Ферментативные характеристики орто-дифенолоксидазы льна

Тип работы:
Реферат
Предмет:
Химия


Узнать стоимость

Детальная информация о работе

Выдержка из работы

www. rae. ru Научный журнал & quot-Фундаментальные исследования& quot-
ФЕРМЕНТАТИВНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ОРТО-ДИФЕНОЛОКСИДАЗЫ ЛЬНА
Лапина Г. П., Лихуша П. С.
Тверской государственный университет
Тверь, Россия
Ферменты полифенолоксидазной группы важны: участвуют в клеточном дыхании и являются основной терминальной оксидазой у растений. В настоящее время фермент о-дифенолоксидаза (о-ДФО) растительного происхождения мало изучен, поэтому определение физико-химических и ферментативных свойств данного фермента необходимо и значимо для выяснения его роли в процессах лигнификации льна на молекулярном уровне, что позволит найти новые подходы к улучшению качества льняных волокон. В данной работе изучена о-дифенолоксидаза проростков льна-долгунца.
Цели и задачи, поставленные в данной работе:
& gt- выделить о-ДФО из проростков льна-
& gt- рассчитать содержание фермента-
& gt- изучить ферментативные параметры о-ДФО биотканей льна при варьировании ионной силой раствора.
Фермент о-ДФО выделяли из проросших семян льна во фракции суммарных белков в соответствии с методикой, предложенной В. Д. Анисимовым, Т. Б. Кастальевой, с собственными модификациями. В надосадочной жидкости — о -дифенолоксидаза. Для дальнейшего исследования определили концентрацию о-ДФО с использованием калибровочного кривой. Содержание фермента рассчитано и составило 7,5−10& quot-3 г/г сырой массы биотканей льна, что коррелирует с данными литературы. Ферментативные параметры о-ДФО (константа Михаэлиса км и константа каталитическая кгат) рассчитывали с использованием метода Бояркина по начальным участкам кинетических кривых Д — ^ перестроенных в координатах двойных обратных величин -координатах Лайнуивера-Берка, при варьировании концентрации ее субстратов: пероксида водорода и бензидина. Ионную силу (I) раствора создавали хлоридом натрия и меняли в интервале 0,1 — 0,4 М.
На основе полученных экспериментальных данных, рассчитанные ферментативные параметры о — ДФО льна составили:
При повышении ионной силы до 0,3 М одновременно увеличивается значение и кМ, и ккат. Далее при снижении ионной силы до 0,4 М наблюдается снижение значений и кМ, и кгат.
Примем состояние системы с ионной силой 0,1 М за исходное состояние. Тогда при:
а) I = 0,2 М значения кМ 0,2 & gt- кМ 0Д и Vmax0.1 & lt- Vmax0. 2
этот случай по классификации Крупянко (1999) описывается как 1а — тип эффектирования фермента, названный двухпараметрически согласованной активацией-
б) I = 0,3 М значения Кт01 & lt- Кт03 и Vmax0.1 & lt- Vmax0з
Ионная сила, равная 0,3 М, вызывает ингибирование фермента, который описывается как Vi -тип эффектирования о-ДФО льна, названный псевдоингибированием-
в) I = 0,4 М значения Кт04 & gt- Кт01 и Vmax0.4 & gt- Vmax0Д
Согласно классификации Крупянко (1999) это соответствует Ш -типу, а именно, двухпараметрически рассогласованному ингибированию биокатализатора.
Итак, влияние ионной силы раствора специфично разнонаправлено действует на течение ферментативного процесса, а именно, сопровождается сменой типов эффектирования ^ ^ !а ^ II) ингибирование о-дифенолоксидазы льна, выявленное при
I =0,1 М: км = 0,09 -10- 3 моль/л к^, = 7,7 с -1-
I = 0,2 М: кМ = 0Д3−10- 3 моль/л, ккат = 27,7 с -1-
I = 0,3 М: кМ = 4Д3−10- 3 моль/л, ккат = 424,9 с -1-
I = 0,4 М: кМ = 0Д5−10- 3 моль/л, ккат = 22,6 с -1
www. rae. ru Научный журнал & quot-Фундаментальные исследования& quot-
ионной силе, равной 0,2 М, сменяется активацией фермента с возрастанием ионной силы до 0,3 М. При дальнейшем повышении ионной силы раствора до 0,4 М вновь наблюдается ингибирование биокатализатора. Кроме того, в каждом конкретном случае меняется и тип эффектирования ферментативной реакции.
Привлечение метода диаграммных построений в двумерной К'-^'- - системе координат позволило получить визуализацию регулирования ферментативным поведением о-ДФО льна при возрастании ионной силы раствора, а также рассчитать дополнительные ферментативные характеристики: длины соответствующих векторов и провести конкретизацию каталитических свойств о-ДФО льна при изменении ионной силы раствора: с повышением ионной силы раствора установлено изменение механизма течения ферментативной реакции и её интенсивности.

ПоказатьСвернуть
Заполнить форму текущей работой