Перитуморозная зона рака почки: все ли проблемы решены?

Тип работы:
Реферат
Предмет:
Медицина


Узнать стоимость

Детальная информация о работе

Выдержка из работы

УДК 611. 611:616. 61−006
ПЕРИТУМОРОЗНАЯ ЗОНА РАКА ПОЧКИ:
ВСЕ ЛИ ПРОБЛЕМЫ РЕШЕНЫ?
1Черданцева Т.М., 1,2Бобров И.П., 1Климачев В.В., 1Брюханов В.М., 2Лазарев А.Ф., 2Авдалян А.М., 1Таранина Т.С., 1Гервальд В.Я.
гГОУ ВПО «Алтайский государственный медицинский университет" —
2Алтайский филиал РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Барнаул, e-mail: drakon@agmu. ru
В работе исследуется проблема ренальной интратубулярной неоплазии (РИН) при раке почки. Материалом для исследования послужил операционный материал 42 больных раком почки. Средний возраст пациентов составил 57,4 ± 1,4 года. Мужчин было 25 (59,5%), женщин — 17. С помощью гистологического, микроспектрофотометрического и иммуногистохимического методов была исследована морфо-функцио-нальная характеристика эпителия канальцев в перитуморозной зоне (ПЗ) рака почки. Показано, что в ПЗ опухолей высокой степени злокачественности проявление РИН встречалось чаще, чем при опухолях низких степеней анаплазии. В опухолях высокой степени анаплазии в эпителии канальцев ПЗ отмечали увеличение ядер, плоидности, активности AgNOR и более высокую иммуногистохимическую экспрессию маркеров Ki-67, bcl-2 и p53. Данные изменения канальцевого эпителия ПЗ при раке почки следует учитывать при органосохраняющих операциях.
Ключевые слова: рак почки, перитуморозная зона, ренальная интратубулярная неоплазия
THE PERITUMOUROUS ZONE OF A RENAL CARCINOMA: WHETHER ALL PROBLEMS ARE SOLVED? 1Cherdantseva T.M., uBobrov I.P., 1Klimachev V.V., 1Brjuhanov V.M., 2Lazarev A.F., 2Avdaljan A.M., 1Taranina T.S., 1Gervald V.J.
1The Altay state of medical university-
2The Altay branch GU «The Russian oncological centre ofN.N. Blohina of the Russian Academy of Medical Science, Barnaul, e-mail: drakon@agmu. ru
The problem of renal itraepithelium neoplasia at (RIN) a renal carcinoma was investigated in this work. The object of our work, are the peritumourous zone (PZ) the operative materials of 42 patients with a renal carcinoma. Middle age of patients has made 57,4 ± 1,4 years. Men was 25 (59,5%), women — 17 (40,5%). Has been investigated morpho-functional characteristic of epithelium tubular in the peritumourous zone (PZ) of a renal carcimoma by of the histologic, microspectrophotometrical and immunohistochemical methods. Manifestation of RIN in PZ a high-grade tumor met more often, than in low-grade tumor have been shown in research. The increase of nucleuses, ploidy, number AgNORs, expression Ki-67, bcl-2 р53 in epithelium of tubule PZ have been register in group of a high-grade tumor. It’s changes in epithelium of PZ should be considered at surgery operations of a renal carcinoma at keep organ.
Keywords: renal carcinoma, peritumourous zone, renal intratubular neoplasia
При исследовании перитуморозной зоны (ПЗ) почечно-клеточного рака (ПКР) перед морфологом встает ряд нерешенных проблем и прежде всего — это проблема ренальной интратубулярной неоплазии (РИН).
