Разработка методики идентификации и количественного определения эфирных масел мяты и куркумы в многокомпонентном лекарственном средстве растительного проис

Тип работы:
Реферат
Предмет:
Медицина


Узнать стоимость

Детальная информация о работе

Выдержка из работы

Аналiз та стандартизацiя бiологiчно активних сполук та лiкарських форм
Analysis and standardization of biologically active substances and dosage forms
УДК 615. 322−07]-092. 4
О. Г. Смалюх
Розробка методики щентифшацп та кiлькiсного визначення ефiрних олiй м'-яти i куркуми в багатокомпонентному лiкарському засобi
рослинного походження
ПАТ «Галичфарм», м. Льве
З метою стандартизаци багатокомпонентного лжарського засобу, до складу яко-го входять рослиннi екстракти та ефiрнi оли, розробили методики вдентифжаци та кшьюсного визначення ефiрних олiй м'-яти та куркуми методом газово! хроматографп. Для вибору маркерiв для вдентифжаци та кiлькiсного визначення здшснили огляд фахово! лгтератури й експериментальнi дослщження, на основi яких iдентифiкацiйними та кшьюсними маркерами запропонували обрати ментол i турме-рони. Дослщили умови проботдготовки та хроматографування, в результата етанол 96% обрали оптимальним розчинником- виявили, що ультразвук i центрифугування пiдвищують ефективнiсть проботдготовки- отримали найкращi хроматографiчнi характеристики пiкiв речовин, яю визначали, на колондi HP-Innowax, 19091N-133. Запропонували юльюсний критерiй якостi капсул: вмтст ментолу — вiд 2,0 мг до 4,5 мг, вмют турмеронiв — вiд 2,0 мг до 5,0 мг iз розрахунку на середню масу вмiсту капсули.
Разработка методики идентификации и количественного определения эфирных масел мяты и куркумы в многокомпонентном лекарственном средстве растительного происхождения
О. Г. Смалюх
С целью стандартизации многокомпонентного лекарственного средства, в состав которого входят растительные экстракты и эфирные масла, разработали методики идентификации и количественного определения эфирных масел мяты и куркумы методом газовой хроматографии. Для выбора маркеров для идентификации и количественного определения провели обзор специализированной литературы и экспериментальные исследования, на основе которых идентификационными и количественными маркерами предложили выбрать ментол и турмероны. Исследовали условия пробоподготовки и хроматографирования, в результате которых этанол 96% выбрали оптимальным растворителем- установили, что ультразвук и центрифугирование повышают эффективности пробоподготовки- получили лучшие хроматографические характеристики пиков определяемых веществ на колонке HP-Innowax, 19091N-133. Предложили количественный критерий качества исследуемых капсул: содержание ментола — от 2,0 мг до 4,5 мг, содержание турмеронов — от 2,0 мг до 5,0 мг в расчете на среднюю массу содержимого капсулы. Ключевые слова: многокомпонентный растительный препарат, эфирные масла, газовая хроматография, количественное определение, идентификация.
Актуальные вопросы фармацевтической и медицинской науки и практики. — 2015. — № 1 (17). — С. 27−31
Ключовi слова:
багатокомпонентний л1карський засб, еф1рна ол1я, газова хроматография, iдентиф1кац1я, кльксне визначення.
The development of method for mint and turmeric essential oils identification and quantitative analysis in complex drug
O. G. Smalyuh
Aim. To standardize complex drug, which includes plant extracts and essential oils methods for essential oils of mint and turmeric identification and quantification by gas chromatography have been developed.
Methods and results. Literature review and experimental studies have been conducted in order to select markers for the identification and quantification. After the review menthol and turmerics have been suggested as the identification and quantitative markers. The conditions of sample preparation and chromatography have been investigated, resulting ethanol 96% has been chosen as optimal solvent. It has been established that ultrasound and centrifugation improve the efficiency of sample preparation, and cause better chromatographic characteristics of peaks determined by substances in column HP-Innowax, 19091N-133.
Conclusion. Quantitative criteria have been proposed for investigated capsules: menthol content of 2.0 mg to 4.5 mg turmerics content of 2.0 mg to 5.0 mg, based on the average weight of the capsule contents.
