et al., 1996- Клебанов Г. И., Владимиров Ю. А., 1999- Герасимов И. Г., 2006). Эти процессы направлены на уничтожение возбудителей и патологически измененных клеток (Falanga A., et al., 2000- Мальцева В. II. и соавт., 2006- Нестерова И. В. и соавт., 2006). Однако в состоянии гиперактивации нейтрофилы способны повреждать не затронутую патологическим процессом ткань (Hoffmeyer M.R. et al., 2000- Ikeda Y. et al., 2001- Assimakopoulos S.F., et al., 2004- Chiriac M. et al., 2007).

Существует мнение, что иммунная система связана с нервной системой (Бахов Н.И. и соавт., 1988- Fiset М.Е. et al, 2003) посредством продукции и секреции биологически активных веществ (Кветной И.М., Кветная Т. В. и соавт., 2005), к которым относятся ониоидные пептиды (Акоев Г. Н. и соавт., 1989). Широкая распространенность в центральной и периферической нервной системе, нервных окончаниях, эндокринных клетках и клетках иммунной системы обусловливает универсальную роль этих веществ как регуляторов физиологических и патологических процессов в организме (Кветной И.М. и соавт., 2005- Королева С. В., Ашмарин И. П., 2005).

Опиоидный пептид даларгин является синтетическим аналогом регулятор! юго нейропептида лейцин-эикефалина (Виноградов В.А., Буглак

Н.П., 1988). Нейропептиды синтезируются в нервной системе из высокомолекулярных предшественников, они способны влиять на воспаление, контролировать болевую чувствительность, секрецию эндокринных и экзокринных желез, кровоснабжение, заживление и многие другие процессы (Rogers Т.J. et al., 2000- Аллазов С., 2001- Zhao D., Pothoulakis С., 2003).

Даларгин обладает широким спектром биологической активности: оказывает иммуномодулирующее действие, ипгибирует перекисное окисление липидов, ограничивает гормонально-метаболические и энергетические нарушения, улучшает микроциркуляцию, ускоряет физиологическую и репаративную регенерацию (Панькова Т.М., Тимошин С. С., 1990- Бажапов М Л I. и соавт., 1991- Курзанов A.M., 2001).

Имеющаяся информация о влиянии опиоидпых пептидов на нейтрофилы, а также об их роли в развитии патологических состояний носит противоречивый характер. В связи с этим представляет интерес изучение воздействия опиоидного пептида даларгина как препарата, способного оказывать корригирующее влияние на функционально-метаболическую активность нейтрофильных лейкоцитов в физиологических условиях и при различных патологических состояниях.

Цель исследования

Выявить способность даларгина оказывать корригирующее влияние на функционально-метаболическую активность нейтрофильных лейкоцитов периферической крови в норме и при наличии патологических процессов, сопровождающихся деструкцией ткани с ответной воспалительной реакцией.

Задачи исследовании

1. Выявить воздействие даларгина на способность нейтрофилов крови здоровых людей к активации in vitro.

2. Установить характер воздействия даларгина in vitro на функционально-метаболическую активность нейтрофилов периферической крови больных с обширным повреждением тканей (ожоговая травма).

3. Оценить функциональную активность нейтрофильных лейкоцитов периферической крови при остром экспериментальном панкреатите.

4. Выявить влияние даларгина на состояние поджелудочной железы крыс с острым экспериментальным панкреатитом.

5. Установить воздействие даларгина на функциональную активность нейтрофильных лейкоцитов крыс с острым экспериментальным панкреатитом в зависимости от динамики развития заболевания.

Новизна результатов исследования

1. Представлены новые данные о стимулирующем влиянии даларгина in vitro на способность к активации нейтрофильных лейкоцитов периферической крови здоровых людей в зависимости от концентрации пептида и лиганд-рецепторного взаимодействия.

2. Выявлена способность даларгина оказывать ингибирующее действие in vitro на повышенную функционально-метаболическую активность нейтрофилов периферической крови больных с обширным повреждением мягких тканей (ожоговая травма).

