Применение 2, 3-дихлор-1, 4-нафтохинона для спектрофотометрического определения ацетилцистеина в лекарственных препаратах

Тип работы:
Реферат
Предмет:
Медицина


Узнать стоимость

Детальная информация о работе

Выдержка из работы

Аналiз та стандартизацiя бiологiчно активних сполук та лiкарських форм
Analysis and standardization of biologically active substances and dosage forms
УДК 543. 42:615. 275. 074:547. 459. 5
А. О. Донченко, С. О. Васюк, К. П. Портна
Використання 2,3-дихлор-1,4-нафтохшону для спектрофотометричного визначення ацетилцистеТну
в лiкарських препаратах
Запор'-зький державний медичний унверситет
Ключовi слова:
спектрофотометрiя, ацетилцистеш, 2,3-дихлор-1,4-нафтохнон, кльксне визначення, валiдацiя.
Актуальною проблемою сучасного фармацевтичного аналiзу е створення ефектив-них та економiчних методик кiлькiсного визначення лжарських речовин. Мета роботи полягала в розробщ та вашдацц ново! спектрофотометрично! методики кiлькiсного визначення ацетилцистешу в лжарських формах. Встановили, що ацетилцисте! н реагуе iз 2,3-дихлор-1,4-нафтохшоном з утворенням забарвленого продукту реакцп з максимумом абсорбцп при 425 нм. Запропонована методика вiдповiдае вимогам Державно! Фармакопе! Укра! ни щодо методик кiлькiсного анатзу лiкарських речовин. Результати дослвдження свiдчать, що методика е високочутливою, точною, простою у виконаннi та придатною для використання в лаборагх^ях Державно! шспекцп з контролю якостт лжарських речовин, а також вщдшах технiчного контролю хiмiко-фармацевтичних тдприемств.
Применение 2,3-дихлор-1,4-нафтохинона для спектрофотометрического определения ацетилцистеина
в лекарственных препаратах
А. А. Донченко, С. А. Васюк, Е. П. Портная
Актуальной проблемой современного фармацевтического анализа является создание эффективных и экономичных методик количественного определения лекарственных веществ. Цель работы — разработка и валидация новой спектрофотометрической методики количественного определения ацетилцистеина в лекарственных формах. Установлено, что ацетилцистеин реагирует с 2,3-дихлор-1,4-нафтохиноном с образованием окрашенного продукта реакции с максимумом абсорбции при 425 нм. Предложенная методика отвечает требованиям Государственной Фармакопеи Украины, предъявляемым к методикам количественного анализа лекарственных веществ. Результаты исследования показывают, что методика является высокочувствительной, точной, простой в выполнении и пригодной для использования в лабораториях Государственной инспекции по контролю качества лекарственных веществ, а также отделах технического контроля химико-фармацевтических предприятий.
Ключевые слова: спектрофотометрия, ацетилцистеин, 2,3-дихлор-1,4-нафтохинон, количественное определение, валидация.
Актуальные вопросы фармацевтической и медицинской науки и практики. — 2015. — № 1 (17). — С. 36−39
Spectrophotometric determination of acetylcysteine in pharmaceutical formulations using 2,3-dichloro-1,4-napthoquinone
A. O. Donchenko, S. O. Vasyuk, K. P. Portna
Creation of effective and economical methods for quantitative determination of drugs is an actual problem of modern pharmaceutical analysis.
The aim of research was the development and validation of spectrophotometric method for acetylcysteine assay in pharmaceutical formulations.
Methods and results. The colored products were quantified spectrophotometrically at 425 nm with 2,3-dichloro-1,4-napthoquinone. The proposed method is valid according to the validation requirements of Ukrainian Pharmacopeia. The results of the study showed that the proposed method is sensitive, simple, accurate and it is suitable for using in laboratories of the State Inspection for Quality Control of Medicines and QCD of the chemical-pharmaceutical enterprises.
Key words: Spectrophotometry, Acetylcysteine, 2,3-dichloro-1,4-napthoquinone, Analysis, Validation Studies.
Current issues in pharmacy and medicine: science and practice 2015- № 1 (17): 36−39
Ацетилцистеш (N-Ацетил-Ь-цистеш) e ацети-льованим BapiaHTOM амшокислоти L-цистешу. Використовуеться у кштчнш практищ понад 30 рошв передуам як муколгтичний 3aci6.