Key words: Drug Combination, Volatile Oils, Gas Chromatography, Analysis.
Current issues in pharmacy and medicine: science and practice 2015- № 1 (17): 27−31
Для оцшювання яшсних i кшьшсних характеристик рослинних лшарських засобiв (РЛЗ), що мютять складний комплекс речовин рiзних хiмiчних клаав, най-бшьш придатними е високоселективш хроматографiчнi методи аналiзу, за! хньою допомогою можна одночасно здшснити вдентифшацш i шльшсне визначення бюло-пчно активних речовин (БАР) чи маркерiв [1].
Мета роботи
Розробити методику щентифтацп та шлькюного визначення ефiрних олш м'-яти та куркуми в комплексно-
му лтарському засобi у формi капсул, що мютить оли м'-яти перцево!, куркуми довго!'-, сумш екстракпв цмину тщаного (Helichrysum arenarium (L.) Moench), напдок (Calendula officinalis L), моркви дико! (Daucus сarota) та куркуми довго! (Curcuma longa).
Матерiали i методи до^дження
Використовували зразки ефiрних олш куркуми та м'-яти та РЛЗ (у формi капсул), який мютить ефiрнi оли куркуми i м'-яти та рослинш екстракти.
Для вдентифшаци компонеилв ефiрних олш ви-
користовували газовий хроматограф «6890N» i3 мас-селективним детектором 5975. Методики вдентифшаци та кшьшсного визначення компонентiв ефiрних олiй роз-робляли на газовому хроматографi Agilent 6890 N, який пройшов ввдповщну державну метрологiчну атестацiю та повiрку, а також мае необхiдну квалiфiкацiю.
Використовували спиртовi розчини стандартних зразшв ментолу (Fluka) та куркуми оли (Sami Labs Limited, Iндiя). Протягом дослщжень використовували реактиви зпдно з вимогами ДФУ для ввдповвдних метсдав аналiзу, розчини реакгивiв готували ввдповвдно до вимог ДФУ [2].
Результати та Тх обговорення
Комплексний РЛЗ мiстить сухий екстракт цмину ш-щаного квiтiв, екстракт моркви дико! плодiв i нагiдок квiтiв густий, сухий екстракт куркуми довго! й ефiрнi олл м'-яти перцево! та куркуми. У нашш попереднiй робот [3] обгрунтували вибiр основних груп БАР, за як1сним складом i кiлькiсним вмiстом яких визначатиметься яшсть цього РЛЗ.
Як1сть ефiрноl оли м'-яти як активного фармацевтично-го iнгредiента нормуеться вимогами Свропейсько! фар-макопе! (?Ф), згiдно з ними хроматографiчний профiль мае ввдповщати таким вимогам: лiмонену — ввд 1,0% до 5,0%, цинеолу — ввд 3,5% до 14,0%, ментону — вiд 14,0% до 32,0%, ментофурану — вiд 1,0% до 9,0%, iзоментону -ввд 1,5% до 10,0%, ментилацетату — вщ 2,8% до 10,0%, iзопулеголу — не бшьше н1ж 0,2%, ментолу — ввд 30,0% до 55,0%, пулегону — не бiльше н1ж 4,0%, карвону — не бшьше шж 1,0% [9].
Проаналiзували рiзнi зразки ефiрноl оли м'-яти, що за-стосовуються на виробництвi ПАТ «Галичфарм». Вмiст ментолу за даними хроматографiчних визначень i за результатами розрахуншв iз використанням стандартного зразка ментолу в рiзних зразках оли коливаеться вш 45% до 50%, що вказуе на ввдповшшсть використаних зразкiв оли м'-яти за показником «вмют ментолу» вимогам? Ф [9].
Отже, враховуючи результати дослшження рiзних зразкiв оли м'-яти та зважаючи на необхiднiсть и вден-тифшаци i кiлькiсного визначення у готовому багато-компонентному РЛЗ, виршили як И аналггачний маркер обрати ментол.
Ефiрна олiя куркуми не описана у жоднш iз провiдних фармакопей свiту. За даними фахово! лiтератури [6−8], основними компонентами олл куркуми е турмерони: Аг-турмерон, а-турмерон та Р-турмерон. Аналiзуючи рiзнi зразки ефiрноl оли куркуми, встановили, що вмiст тур-меронiв коливаеться ввд 55% до 78%: вмют Аг-турмерону становить вш 23% до 29%, а-турмерону — ввд 20% до 26%, в-турмерону — вiд 22% до 25%.