Проблема предраковых изменений относительно ПКР остается малоизученной [2, 9]. Одним из первых сообщений о наличии морфологических изменений в тубулярном эпителии в виде гиперплазии извитых канальцев и их отношение к ПКР принадлежит Ргтке А. (1936). Данные изменения автор рассматривал как компенсаторные по периферии рубца. Использование термина «дисплазия эпителия канальцев» принадлежит Warter Я. (1983). В 1994 г. Мош^. и соавт. впервые описали зоны интратубу-лярной эпителиальной дисплазии при в ПЗ при ПКР, преимущественно в корковом слое, которые выявлялись более чем в 25% случаев. В последующей работе данные авторы выявили такие зоны уже в 54% случа-
ев. Yorycoglu K. и соавт. (1999) описали подобные изменения у 14 из 62 больных ПКР (23%), причем в трех случаях — в виде карциномы in situ (5%). Зоны пролиферации и дисплазии эпителия сосочковых протоков, связанные с развитием рака собирательных протоков, впервые были описали Fleming S. и Lewi H. (1986), а также Kinnedy S. [7].
В 2000 г. группой европейских патологов для обозначения указанных изменений был предложен термин — RIN-ренальная интратубулярная неоплазия. Последняя представлена в виде зон обычно расположенных невдалеке от опухолевого узла и нередко в ассоциации с явлениями не-фросклероза. Эпителиальные клетки в таких зонах варьируются в размере, и их ядра увеличены [3].
В литературе имеется небольшое ко -личество работ, посвященных иммуноги-стохимическому исследованию РИН. Так, показано, что позитивная корреляцион-
ная связь между показателями экспрессии РСКА, К-га8 и о-егЬ-Б-2 в опухолевой ткани и очагах РИН является веским аргументом в пользу предракового характера РИН [4, 8].
Целью исследования стало иммуноги-стохимическое выявление уровня экспрессии маркеров Ю-67, Бс1−2 и р53 в эпителии канальцев ПЗ рака почки.
Материал и методы исследования
Изучен операционный материал 42 больных ПКР Средний возраст пациентов составил 57,4 ± 1,4 года. Мужчин было 25 (59,5%), женщин — 17 (40,5%). По гистологическому строению опухоли были представлены следующим образом: светлоклеточный рак — 28- зернистоклеточный рак — 8- папиллярный рак — 5 и саркоматоидный рак — 1.
При группировке опухолей по клиническим стадиям (1−1У) было выделено: I стадии (ТШ0М0) соответствовали 22 (52,4%) наблюдения- II стадии (Т2ШМ0) 1 (2,4%) наблюдение- III стадии
(ТШ1М0, Т2ШМ0, Т3ШМ0, Т3ШМ0) — 8 (19%) и IV стадии (Т4ШМ0, Т4ШМ0, Тлюбая№М1, Тлю-баяЫлюбаяМ1) — 11 (26,2%). Степень злокачественности клеток опухоли оценивали по БшИгшап БА. и соавт (1982) [6]. В изученном материале было 2 (4,8%) опухоли степени анаплазии 01- 11 (26,2%) опухолей степени анаплазии 02- 22 (52,4%) степени анаплазии 03 и 7 (16,7%.) степени 04.
В процессе исследования больные были разделены на 2 группы. В 1-ю группу вошли пациенты с диплоидными, триплоидными (в среднем 3,4 с) опухолями небольшого размера (& lt- 7 см), степени злокачественности О 1−2, низкими значениями AgNORs (& lt- 5 AgNOs) и отсутствием метастазов. Во 2-ю группу были включены больные с полиплоидными и ане-уплоидными (в среднем 5,6 с) опухолями большого размера (& gt- 7 см), степенями злокачественности О 3−4, высокими значениями AgNORs (& gt- 5 AgNORs) и наличием метастазов.
Материал забирали из центра опухоли, ПЗ (за ПЗ принимали непосредственно прилижащую в псевдокапсуле опухолевую ткань, псевдокапсулу и ткань, расположенную за псевдокапсулой до неизмененной ткани почки) и неизмененной ткани почки, из максимально отдаленных от опухоли участков. Гистологические препараты окрашивали гематоксилином и эозином, на коллаген по ван Гизон и на эластические волокна резорцин-фуксином по Вейгерту.
Активность аргирофильных белков, ассоциированных с областью ядрышкового организатора (AgNOR), выявляли с помощью реакции по Daska1 У et а1 [5], в нашей модификации [1].