Муколгтичний ефект препарату мае xiMi4^ природу. Унаслвдок вшьно! сульфпдрильно! групи ацетилцистеш розривае дисульфвдш зв'-язки кислих муюполiсaхapидiв, що призводить до деполiмеpизaцil мукопротещв i до зменшення в'-язкост слизу, та сприяе ввдхаркуванню й вщходженню бpонхiaльного секрету [1].
iM муколгтично! до, доведена висока антиоксидант-на активнють ацетилцистешу, що пов'-язана з активащею системи внутршньоклттинного глутатюну, а це значно
розширюе спектр його використання. Препарати ацетилцистешу призначають для профшактики ускладнень хiмiотерапil та променево! терапи злояк1сннх захворю-вань, лiкування ВIЛ-iнфекцiй, серцевих захворювань [2].
Для визначення ацетилцистешу в фармацевтичних препаратах використовують електрохiмiчнi [3], флуоро-метричнi [4], хемiлюмiнесцентнi [5] та високоефективш рiдиннi хроматографiчнi (ВЕРХ) методи [6,7].
Британська та Свропейська фармакопе! рекомендують вмiст основно! речовини в субстанци ацетнлцисте1ну визначати методом йодиметри, у розчинi для iн'-екцiй — методом ВЕРХ [8,9]. Фармакопея США описуе метод ВЕРХ з УФ-детектором [10]. Деяш з цих методiв е до-
волi складними у виконанш або потребують дорогого устаткування. Iншi вiдомi методи характеризуються недостатньою селектившстю та чутливiстю. Тому акту-альним залишаеться створення нових високочутливих методик кiлькiсного визначення ацетилцистешу. Саме спектрофотометричний метод аналiзу е найширше ви-користовуваним, економiчним i доступним методом фармацевтичного аналiзу для бшьшосп лабораторiй контролю якостi.
Мета роботи
Розробка та валвдащя методики кшьшсного визначення ацетилцистешу в лшарських формах на основi реакцп з 2,3-дихлор-1,4-нафтохiноном.
Матерiали i методи дослвдження
Протягом експерименту використали субстанцш ацетилцистешу- лiкарськi препарати — порошок для орального розчину «АЦЦ 200″ 200 мг (Салютас Фарма ГмбХ, ФРН) серп 50 026 151, таблетки шипучi „Флуiмуцил“ 600 мг (Замбон С. П. А., Гг^) та „аЦц ЛОНГ“ 600 мг (Салютас Фарма ГмбХ, ФРН) серш 321 284 та БИ2740 ввдповщно, розчин для iн'-екцiй „Флуiмуцил“ 100 мг/мл (Замбон С. П. А., Iталiя) серп 28 002 492.
Як реактив i розчинник використовували 2,3-дихлор-1,4-нафтохiнон та ДМФА квалiфiкацil „х.ч.а.“.
Аналiтичне обладнання: спектрофотометр 8ресоМ 200, ваги електроннi ЛБТ-120−5БМ, водяна баня МеттеП WNБ 7−45, мiрний посуд класу Л, кварцовi кювети iз шаром завтовшки 1 см.
Загальна методика тльтсного визначення ацетилцистешу. 1,00 мл 0,16% стандартного розчину ацетилцистешу обробляли 0,50 мл 4% розчину 2,3-дихлор-1,4-нафтохшону, перемiшували. Реакцшну сумш назвали 10 хв на водянш банi за температури 95 °C. Пiсля охолодження розчин кiлькiсно переносили в мiрну колбу емнiстю 25,00 мл i доводили розчином ДМФА до позначки. Оптичну густину вимiрювали на фонi компенсацiйного розчину, що не мiстить дослщжу-вано! речовини, при 425 нм.
Визначення ацетилцистешу в лгкарських формах
Методика тльтсного визначення ацетилцистешу в порошку для орального розчину. Весь вмют пакетика (0,2 г/3,0 г) переносили в мрну колбу на 100,0 мл, доводили розчином ДМФА до позначки, перемшували. Надалi 0,80 мл розчину переносили в мiрну колбу на 25,00 мл.
Методика тльтсного визначення ацетилцистешу в шипучих таблетках. _Шипучу таблетку, що мютить 0,60 г ацетилцистешу, вмщували в мiрну колбу на 500,0 мл, доводили розчином ДМФА до позначки, отриманий розчин ф^трували. 1,40 мл розчину вмщували у мiрну колбу на 25,00 мл.