Тому для встановлення тотожностi РЛЗ щодо наявносп куркуми оли, запропоновано iдентифiкувати И основнi компоненти — турмерони: наявшсть на хроматограмi тшв, Аг-турмерону, а-турмерону та в-турмерону тд-тверджуе iдентичнiсть оли, а! хнш сумарний вмiст мае вiдповiдати кшьшсному показнику «вмют турмерошв» у специфтацп на олiю куркуми.
Компонентний склад ефiрноl оли куркуми дослвди-ли з використанням стандартного зразка ефiрноl оли куркуми на газовому хроматографi з масселективним детектором. Виявили належшсть хроматографiчних пiкiв до основних представнишв а-, в- i Aг-турмеронiв. На рис. 1 наведена хроматограма розчину куркуми оли, яку одержали в умовах, що запропоноваш в методищ шентифтаци та кiлькiсного визначення ментолу i тур-меронiв у лшарському засобi.
Дослiдження умов пробошдготовки дали змогу запро-понувати етанол 96% для вилучення компонентiв олiй iз проби- ультразвукову обробку протягом 5 хв — для тдвищення ефективносп вилучення з капсульно1 маси- центрифугування — для покращення осадження видимих твердих частинок i зменшення часу пробошдготовки- використання 1-тридеканолу як внутршнього стандарту — для пiдвищення прецизшносп вимiрювання.
При виборi хроматографiчноl колонки дослщили характеристики пiкiв ментолу i турмеронiв, застосовуючи
Рис. 1. Хроматограма спиртового розчину оли куркуми в умовах кшьюсного визначення ефiрних олш м'-яти псрдсво! та куркуми.
Розробка методики? дентиф1кацИ'-та кльксного визначення еф1рних олйм'-ятиiкуркуми в багатокомпонентномулкарському.
РА
175 —
130 —
FI02 В. (DCt304DCl32026020l. D-i
4
-J^JL
ж
lUL^
Рис. 2. Хроматограма розчину пор1вняння в умовах кшьюсного визначення еф1рних олш м'-яш перцево! та куркуми.
рА 173 —
150 —
FID2 е. CDC30^DC134203B0303. D)
Ii


e ю is го ге min
Рис. 3. Хроматограма випробовуваного розчину в умовах юльюсного визначення еф1рних олш м'-яти перцево! та куркуми.
ряд колонок i3 макроголом 20 000 Р, наприклад, DB-WAX, НР-WAX. Найкращi значення коефiцieнтiв роздь лення тшв Р-турмерону i а-турмерону, Ar-турмерону i Р-турмерону, числа теоретичних таршок, розрахованого за тком ментолу, параметр1 В придатносп хроматогра-ф1чно! системи отримали на колонщ ф1рми Agilent, HP-Innowax, 19091N-133. На рис. 2, 3 наведет хроматограми розчину пор1вняння i випробовуваного розчину, що одержат зпдно з запропонованою методикою з колонкою HP-Innowax, 19091N-133.
За результатами хроматографування розчину пор1в-няння розрахували деяш хроматографiчш характеристики шшв речовин (табл. 1), що вказують на придатнють хроматографiчноl системи [4].
Таблиця 1
Хроматографiчнi характеристики niKiB ментолу, а -турмерону, р -турмерону i Ar-турмерону в умовах кiлькiсного визначення
Речовина Час утримування, хв Коефiцieнт роздтення Коефiцieнт симетрп Число теоретичних тарiлок
Ментол 8,3 — 1,1 57 850
а-турмерон 19,2 3,8 0,9 601 587
?-турмерон 20,7 0,9 984 455
?-турмерон 20,7 1,6 0,9 984 455
Аг-турмерон 21,0 0,8 1 086 300
Ефiрнi олл м'-яти та куркуми пропонуемо вдентифь кувати в умовах кшьшсного визначення за збiгом чаав утримування основних пiкiв на хроматограш випробовуваного розчину з часами утримування птв ментолу та 3 турмерошв на хроматограмi розчину порiвняння.
