Патогистологические и иммуногистохимические особенности прогрессии хронического вирусного гепатита в

Тип работы:
Реферат
Предмет:
Медицина


Узнать стоимость

Детальная информация о работе

Выдержка из работы

Оригшальш дослiдження Original research
УДК 616. 36−002−039. 36−092. 18
М. А. Шишкш
Патогiстологiчнi та iMyH0ricT0xiMi4Hi особливостi прогреем хрошчного BipycHoro гепатиту В
Запор'-зький державний медичний унверситет
Ключовi слова: вiрусний гепатит В хрончний, печнки 3ip4acma штина, фбробласти.
З метою доповнити й узагальнити морфогенетичш критерй nporpeeii хрошчного BipycHoro гепатиту В на n^^aBi патопстолопчних, iмунoгiстoхiмiчних i комп'-ютерно-морфометричних дослвджень тpeпaнoбioпciй печшки хворих та aнaлiзy ixmx клiнiкo-бioхiмiчних даних для використання в пaтoлoгoaнaтoмiчнiй дiaгнocтицi й прогаозуванн nepe6iry хвороби здiйcнили обстеження 50 пащенпв. Встанови-ли, що найточнше стушнь вipycнoгo шфжування гепатоципв у трепанобюптатах печшки хворих на хрошчний вipycний гепатит В визначае iмyнoгicтoxiмiчнe вияв-лення в них HBsAg i HBcAg, «матово-склотадбш» гепатоцити, яю виявляють про-тягом мжроскопи, неповшстю показують ступшь шфжування гепатоципв. Наявшсть прямого, високого кореляцшного зв'-язку мпж кiлькicтю iнфiкoвaниx гeпaтoцитiв iз HBsAg та шдексом пстолопчно! aктивнocтi гепатиту дае тдставу використовувати iмyнoгicтoxiмiчнe маркування HBsAg на paннix етапах дiaгнocтики для прогнозу-вання можливо1 прогресп xpoнiчнoгo гепатиту В у хворих iз нормальним ргвнем трансамшаз у кровг
Патогистологические и иммуногистохимические особенности прогрессии хронического вирусного гепатита В
М. А. Шишкин
С целью дополнить и обобщить морфогенетические критерии прогрессии хронического вирусного гепатита В на основе пато-гистологических, иммуногистохимических и компьютерно-морфометрических исследований трепанобиопсий печени больных и анализа их клинико-биохимических данных для использования в патологоанатомической диагностике и прогрессировании течения болезни обследовали 50 пациентов. Установлено, что наиболее точно степень вирусного инфицирования гепатоцитов в трепанобиоптатах печени больных хроническим вирусным гепатитом В определяет иммуногистохимическое обнаружение в них HBsAg и HBсAg, «матово-стекловидные» гепатоциты, которые отмечают при микроскопии, неполно отражают степень инфицирования гепатоцитов. Наличие прямой, высокой корреляционной связи между количеством инфицированных гепатоцитов с наличием HBsAg и индексом гистологической активности гепатита дает основание использовать иммуногистохимическое маркирование HBsAg на ранних этапах диагностики для прогнозирования возможной прогрессии хронического вирусного гепатита В у больных с нормальным уровнем трансаминаз в крови.
Ключевые слова: вирусный гепатит В хронический, печени звездчатые клетки, фибробласты.
Актуальные вопросы фармацевтической и медицинской науки и практики. — 2015. — № 1 (17). — С. 93−95
Pathohistological and immunohistochemical features of chronic viral hepatitis B
M. A. Shishkin
Aim. The paper contains the results of a comprehensive study of pathohistological and immunohistochemical liver biopsies of 50 patients with chronic hepatitis B in relation to clinical and biochemical parameters to improve the most significant microscopic criteria of chronic hepatitis B progression in liver trepanobioptates of the patients.
Methods and results. It has been established that most accurate definition of the degree of viral infection of hepatocytes in the liver trepanobioptates of the patients with chronic viral hepatitis B could be made by the immunohistochemical detection of HBsAg and HBsAg, «dull glasslike» hepatocytes revealed by microscopy not fully reflect the degree of hepatocytes'- infection.
Conclusion. The presence of direct, high correlation between the number of infected hepatocytes with HBsAg and histological hepatitis activity index gives reason to use immunohistochemical labelling of HBsAg on the early stages of diagnostics in order to predict the possible progression of chronic viral hepatitis B in patients with normal level of transaminase.
Key words: Hepatitis B Chronic, Liver Stellate Cells, Fibroblasts.