Методика тльтсного визначення ацетилцистешу в розчинI для 1н'-екц1й. 1,00 мл ш'-екцшного розчину вмь щували в мiрну колбу емшстю 100,0 мл та доводили розчином ДМФА до позначки. 1,60 мл розчину переносили в мiрну колбу на 25,00 мл.
Надалi розчини обробляли 0,50 мл 4% розчину 2,3-дихлор-1,4-нафтохшону, назвали 10 хв на водянш баш за температури 95 °C, охолоджували та доводили розчином ДМФА до позначки. Оптичну густину вимь рювали на фош компенсацшного розчину. Розрахунок здшснили за типовою формулою. Результати та ix обговорення Для досягнення високо1 ввдтворюваносп та правиль-носп результапв спектрофотометричного аналiзу велике значення мае оптимальний вибiр умов проведения ана-лiтичних реакцiй: концентрацii речовин, що реагували, температури, часу на^вання, розчинника.
Експериментально встановлено, що реагент взаемодiе з ацетилцистеiном у середовищi ДМФА з утворенням забарвленоi сполуки з максимумом абсорбцii 425 нм. На рис. 1 наведена залежшсть оптичноi густини розчинiв, котрi дослвдили, ввд кiлькостi доданого реагенту.
А
0,6
350 400 450 500 550 600 650 700 750 Рис. 1. Залежшсть onmHHOi густини ввд кшькосл реагенту (1 — 0,50 мл- 2 — 1,00 мл- 3 — 1,50 мл).
Також дослвдження вказали на необхщшсть на^вання реакцiйноi сумiшi протягом 10 хв за температури 95°С
(рис. 2). А 1,2 !
350 400 450 500 550 600 650 700 750
Рис. 2. Залежшсть оптично1 густини вщ часу нагршання (1 — 5 хв- 2 — 10 хв- 3 — 15 хв).
Межа виявлення за оптимальних умов становить 0,88 мкг/мл, що сввдчить про високу чутливють реакцп. Визначення вал1дацшних характеристик Уа аналггичш методики i випробування, що включеш в нормативнi документи, мають бути валщованими.
А. О. Донченко, С. О. Васюк, К. П. Портна
Валвдацш методики виконали вщповщно до вимог Державно! Фармакопе! Укра! ни (ДФУ), зпдно зi стан-дартизованою процедурою ватдацд методом стандарту [11]. Встановили основнi валщацшш характеристики: лiнiйнiсть, прецизiйнiсть, правильнiсть, робасшсть i дiапазон застосування.
ЛШйтсть визначали у межах концентрацш, в яких спостерiгаeться пiдпорядкування закону Бера -4,48−8,40 мг/100мл. За результатами побудували графiк залежностi оптично! густини ввд концентраци ацетил-цистсшу (рис. 3).
А
1,1 п
1,0 —
0,9 ¦
0,8 —
0,7 —
0,6
С (мг/100 мл)
4,5 5,0 5,5 6,0 6,5 7,0 7,5 8,0 Рис. 3. Графж залежност оптично! густини вщ концентраци ацетилцистешу.
Параметри лшшно! залежностi розрахували за до-помогою регресiйного аналiзу методом найменших квадратiв (табл. 1).
Розраховаш числовi показники сввдчать, що параметри лшшно! залежносп вiдповiдають усiм вимогам ДФУ. Диапазон застосування методики становить 70−130%.
Прецизтнкть визначена на рiвнi зб1жност! Проаналь зували 9 проб, концентраци яких рiвномiрно розподiленi в дослщжуваному дiапазонi методики (плюс розчин по-рiвняння, концентрацiя якого близька до номiнально!). Зпдно з вимогами ДФУ до прецизiйностi, методика е точною на рiвнi збiжностi, якщо однобiчний довiрчий iнтервал (Дх) не перевищуе максимальну припустиму невизначенiсть аналiзу (ДЛ8%). Данi, що наведенi в таблиц12, сввдчать про точнiсть розроблено! методики.
Для встановлення правильностг методики використо-вували метод добавок: до трьох рiвних проб лiкарсько! форми додавали рiзнi кiлькостi стандартного розчину ацетилцисте! ну та тричi аналiзували. Результати визна-чень е правильними, оскiльки вiдсутня значуща систематична похибка, тобто справжне значення величини потрапляе у встановлений довiрчий iнтервал (табл. 3).
Робаснть оцшили на стадi! розробки методики. Для цього дослвдили стабiльнiсть аналiтичних розчишв у часi. Випробовуваний розчин i розчин порiвняння е стiйкими протягом щонайменше 30 хв.