Отже, для шентифтацп та кшькюного визначення ефiрних олiй м'-яти перцево! та куркуми пропонуемо таку методику.
Методика iдентифiкацii та юльюсного визначення ментолу та турмеротв у лiкарському засобi
Випробовуваний розчин. У центрифужну пробiрку зважували 500 мг порошку розтерто! капсульно! маси, додавали 10 мл етанолу 96% Р, штенсивно струшували протягом 5 хв, витримували в ультразвуковш банi про-тягом 5 хв i центрифугували зi швидк1стю 5000 об/хв протягом 5 хв- надосадову рвдину фiльтрували в мiрну колбу мютшстю 25 мл через фшьтр «бша стрчка» iз 3 г натрш сульфату безводного Р, попередньо змоченого етанолом 96% Р. Екстракцш повторювали двiчi по 6 мл етанолу 96% Р у цих же умовах, фшьтрати об'-еднували. Фшьтр iз натрiй сульфатом промивали 2 мл етанолу 96% Р, до отриманого розчину додавали 2,0 мл розчину внутрiшнього стандарту, перемшували та доводили до позначки етанолом 96% Р.
Розчин порiвняння. 72,0 мг СЗ куркуми оли i 45,0 мг СЗ ментолу розчиняли в етанолi 96% Р i доводили об'-ем розчину до 50,0 мл цим же розчинником. 5,0 мл отрима-ного розчину i 2,0 мл розчину внутршнього стандарту доводили етанолом 96% Р до 25,0 мл, перемшували.
Розчин внутрiшнього стандарту. 100,0 мг 1-триде-канола розчиняли в етанолi 96% Р i доводили об'-ем розчину етанолом 96% Р до 50,0 мл.
Контрольний розчин. Етанол 96% Р.
Колонка:
— матерiал: кварц-
— розмiр — 30 м х 0,25 мм-
— нерухома фаза — макрогол 20 000 Р (товщина шару 0,25 мкм) —
— газ-носш: гелш для хроматографп Р-
— лшшна швидшсть газу-носiя — 1,5 мл/хв-
— подiл потоку — 1: 1.
— температуру колонки програмували: початкова -100°С, попм И пiдвищували зi швидшстю 5°С/хв до 180 °C, витримували протягом 5 хв, згодом пiдвищували температуру до 220 °C зi швидк1стю 10°С/хв i витримували протягом 3 хв-
— температура блоку вводу проб — 220 °C. -
— температура детектора — 250 °C. -
— детектор — полум'-яно-юшзацшний.
Хроматографували по 1 мкл контрольного розчину,
розчину порiвняння i випробовуваного розчину.
Порядок виходу пiкiв на хроматограмi розчину по-рiвняння: етанол, ментол, 1-тридеканол, а-турмерон, Р-турмерон, Аг-турмерон.
Придaтнiсть хромaтогрaфiчно! системи:
• коефвденти роздiлення пiкiв а-турмерону i Р-турмерону, Аг-турмерону i р-турмерону, отрима-нi для розчину порiвняння, повиннi бути не менше шж 1,0-
• число теоретичних таршок, що розраховане за пiком ментолу на хроматограш розчину порiвняння, мае бути не менше шж 10 000-
• вщносне стандартне ввдхилення, що розраховане за вiдношенням площ пiкiв ментолу або суми площ а-турмерону, Р-турмерону, i Аг-турмерону до площi пiку 1-тридеканолу, повинне вщповщати вимогам
ДФУ
Вмiст ментолу (Х) у кaпсулi в мг розраховують за
формулою:
В, • т" • 25 • 5 • Ь • Р В. • т0 • Ь • Р
X = --0-= -,
В0 • т1 • 50 • 25 • 100 В0 • т1 • 1000
де В1 — середне значения в1дношення площi пiку ментолу до площi пiку 1-тридеканолу (внутрiшнiй стандарт), розраховане з хроматограм випробовуваного розчину-
В0 — середне значення вiдношення площi пiку ментолу до площi тку 1-тридеканола (внутрiшнiй стандарт), розраховане з хроматограм розчину порiвняння-
т1 — маса наважки капсульно! маси, мг-
т0 — маса наважки СЗ ментолу, взято! для приготування розчину порiвняння, мг-
Р — вмют ментолу (зазначений у сертифтап), у %-
Ь — середня маса вмiсту капсули, мг.