Current issues in pharmacy and medicine: science and practice 2015- № 1 (17): 93−95
Bipycний гепатит B — захворювання, що надзвичай-но поширене у свт. Вipyc гепатиту В часто пере-даеться в перинатальному перюда, що попм призводить до хротчного стану хворого. Хвopi на хрончний гепатит В мають ввдносно високий piвeнь вipycy у кров^ а також шших рщин оргашзму. Вipyc гепатиту B, як вважають, передаеться у сто paзiв часпше, шж В1Л, i в десять ра-зiв б№ше, н1ж гепатит С. Найбшьш ефективний шлях пepeдaчi гепатиту В — статевий i парентеральний, менше — внаслшок контакту слизових оболонок iз зараженою кров'-ю. Перинатальний шлях вщ мaтepi до дитини за-лишаеться поширеною формою пepeдaчi вipycy [1].
У свт понад 2 млрд людей мають серолопчш ознаки
поточного або попереднього iнфiкyвaння вipycoм гепатиту В (HBV) [2].
Гепатоцелюлярна карцинома (ГЦК) е одшею з п'-яти провшних причин смерт ввд раку в людини. Вipyc гепатиту B е найбшьш поширеним збудником ГЦК у свт, особливо в районах, де поширеш шфекцп HBV: Азiя, Африка, швденна частина Схшно! та Центрально! ?вропи, Близький Схш [3].
Незважаючи на сучасш методи л^вання та дiaгнoc-тики вipycнoгo гепатиту В, учен [4−6] шукають шляхи виршення проблеми морфолопчно! дiaгнocтики цього складного захворювання.
Серед мшроскошчних критерпв прогресп хротчного вipycнoгo гепатиту В (ХВГВ) найменш вивченим е
© М. А. Шишкш, 2015
93
М. А. Шишюн
морфогенез iMyHHoro кшнгу гепатоципв i деструкцй'- печшки iмyноцитами портальних тракпв, не встановле-на роль активованих 3ip4acrax клiтин Купфера в цьому процесi, а також не з'-ясовaнi нaслiдки iмyноклiтинно! деструкцй'- для прогреси хвороби.
Мета роботи
Доповнити й удосконалити морфогенетичнi критери прогреси хронiчного вiрyсного гепатиту В на пiдстaвi пaтогiстологiчних, iмyногiстохiмiчних i комп'-ютерно-морфометричних дослiджень трепaнобiопсiй печшки хворих та aнaлiзy! хшх клiнiко-бiохiмiчних даних для використання в пaтологоaнaтомiчнiй дiaгностицi й про-гнозyвaннi переб^ хвороби.
Пацieнти i методи дослщження
У дослвдження залучили 40 хворих на ХВГВ (11 ж1нок i 29 чоловiкiв), група умовного контролю — 10 (4 жшки i 6 чоловiкiв) пaцieнтiв i3 транзиторними гепатозами без клiнiко-бiохiмiчних i патопстолопчних ознак вiрyсного ураження печiнки.
Ддагностично-патоморфолопчш маркери вiрyсного й iмyноклiтинного ушкодження печiнки, а також морфогенез важкого фiброзy печiнки визначили у трепанобь опсiях печiнки хворих.
Голками Uni-Cut i BioCut 14−16G тд контролем апара-та УЗД Conbizon-320−5 Ultima-Pro-30 iз використанням секторального й конвексного датчиков виконували через-шшрну трепaнобiопсiю печiнки.
Для пaтоморфологiчного й iмyногiстохiмiчного досль дження стовпчики трепанобюптапв печiнки фiксyвaли в забуференному 10% формалш й заливали в парафш. Дослвджували серiйнi зрiзи завтовшки 3 д.
Для мжроскошчного дослiдження пaрaфiновi зрiзи трепaнобiоптaтiв печiнки фарбували гематоксилшом та еозином, а також за трибарвним методом Масона i ван Пзона.
Стyпiнь aктивностi та прогреси хрошчного вiрyсного гепатиту в бюптатах печiнки пaцieнтiв оцiнювaли шляхом розрахунку iндексy пстолопчно! aктивностi 1ГА за R.G. Knodell i ствавт. [7]- вирaзнiсть фiброзy печiнки визначали у градацп METAVIR i V. Desmet i спiвaвт. [8] у сершних пaрaфiнових зрiзaх, що забарвлеш за ван Гiзоном i Масоном.