Таблиця 1
Числовi показники лшшноТ залежностi
Величина Значення Критерп Висновок
b±(s») 0,1300±(0,0002) — -
а±(в.) 0,0003±(0,0005) |а|& lt-Аа=(95%-3)за=0,117 вщповщае
М%) 0,480 & lt-AAs (%)/f (95%-3)=1,360 вiдповiдаe
r 1,0000 & gt-0,9560 вiдповiдаe
Таблиця 2
Визначення збiжностi результатiв кшькюного визначення ацетилцисте'-Гну в лiкарських формах (n=9, р=0,95)
Лiкарська форма Вмiст Метролопчж характеристики
X S RSD, А Ал,%
«АЦЦ 200», порошок для орального розчину 0,2 г 0,196 2,5210−3 1,28 2,39 3,20
«АЦЦ ЛОНГ», таблетки шипучi 0,6 г 0,597 8,8210−3 1,47 2,74 3,20
«Флуiмуцил», таблетки шипучi 0,6 г 0,595 3,3710−3 0,566 1,05 3,20
«Флуiмуцил», розчин для ш'-екцш 100 мг/мл 0,103 4,4110−4 1,28 2,38 3,20
Таблиця 3
Результати визначення правильное^ методом добавок
Лiкарський препарат AZ RSD aZ |Z- 100|
«АЦЦ 200», порошок для орального розчину 99,31 1,50 0,935 0,690
«АЦЦ ЛОНГ», таблетки шипучi 99,23 1,27 0,791 0. 770
«Флуiмуцил», таблетки шипучi 101,09 1,76 1,09 1,09
«Флуiмуцил», розчин для iн'-eкцiй 100,37 1,48 0,917 0,370
Висновки
Експериментально встановили оптимальш умови nepe6iry реакци ацетилцистешу i3 2,3-дихлор-1,4-нафтохiноном: названия реакцiйноi сyмiшi протягом 10 хв за температури 95 °C у середовищi ДМФА.
Розроблена та валiдована методика кшьысного спектрофотометричного визначення ацетилцистешу в л1карських формах — порошку для орального розчину, шипучих таблетках, розчишв для iн'-eкцiй.
Список л1тератури
1. Машковский М. Д. Лекарственные средства / М. Д. Маш-ковский. — 16-е изд., перераб., испр. и доп. — М.: Новая Волна, 2012. — 1216 с.
2. Симонова О. И. Применение ацетилцистеина для лечения респираторных заболеваний у детей младшего возраста / О. И. Симонова, О. И. Горинова // Фарматека. — 2014. -№ 1. — С. 87−90.
3. Kukoc-Modun L. Spectrophotometric determination of N-Acetyl-L-Cysteine and N-(2-Mercaptopropionyl)-Glycine in pharmaceutical preparations / L. Kukoc-Modun, N. RadiC // International Journal of Analytical Chemistry. — 2011. -№ 2011. — Р. 1−6.
4. Fluorimetric determination of some sulfurcontaining compounds through complex formation with terbium (Tb+3) and uranium (U+3) / E.A. Taha, N.Y. Hassan, F.A. Aal, L.E.S.A. Fattah // Journal of Fluorescence. — 2007. — Vol. 17.
— № 3. — Р. 293−300.
5. Li H. Sensitive chemiluminescence determination of three thiol compounds based on Cu (II)-catalyzing luminol reaction in the absence of an oxidant / H. Li, J. Du // Analytical Letters.
— 2009. — Vol. 42. — № 13. — P. 2131−2140.
6. Jyothi N. Development and validation of a new RP-HPLC method for simultaneous estimation of N-Acetylcysteine and L-Arginine in combined dosage form / N. Jyothi, S. Pasha // Oriental Journal of Chememistry. — 2014. — Vol. 30. — № 3.
— P. 1371−1378.
7. Development and validation of RP-HPLC method for the estimation of N-Acetylcysteine in wet cough syrup / S. Sana, A. Rajani, А. Sumedha et al. // International Journal of Drug Development & amp- Research. — 2012. — Vol. 4. — № 2. -P. 284−293.
8. British Pharmacopeia. — Vol. 1−4. — London: The Stationary Office, 2009. — 10 952.
9. United States Pharmacopeia 36. — USP Convention Inc. -Rockville, 2013. — 5640.
10. European Pharmacopoeia. — 6th^d. Council of Europe. -Strasbourg, 2007. — 3857.
11. Державна Фармакопея Укра1ни. — 1-е вид. — Харюв: Державне тдприемство «Науково-експертний фарма-копейний центр», 2008. — Доповнення 2. — 2008. — 620 с.