Морфометрические и микроспектрофотометри-ческие исследования проводили с использованием системы компьютерного анализа изображений, состоящей из микроскопа Ьеюа DМЕ, цифровой камеры Ьеюа ЕС3 (Ьеюа Microsysteшs AG, Германия), персонального компьютера и программного обеспечения ВидеоТест — Морфология 5.2. Плоидометрию ДНК проводили на гистологических срезах, окрашенных по Фельгену. Среднее содержание ДНК в ядрах малых лимфоцитов принимали за диплоидное (2с) и использовали в качестве стандарта. Для получения стандарта в каждом срезе оценивали 25−30 лимфоцитов. Затем в исследуемых эпителиальных клетках
высчитывали содержание генетического материала в единицах плоидности ©.
Уровень экспрессии молекулярно-биологических маркеров р53 (клон DO-7, «DAKO»), Bcl-2 (клон 124, «DAKO») и Ki-67 (клон MIB-1,"DAKO») определяли при помощи иммуногистохимического метода по рекомендованным производителем протоколам.
Пролиферативную активность (ПА) эпителия определяли путем выявления в ядрах клеток антигена Ki-67. Подсчет проводили на 1000 клеток на цифровых микрофографиях с помощью морфометрической программы Image Tool 3. 0, с последующим выражением результата в процентах. Индекс мечения (ИМ) маркера менее 5,0% считали проявлением низкой, а 5,0% и — более высокой ПА.
При оценке ИГХ окрашивания bcl-2 использовали полуколичественный метод: 0 баллов — отсутствие окрашивания- + (1 балл) — более 20% клеток со слабой интенсивностью окрашивания цитоплазмы- ++ (2 балла) — умеренное окрашивание цитоплазмы- +++ (3 балла) — интенсивное окрашивание цитоплазмы- ++++ (4 балла) — интенсивное окрашивание цитоплазмы более чем 80% клеток. В тех случаях, когда интенсивность окрашивания варьировалась, например от + (1 балл) до ++ (2 балла), получали среднее — 1,5 балла. Когда выявляли равномерное окрашивание цитоплазмы всех клеток, тогда цифра, характеризующая интенсивность окрашивания, была круглой: + (1), ++ (2), +++ (3) или ++++ (4 балла).
Интенсивность ИГХ — окрашивания р53 оценивалась как негативная (нет окрашивания), слабо позитивная (& lt- 5% окрашенных клеток), умеренно позитивная (& gt- 5% средней интенсивности окраски) и сильно позитивная (& gt- 5% высокой интенсивности окраски).
Статистическую обработку материала проводили при помощи статистического пакета Statistica 6.0. При нормальном распределении данных при проверке статистических гипотез применяли методы параметрической статистики (t-test Стьюдента), а если полученные данные не соответствовали критериям нормального распределения (критерий Шапиро -Уилка W = 0,89, p & lt- 0,01), то применяли тест Колмогорова — Смирнова или U-тест Манна — Уитни. Данные считали достоверными при р & lt- 0,05.
Результаты исследования и их обсуждение
Результаты проведенного исследования показали, что гистологическое строение, активность пролиферативных процессов и апоптоза в ПЗ зависело, прежде всего, от молекулярно-биологических и анатомических особенностей опухолей в группах исследования (таблица).
В ПЗ I группы больных элементы канальцевого эпителия встречались в небольшом количестве. Они мало отличались от канальцев неизменного эпителия почки. Площадь ядра клеток в среднем составила 37,9 ± 2,0 мкм2. Число AgNORs составило 2,25 ± 0,22 на 1 ядро. При микроспектро-фотометрическом исследовании в клетках эпителия канальцев содержание ДНК составило 3,9 ± 0,2, что может говорить о ги-
перпластических и пролиферативных процессах, происходящих в эпителии.