Вмют суми турмерошв (Х) в капсул в мг розраховують за формулою:
_!В1 • т0 • 25 • 5 • Ь • Р _ • т0 • Ь • Р
X =- = - ,
ХВ0 • т1 • 50 • 25 • 100В0 • т1 • 1000
де ТВ1 — середне значення ввдношення суми площ пшв Аг-турмерону, а-турмерону i Р-турмерону до площi пiку 1-тридеканолу (внутрiшнiй стандарт), розраховане з хроматограм випробуваного розчину-
ТР0 — середне значення ввдношення суми площ пiкiв Аг-турмерону, а-турмерону i Р-турмерону до площi пiку 1-тридеканолу (внутрiшнiй стандарт), розраховане з хроматограм розчину порiвняння-
т0 — маса наважки олл куркуми, що взята для приготування розчину порiвияння, мг-
т1 — маса наважки капсульно! маси, мг-
Р — вмют турмерошв, що вказаний у сергифгкап на СЗ куркуми оли, %-
Ь — середня маса вмюту капсули, мг.
Для вивчення селективносп щентифгкаци дослвдили поведiнку iнших компонентiв капсули. Встановили, що на хромaтогрaмi розчину плацебо ввдсутш пiки, як1 за часом утримування збiгaлися б iз тками а-турмерону, Р-турмерону, Аг-турмерону, ментолу чи 1-тридеканолу. Отже, iншi aктивнi фармацевтичш iнгредiенти капсули не впливають на кшьшсне визначення компонентiв ефiрних олш м'-яти та куркуми, тому запропонована методика е селективною.
У запропонованих умовах проaиaлiзувaли ефiрнi олi! та капсули, результата визначення компонента наведеш у таблицi 2.
Таблиця 2
Результати визначення ментолу i турмерошв методом газовоТ хроматографГГ (Р = 0,95, п = 5)
Зразок Вмiст, %
Ментол Сума турмеронiв
Олiя м'-яти перцевоТ 48,2±0,1 —
Олiя куркуми — 58,1±0,1
Зразок Вмiст, мг/капсулу
Капсули РЛЗ, серiя 10 612 3,05±0,04 2,78±0,05
Капсули РЛЗ, серiя 20 612 3,32±0,05 3,75±0,04
Капсули РЛЗ, серiя 10 113 2,51±0,04 2,64±0,04
Капсули РЛЗ, серiя 20 113 2,84±0,03 3,40±0,04
Капсули РЛЗ, серiя 30 513 3,62±0,04 3,41±0,03
Враховуючи результати визначення вмiсту ментолу i турмеронiв в ефiрних олiях i вмiсту цих олiй у готовому лшарському зaсобi, а також результати aнaлiзу РЛЗ, запропоновано к1льк1сний критерiй якостi капсул, яш дослiдили: вмiст ментолу — вщ 2,0 мг до 4,5 мг, вмют турмерошв — вщ 2,0 мг до 5,0 мг iз розрахунку на серед-ню масу вмюту капсули.
Висновки
1. Дослвдили хромaтогрaфiчнi умови iдентифiкaцi! та кшькюного визначення ефiрних олiй м'-яти i куркуми у багатокомпонентному лiкaрському зaсобi рослинного
Розробка методики? дентиф1кацИ'-та кльксного визначення еф1рних олйм'-ятиiкуркуми в багатокомпонентномуЛкарському…
походження, визначили оптимальш умови пробопвдготовки та анатзу методом газово! хроматографи. Як вден-тифiкацiйнi маркери при встановленнi тотожносп лiкарського засобу запропонували обрати ментол i турмерони.
2. Розробили методики вдентифшацп та к1льк1сного визначення ментолу, а-, в- i Аr-турмеронiв у лшарському засобi на основi екстракпв та ефiрних олiй м'-яти i куркуми методом газово! хроматографи.
Список л^ератури
1. Сур С. В. Методологiя оцшки якосп рослинних лжарських засобгв на тдстаы результапв, одержаних за допомогою сучасних аналггичних методгв / С. В. Сур // Фармацевтич-ний журнал. — 2002. — № 6. — С. 64−71.