1нфшування гепaтоцитiв вiрyсом гепатиту В визначали в парафшових зрiзaх непрямим iмyнопероксидaзним методом iз використанням антитш до HBsAg i HBсAg та системи вiзyaлiзaцi! DAKO EnVision. Для визначення кiлькостi гепaтоцитiв, що шфшоваш вiрyсом гепатиту В, пiдрaховyвaли число HBsAg-позитивних гепaтоцитiв в умовному стандартному полi зору мiкроскопa при збшьшенш 400.
Методом прямо! комп '-ютерно! морфометрп в мшро-скопi Axioplan 2 з видеокамерою DXC-151A i пакетом програм KS 200 оцшювали площi лiмфоцитaрно! шфшь-трацй'- й фiброзy портальних трaктiв.
Кiлькiснi результати опрацювали методом вaрiaцiй-ного статистичного aнaлiзy середнiх величин на персональному комп'-ютерi «Sempron 2800» iз використанням програмного пакета STATISTICA 6.0 for Windows iз наступним aнaлiзом резyльтaтiв. Обчислювали серед-ню арифметичну величину (М), середне квадратичне ввдхилення (SD) i стандартну помилку середньо! ариф-
метично! (m). Вiрогiднiсть ввдмшностей величин, як1 по-рiвнювaли, визначали за допомогою критерш Стьюдента (Т). Достовiрною мiнiмaльною вiрогiднiстю вважали р& lt-0,05. Виконали кореляцiйний aнaлiз iз використанням коефщента кореляцй Пiрсонa ® [9,10].
Результати та Тх обговорення
При мiкроскопiчномy дослiдженнi серiйних псто-лопчних зрiзiв бiоптaтiв печiнки виявили характерш пaтогномонiчнi мiкроскопiчнi ознаки ХВГВ: «шсочш» й вaкyолiзовaнi ядра гепaтоцитiв, «матово-склоподабш» ге-патоцити, рiдкiснi й малоштенсивш внyтрiшньоклiтиннi холестази, тiльця Кayнсiльменa та вогнища iмyноклi-тинного кiлiнгy гепатоципв, iмyноклiтиннi iнфiльтрaти в портальних трактах, а також так зваш iмyноклiтиннi «стyпiнчaстi некрози» — iмyноклiтиннi шфшьтрати в портальних трактах, якi проникали через пограничну пластинку в часточки печiнки.
Вiдповiдно до iндексy пстолопчно! aктивностi ХВГВ iз мiнiмaльною актившстю (1ГА 1−3 бали) iдентифiкy-вали у бюптатах печшки у 35,8% пащенлв, гепатит зi слабко вираженою aктивнiстю (1ГА 4−8 бaлiв) — у 47,0% хворих, гепатит iз помiрною aктивнiстю (1ГА 9−12 бaлiв) — у 8,6% осiб, гепатит iз вираженою aктивнiстю (1ГА 13−18 бaлiв) виявили у 8,6% хворих. У середньому iндекс гiстологiчноl активносп ХВГВ у хворих становив 10,10±0,41 бала.
Встановили, що в печiнцi хворих на ХВГВ тiльця Каунсшьмена за морфологiею е гепатоцитами у сташ апоптозу. У гiстологiчних зрiзaх трепaнобiоптaтiв пе-чiнки спостерiгaють рiзнi етапи апоптозу гепaтоцитiв: конденсaцiя хроматину, шкноз ядра й формування вистутв кaрiолеми (ядро у виглядi тутово! ягоди) при збереженому ядерцi- конденсат та еозинофiлiя цито-плазми, карюрексис iз формуванням внyтрiшньоклiтин-них апоптотичних тiлець розтрощеного ядра, оточення зморщеного гепатоцита (тiльця Кayнсiльменa) вiдрос-тками мaкрофaгiв.
Встановили високу позитивну кореляцш мiж 1ГА i площею iмyноклiтинноl iнфiльтрaцil портальних трак-тiв, коефщент кореляцil становив (r= +0,76, р& lt-0,05) — водночас визначили переважання площi iмyноклiтинноl iнфiльтрaцil портальних трaктiв над площею 1'-х фiброзy (р& lt-0,05).