3. Найдены новые особенности изменения функционально-метаболической активности нейтрофильных лейкоцитов (активность ядерного хроматина, NADPH-оксидазы, миелопероксидазы, щелочной фосфатазы, содержание катионных белков) при развитии острого экспериментального панкреатита у крыс.

4. Получены сведения о протекторном действии даларгина на ткань поджелудочной железы и ингибирующем — на функционально-метаболическую активность нейтрофильных лейкоцитов крови крыс с острым экспериментальным панкреатитом.

5. Выявлены новые особенности модулирующего влияния даларгина in vitro и in vivo на функционально-метаболическую активность нейтрофильных лейкоцитов периферической крови в норме и при повреждении тканей различной этиологии у людей и экспериментальных животных.

Основные положения, выносимые на защиту

1. У здоровых людей даларгин дозозависимо повышает уровень активации нейтрофильных лейкоцитов периферической крови in vitro. Наиболее выраженное действие пептид проявляет в концентрации 10& quot-7М. Влияние даларгина на способность нейтрофилов к активации опосредовано через опиатные рецепторы. Повышенную активность

VJ 1 1 К /• W о неитрофилов периферической крови больных людей с ожоговой травмой даларгин снижает in vitro.

2. Острый экспериментальный панкреатит у крыс сопровождается резким повышением функциональной активности нейтрофильных лейкоцитов периферической крови. Репаративные изменения в поджелудочной железе сопровождаются снижением активности нейтрофилов.

3. Даларгин оказывает протективное действие на поджелудочную железу, предотвращает деструктивные и способствует развитию репаративных процессов у животных с острым экспериментальным панкреатитом. При этом пептид снижает повышенную активность нейтрофильных лейкоцитов. При репаративных изменениях в поджелудочной железе ингибирующее влияние пептида на высокую функциональную активность нейтрофилов крови носит наиболее выраженный характер.

Научная значимость исследования

Выявлено модулирующее действие даларгина на функционально-метаболическую активность нейтрофильных лейкоцитов в норме и при повреждении тканей. Это расширяет современные представления о взаимодействии нейроэндокринной и иммунной системы организма.

Результаты проведенной работы могут применяться в учебном процессе со студентами медицинских и биологических специальностей, а также использоваться для прикладных исследований.

Практическая значимость исследования

Обнаруженное ингибирующее влияние даларгина на повышенную функционально-метаболическую активность нейтрофильных лейкоцитов in vitro у людей с обширным повреждением мягких тканей (ожоговая травма) и in vivo у крыс с острым экспериментальным панкреатитом может быть использовано для иммунокоррекции состояний, сопровождающихся избыточной активацией нейтрофилов.

Сведения о практическом использовании результатов исследования

На основании полученных фактов предложены практические рекомендации по дальнейшему использованию результатов исследования (см. приложение 2), которые внедрены в учебный процесс кафедр патологической анатомии, клинической иммунологии, аллергологии и лабораторной диагностики Кубанского государственного медицинского университета (КГМУ), а также используются в работе отдела клинической и экспериментальной иммунологии Центральной научно-исследовательской лаборатории Кубанского государственного медицинского университета, хирургического отделения РЦХФГ Краснодарской краевой клинической больницы № 1 им. Проф. Очаповского (см. приложения 3. 1−3. 4). По результатам исследования опубликовано 7 печатных работ (см. приложение 1).

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 142 страницах машинописного текста, содержит 20 рисунков (гистограммы, изображение нейтрофильных лейкоцитов и ткани поджелудочной железы). Работа состоит из введения, 5 глав, выводов, указателя использованной литературы. Библиография включает 267 источников, из них 98 на русском языке и 169 — на иностранных языках.

ВЫВОДЫ

1. Синтетический аналог лейцин-энкефалина опиоидный гексапептид даларгин у здоровых людей дозозависимо стимулирует способность нейтрофильных лейкоцитов периферической крови к активации in vitro, о чем свидетельствует увеличение количества активированных клеток и повышение активности NADPH-оксидазы. Наиболее выраженное действие пептид проявляет в концентрации 5−10& quot-8М. Влияние даларгина на способность нейтрофилов к активации опосредовано через опиатные рецепторы, блокада которых налоксоном устраняет стимулирующий эффект.