Довели, що опрацьована методика ввдповвдае вимогам ДФУ за основними валщацшними характеристиками: лшшшстю, дiапазоном застосування, презицшшстю, правильшстю та робасшстю.
Запропонована методика е високочутливою, економiч-ною, експресною, не потребуе складного апаратурного оснащення та е придатною для використання в лабора-торiях Державно! шспекци з контролю якосп лжарських речовин, а також вщдшах техшчного контролю хiмiко-фармацевтичних тдприемств.
References
1. Mashkovskij, M. D. (2012). Lekarstvennye sredstva[Drugs]. Moscow: Novaya Volna. [in Russian].
2. Simonova, O. I., & amp- Gorinova, O. I. (2014). Primenenie acetiltsisteina dlya lecheniya respiratornyikh zabolevaniy u detej mladshego vozrasta [The use of acetylcysteine for the treatment of respiratory diseases in young children]. Farmateka, 1(274), 87−90.
3. Kukoc-Modun, L., & amp- Radic, N. (2011). Spectrophotometric determination of N-Acetyl-L-Cysteine and N-(2-Mercaptopropionyl)-Glycine in pharmaceutical preparations. International Journal of Analytical Chemistry, 2011, 1−6. doi: 10. 1155/2011/140 756.
4. Taha, E., Hassan, N., Aal, F., & amp- Fattah, L. (2007). Fluorimetric determination of some sulfur containing compounds through complex formation with Terbium (Tb+3) and Uranium (U+3). Journal of Fluorescence, 17(3), 293−300. doi: 10. 1007/ s10895−007−0172−6.
5. Li, H., & amp- Du, J. (2009). Sensitive chemiluminescence determination of three thiol compounds based on Cu (II)-catalyzing luminol reaction in the absence of an oxidant. Analytical Letters, 42(13), 2131−2140. doi: 10. 1080/32 710 903 082 754.
6. Jyothi, N., & amp- Pasha, S. (2014). Development and validation of a new RP-HPLC method for simultaneous estimation of N-Acetylcysteine and L-Arginine in combined dosage form. Oriental Journal of Chememistry, 30(3), 1371−1378.
7. Sana, S., Rajani, A., Sumedha, N., Pravin, P., & amp- Shripad, N. (2012). Development and validation of RP-HPLC method for the estimation of N-Acetylcysteine in wet cough syrup. International Journal of Drug Development & amp- Research, 4(2), 284−293.
8. (2009). British Pharmacopeia. London: The Stationary Office, 109−113.
9. (2013). United States Pharmacopeia. Rockville: USP Convention Inc., 2334.
10. (2007). European Pharmacopoeia. Strasbourg: Council of Europe, 1100.
11. (2008). Derzhavna farmakopeia Ukrainy. Dopovnennia 2. [Ukrainian Pharmacopoeia. Addition 2]. Kharkiv: Naukovo-ekspertniy farmakopeyniy tsentr. [in Ukrainian].
BidoMocmi про aemopie:
Донченко А. О., ст. лаборант каф. аналiтичноi х1ми, Запор1зький державний медичний ушверситет, E-mail: anastasia2013@inbox. ru. Васюк С. О., д. фарм. н., професор, зав. каф. аналгтично!'- хiмii, Запорiзький державний медичний ушверситет. Портна К. П., очний асшрант каф. аналгтично!'- хiмii, Запорiзький державний медичний ушверситет. Сведения об авторах:
Донченко А. А., ст. лаборант каф. аналитической химии, Запорожский государственный медицинский университет, E-mail: anastasia2013@inbox. ru.
Васюк С. А., д. фарм. н., профессор, зав. каф. аналитической химии, Запорожский государственный медицинский университет. Портная Е. П., очный аспирант каф. аналитической химии, Запорожский государственный медицинский университет. Information about the authors:
Donchenko A.O., Laboratory Assistant of the Department of Analytical Chemistry, Zaporizhzhia State Medical University, E-mail: anastasia2013@inbox. ru.
Vasyuk S.O., D. hab., Professor, Head of the Department of Analytical Chemistry, Zaporizhzhia State Medical University. Portna K.P., Postgraduate of the Department of Analytical Chemistry, Zaporizhzhia State Medical University.
Надшшла в редакщю 20. 01. 2015 р.

ПоказатьСвернуть
Заполнить форму текущей работой