Зiстaвляючи виразшсть морфологiчних змiн у печiнцi у хворих на ХВГВ iз нормальним рiвнем АлАТ та у хворих iз п1двищеним l'-l рiвнем виявили, що середнш показник 1ГА у хворих iз нормальним рiвнем ферменлв становив 6,87±0,09 бала, а у хворих iз гiперферменте-мiею — 7,41±0,1 бала. При цьому вiрогiдних вiдмiнностей м1ж середнiми показниками 1ГА хронiчного гепатиту у хворих основно! i контрольно! груп не виявили (коефь цiент кореляцй'- Пiрсонa r = +0,21, р& lt-0,05). Анaлiзyючи стутнь вирaзностi фiброзy печiнки у хворих на ХВГВ iз нормальним i пiдвищеним рiвнем АлАТ також не виявили вiрогiдних вiдмiнностей (коефiцiент кореляцй'- Шрсона r = +0,35, р& lt-0,05). Пiд час морфологiчного визначення ступеня iнфiкyвaння гепaтоцитiв вiрyсом гепатиту В у хворих на ХВГВ шляхом паралельного кiлькiсного aнaлiзy нaявностi «мaтово-склоподiбних» гепaтоцитiв у пстолопчних зрiзaх печiнки, забарвлених
94
Актуальы питання фармацевтичноТ i медичноТ науки та практики (2015), № 1 (17) ISSN 2306−8094
Патог1столог1чн1 та? муног1стох1м1чн1 особливост1 прогресП'- хрон1чного в1русного гепатиту В
гематоксилшом i еозином, та шлькосп гепатоципв з iMyH0ricTOxiMi4H0 визначеним HBsAg, виявили високий кореляцшний зв'-язок мгж iндексом пстолопчно1'- актив-HOCTi ХВГВ i ступенем iнфiкyвання гепатоцитiв i3 HBsAg (коефщент кореляцii Пiрсона r = +0,81, р& gt-0,05), що дае змогу використовувати iмyногiстохiмiчне маркування HBsAg на раншх етапах дiагностики для прогнозуван-ня можливоi прогресii ХВГВ у хворих i3 нормальним рiвнем трансамiназ у кровь
Результати свiдчать: рiвень амшотранфераз у кровi хворих на ХВГВ не показуе виразшсть ушкоджень печшки- стyпiнь виразностi вiрyс-iндyкованих та iмy-нокл1тинних уражень печiнки, стyпiнь активаци кола-геноутворення i прогресii фiброзy у хворих на ХВГВ адекватшше показують результати патоморфологiчного дослвдження пyнкцiйноi трепанобюпсп печiнки.
Список лiтератури
1. Hepatitis B // Encyclopedia of Exercise Medicine in Health and Disease / eds.: F.C. Mooren. — Berlin — Heidelberg: Springer, 2012. — P. 408.
2. Wursthorn K. Hepatitis B / K. Wursthorn // Springer Reference Innere Medizin. — 2014. — P. 1−8.
3. Chang M. -H. Prevention of Hepatitis B Virus Infection and Liver Cancer / M. -H. Chang // Recent Results Cancer Res. -2014. — Vol. 193. — P. 75−95.
4. Usefulness of serum T3, and TSH as prognostic indicators for patients of acute-on-chronic liver failure with hepatitis B virus infection / Wu Yichen, Zhihong Wan, Shaoli You, Shaojie Xin // Hepatology International. — 2014. — Vol. 8. — Issue 1.
— Suppl.: 23rd Annual Conference of APASL, March 12−15, 2014, Brisbane, Australia. — P. 3.
5. Hepatitis B surface antigen (HBsAg) levels during the natural history of chronic hepatitis B (CHB): a Chinese perspective study / L. Zeng, J. Lian, J. Chen et al. // Hepatology International. — 2014. — Vol. 8. — Issue 1. — Suppl.: 23rd Annual Conference of APASL, March 12−15, 2014, Brisbane, Australia. — P. 32.
6. Comparative immune modulatory capacities of HBsAg, HB-cAg, and HBsAg/HBcAg and their utility for development of therapeutic vaccines / S.M. Akbar, S. Chen, M. Al-Mahtab, Y. Hiasa // Hepatology International. — 2014. — Vol. 8. — Issue 1. — Suppl.: 23rd Annual Conference of APASL, March 12−15, 2014, Brisbane, Australia. — P. 32.
7. Formulation and application of numerical scoring system for assessing histological activity in asymptomatic chronic active hepatitis / R.G. Knodell, K.G. Ishak, W.C. Black et al. // Hepatology. — 1981. — Vol. 1. — P. 431−435.
8. Intraobserver and interobserver variations in liver biopsy interpretation in patients with chronic hepatitis C / The French METAVIR Cooperative Study Group // Hepatology. — 1994.
— Vol. 20. — Р. 15−20.
9. Реброва О. Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATIS-TICA / О. Ю. Реброва. — M.: МедиаСфера, 2002. — 312 p.