2. Державна Фармакопея Украши / Державне тдприемство «Науково-експертний фармакопейний центр». — 1-ше вид.
— Х.: Р1РЕГ, 2001. — 556 с.
3. Смалюх О. Стандартизация багатокомпонентного рослин-ного лжарського засобу / О. Смалюх, С. Сур // Фармацев-тичний часопис. — 2014. — № 2(16). — С. 13.
4. Державна Фармакопея Украши / Державне тдприемство «Науково-експертний фармакопейний центр». — 1-ше вид.
— Доповнення 3. — Х.: Р1РЕГ, 2009. — 32 с.
5. Державна Фармакопея Украши / Державне тдприемство «Науково-експертний фармакопейний центр». — 1-ше вид.
— Доповнення 2. — Х.: Р1РЕГ, 2008. — 85 с.
6. WHO monographs on selected medicinal plants, Rhizoma Curcumae Longae. — Geneva: World Health Organization, 1999.
7. Patent Aplication Publicatin. Navarro et al. Pub. No.: US 2005/208 157 A1, Pub. Date Sep. 22. 2005, United States.
8. Quantitative determination of eight components in rhizome (Jianghuang) and tuberous root (Yujin) of Curcuma longa using pressurized liquid extraction and chromatography-mass spectrometry / N.Y. Qin, F.Q. Yang, Y.T. Wang, S.P. Li // Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. — 2007.
— Vol. 43. — C. 486−492.
9. European Pharmacopoeia 7.0. Peppermint oil, monograph 01/2008: 0405 — p. 1214.
References
1. Sur, S. (2002). Metodolohiia otsinky yakosti roslynnykh likarskykh zasobiv na pidstavi rezultativ, oderzhanykh za dopomohoiu suchasnykh analitychnykh metodiv [Methodology for evaluating the quality of herbal medicines on the basis of the results obtained by using modern analytical methods]. Farmatsevtychnyi zhurnal, 6, 64−71. [in Ukrainian].
2. (2001) Derzhavna Farmakopeia Ukrainy [State Pharmacopoeia of Ukraine] Kharkiv. [in Ukrainian].
3. Smaliukh, O., & amp- Sur, S. (2014) Standartyzatsiia bahatokomponentnoho roslynnoho likarskoho zasobu [Standardization of complex herbal medicine product]. Farmatsevtychnyi chasopys, 2(16), 13. [in Ukrainian].
4. (2009). Derzhavna Farmakopeia Ukrainy [State Pharmacopoeia of Ukraine] Kharkiv. [in Ukrainian].
5. (2008). Derzhavna Farmakopeia Ukrainy [State Pharmacopoeia of Ukraine] Kharkiv. [in Ukrainian].
6. (1999). WHO monographs on selected medicinal plants, Rhizoma Curcumae Longae. Geneva: World Health Organization.
7. (2005). Patent Aplication Publicatin. Navarro et al. Pub. No.: US 2005/208 157 A1, Pub. Date Sep. 22. 2005, United States.
8. Qin, N. Y., Yang, F. Q., Wang, Y. T., & amp- Li, S. P. (2007). Quantitative determination of eight components in rhizome (Jianghuang) and tuberous root (Yujin) of Curcuma longa using pressurized liquid extraction and chromatography-mass spectrometry. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 43, 486−492. doi: 10. 1016/j. jpba. 2006. 07. 034.
9. (2008). European Pharmacopoeia 7.0. Peppermint oil, monograph 01/2008: 0405.
BidoMocmi про автора:
Смалюх О. Г., начальник анаштично!'- лабораторп, дослщний центр ПАТ «Галичфарм», E-mail: osmalyuh@gmail. com. Сведения об авторе:
Смалюх О. Г., начальник аналитической лаборатории, опытный центр ПАО «Галичфарм», E-mail: osmalyuh@gmail. com. Information about author:
Smalyuh O.G., Chief of Analytical laboratory, Research Center, AC «Halychpharm», E-mail: osmalyuh@gmail. com.
Надшшла в редакщю 01. 12. 2014 р.

ПоказатьСвернуть
Заполнить форму текущей работой