2. У больных людей с обширным повреждением тканей (ожоговая травма) даларгин ингибирует повышенную активность нейтрофильных лейкоцитов венозной крови in vitro. Это проявляется уменьшением количества активированных клеток со снижением в них активности NADPH-оксидазы и свидетельствует о нормализации уровня кислородзависимого метаболизма нейтрофилов.

3. Острый экспериментальный панкреатит у крыс сопровождается резким повышением функционально-метаболической активности нейтрофильных лейкоцитов. Воспалительно-деструктивным изменениям в поджелудочной железе сопутствует увеличение в нейтрофилах крови активности ядерного хроматина, NADPH-оксидазы, щелочной фосфатазы и содержания неферментных катионных белков со снижением активности миелопероксидазы.

4. Репаративные изменения в поджелудочной железе крыс при остром экспериментальном панкреатите сопровождаются спонтанным снижением активности ядерного хроматина, NADPH-оксидазы и щелочной фосфатазы, уменьшением содержания неферментных катионных белков и увеличением активности миелопероксидазы в нейтрофилах.

5. Введение даларгина животным с острым экспериментальным панкреатитом оказывает протективное действие на поджелудочную железу. При воспалительно-деструктивных изменениях в органе пептид снижает в нейтрофилах активность ядерного хроматина, NADPH-оксидазы, щелочной фосфатазы и содержание катионных белков, повышая активность миелопероксидазы. При репаративных изменениях в поджелудочной железе под действием даларгина показатели функционально-метаболической активности нейтрофильных лейкоцитов периферической крови нормализуются.

6. Даларгин проявляет модулирующее действие на функционально-метаболическую активность нейтрофилов, которое зависит от их исходного состояния. Пептид повышает изначально низкую функциональную активность нейтрофилов и снижает высокую. Даларгининдуцированные эффекты проявляются in vitro и in vivo, как в норме, так и при повреждении тканей различной этиологии у людей и экспериментальных животных.

ПоказатьСвернуть

Содержание

Список сокращений.

ГЛАВА 1. Обзор литературы. Нейтрофильные лейкоциты в патогенезе повреждения тканей и развития острого панкреатита.

1.1.1. Морфо-функциональная характеристика нейтрофильных лейкоцитов.

1.2. Опиоидные пептиды.

1.2.1. Взаимосвязь иммунной и нейроэндокринной систем.

1.2.2. Синтетический аналог лейцин-энкефалина даларгин.

1.3. Роль нейтрофильных лейкоцитов в развитии острого панкреатита.

1.3.1. Лечебный эффект даларгина при остром панкреатите.

ГЛАВА 2. Материалы и методы.

2.1. Характеристика экспериментального материала in vivo.

2.2. Моделирование холодового панкреатита.

2.3. Методы патогистологического исследования ткани поджелудочной железы.

2.4. Характеристика исследуемого материала in vitro.

2.5. Методы определения оптимальных условий инкубации крови in vitro.

2.6. Цитохимические методы исследования.

2.7. Метод определения активности ядерного хроматина.

2.8. Компьютерная морфометрия изображения нейтрофильных лейкоцитов.

2.9. Статистические методы.

ГЛАВА 3. Влияние даларгина на активацию нейтрофилов периферической крови in vitro.

3.1. Оптимальные условия инкубации.

3.2. Влияние даларгина на функциональную активность нейтрофилов периферической крови больных с ожоговой травмой.

3.3. Резюме.

ГЛАВА 4. Влияние даларгина на состояние поджелудочной железы и функционально-метаболическую активность нейтрофилов при остром экспериментальном панкреатите.

4.1. Морфологические изменения поджелудочной железы.

4.2. Функциональная активность нейтрофильных лейкоцитов

4.2.1. NADPH-оксидаза.

4.2.2. Миелопероксидаза.

4.2.3. Щелочная фосфатаза.

4.2.4. Неферментные катионные белки.

4.2.5. Ядерный хроматин.

4.3. Резюме.

ГЛАВА 5. Обсуждение результатов исследования.

Выводы.

Заполнить форму текущей работой