10. Лапач С. Н. Статистические методы в медико-биологических исследованиях с использованием Excel / С. Н. Лапач, A.B. Чубенко, П. Н. Бабич. — [2 изд., перераб. и доп.]. — K.: Морион, 2001. — 408 с.
Висновки
Найточшше стутнь вiрyсного iнфiкyвання гепатоцит1 В у трепанобюптатах печшки хворих на ХВГВ визначае iмyногiстохiмiчне виявлення в них HBsAg i HBcAg, «ма-тово-склоподiбнi» гепатоцити, яш виявляють протягом мжроскопи, неповшстю показують стутнь шфшування гепатоцит1 В. Наявшсть прямого, високого кореляцшного зв'-язку мiж шльшстю шфжованих гепатоципв iз HBsAg та iндексом пстолопчно1'- активносп гепатиту дае тд-ставу використовувати iмyногiстохiмiчне маркування HBsAg на раншх етапах дiагностики для прогнозування можливо1'- прогреси ХВГВ у хворих iз нормальним рiв-нем трансамшаз у кровь
Перспективи подальших дослщжень. Враховуючи результати дослщження, плануеться удосконалити та встановити новi патопстолопчш та iмyногiстохiмiчнi ознаки прогреси ХВГВ.
References
1. (2012). Hepatitis B. Encyclopedia of Exercise Medicine in Health and Disease. F.C. Mooren (Eds). Berlin- Heidelberg: Springer.
2. Wursthorn, K. (2014) Hepatitis B. Springer Reference Innere Medizin, 1−8.
3. Chang, M. -H. (2014). Prevention of Hepatitis B Virus Infection and Liver Cancer. Recent Results Cancer Res., 193, 75−95. doi: 10. 1007/978−3-642−38 965−85.
4. Wu, Yichen, Wan, Zhihong, You, Shaoli, & amp- Xin, Shaojie (2014). Usefulness of serum T3, and TSH as prognostic indicators for patients of acute-on-chronic liver failure with hepatitis B virus infection. Hepatology International, 8(1), 3. Brisbane, Australia.
5. Zeng, L. Y., Lian, J. S., Chen, J. Y., Jia, H. Y., Zhang, Y. M., Xiang, D. R., et al. (2014). Hepatitis B surface antigen (HBsAg) levels during the natural history of chronic hepatitis B (CHB): a Chinese perspective study. Hepatology International, 8(1), 32. Brisbane, Australia.
6. Akbar, S. M., Chen, S., Al-Mahtab, M., & amp- Hiasa, Y. (2014). Comparative immune modulatory capacities of HBsAg, HB-cAg, and HBsAg/HBcAg and their utility for development of therapeutic vaccines. Hepatology International, 8(1), 32. Brisbane, Australia.
7. Knodell, R. G., Ishak, K. G., Black, W. C., Chen, T. S., Craig, R., Kaplowitz, N., et al. (1981). Formulation and application of numerical scoring system for assessing histological activity in asymptomatic chronic active hepatitis. Hepatology, 1, 431−435. doi: 10. 1002/hep. 1 840 010 511.
8. (1994). Intraobserver and interobserver variations in liver biopsy interpretation in patients with chronic hepatitis C. Hepatology, 20, 15−20.
9. Rebrova, O. Yu. (2002). Statisticheskij analiz medicinskikh dannykh. Primenenie paketa prikladnykh programm STA-TISTICA [Statistical analysis of medical data. Application software package STATISTICA]. Moscow: Media Sfera. [in Russian].
10. Lapach, S. N., Chubenko, A. V., Babich, P. N. (2001). Statis-ticheskie metody v mediko-biologicheskikh issledovaniyakh s ispol'-zovaniem Excel [Statistical methods in biomedical research using Excel]. Kyiv: Morion. [in Ukrainian].
BidoMocmi про автора:
Шишкш М. А., к. мед. н., доцент каф. патолопчно1 анатомп i судово1 медицины, Запор1зький державний медичний ушверситет, E-mail: masiles@mail. ru.
Сведения об авторе:
Шишкин М. А., к. мед. н., доцент каф. патологической анатомии и судебной медицины, Запорожский государственный медицинский университет, E-mail: masiles@mail. ru. Information about author:
Shishkin M.A., Ph.D., Associate Professor of the Department of Pathological Anatomy and Forensic Medicine, Zaporizhzhia State Medical University, E-mail: masiles@mail. ru.
Надшшла в редакщю 28. 01. 2015 р.
Актуальж питання фармацевтично!'- i медично!'- науки та практики (2015), № 1 (17) ISSN 2306−8094
95

ПоказатьСвернуть
Заполнить форму текущей работой