Биологические и клинико-анатомические параметры опухолей в группах исследования (М ± т)
Параметры опухолей Группы пациентов
І группа ІІ группа
Плоидность ядра © 3,4 ± 0,1* 5,6 ± 0,2*
Количество AgNORs на 1 ядро 5,3 ± 0,2* 14,4 ± 0,5*
Размер опухолевого узла (см) 7 & lt- & gt- 7
Степень анаплазии по Фурману (в) І, ІІ ІІІ, IV
Наличие метастазов К- К+
Примечание: * - Р & lt- 0,05.
В ПЗ II группы больных, в большем количестве отмечались элементы канальцевого аппарата почки. Канальцы были замурованы в плотной склерозированной и гиалинизированной соединительной ткани с выраженным эластозом и содержали
небольшое число клеточных элементов. Клетки нефротелия имели признаки атипиз-ма: полиморфизм, гиперхромию ядра и увеличение ядерно-цитоплазматического соотношения. Средняя площадь ядра составила 54,2 ± 5,3 мкм2. Число AgNORs в ядрах клеток достигало 5,15 ± 0,35 на 1 ядро. Во второй группе пациентов было обнаружено увеличение среднего содержания ДНК до
5.5 ± 0,2, что свидетельствует о тяжелой дисплазии.
Нами было проведено сравнение степени экспрессии Ю-67- р53- Ьс1−2 в обеих группах.
В неизмененной ткани почки, взятой из максимально удаленных от опухоли участков в канальцевом эпителии, ИМ маркера пролиферации Ю-67 колебался от 0 до 8% (в среднем 1,6 ± 0,6%). При этом в неизмененном эпителии I группы больных ИМ Ю-67 составил 1,0 ± 0,4%, а во II группе возрастал до 2,9 ± 1,1%. ИМ Ю-67 в эпителии канальцев в ПЗ I группы варьировался в пределах от 0 до 3% и в среднем составил 1,8 ± 0,5, а во II группе возрастал до
3.5 ± 0,9, пределы колебаний составили от 0 до 8% (рис. 1. а, б).
Рис. 1. ИМ Кг-67 в эпителии канальцев ПЗ в группах исследования: а — низкий ИМ Кг-67 в эпителии канальцев ПЗ в І группе исследования- б — высокий ИМ Кг-67 в эпителии канальцев ПЗ во И группе исследования. ИГХ окрашивание. Увеличение х 1000
При исследовании экспрессии белка-супрессора апоптоза Ьс1−2 в неизмененной ткани почки иммуноокрашивание маркера обнаруживали во всех случаях, ее интенсивность в среднем составила 1,8 ± 0,1 баллов. Результаты иммуноокрашивания Ьс1−2 в цитоплазме клеток эпителия канальцев ПЗ в I группе больных были отрицательными (0 баллов) или интенсивность окраски была слабой (1 балл), а в ПЗ II группы экспрессия маркера в эпителии во всех
случаях была интенсивной (3 и 4 балла) (рис. 2. а, б).
При исследовании экспрессии гена-активатора апоптоза р53 в неизмененной ткани почки иммуноокрашивание маркера обнаруживали р53 во всех случаях, слабо позитивное окрашивание отмечали в 86,96% случаев и умеренно позитивное в 13,04% случаев. Иммуноокрашивание ядер клеток эпителия канальцев ПЗ на р53 в I группе пациентов в 9,1% случаев было
негативным, в 72,7% слабо позитивным, в 9,1% умеренно позитивным и в 9,1% сильно позитивным. Во II группе исследования негативной реакции отмечено не
было, слабо позитивное окрашивание отмечалась в 27,2% случаев, умеренно позитивное в 36,4% и сильно позитивное в 36,4% (рис. 3. а, б).
Рис. 2. Иммуноокрашивание Ьс1 — 2 в эпителии канальцев ПЗ в группах исследования: а — отрицательное и слабое иммуноокрашивание на Ьс1 — 2 эпителия канальцев ПЗ в І группе исследования- б — умеренное и интенсивное иммуноокрашивание на Ьс1 — 2 эпителия канальцев ПЗ во группе исследования. ИГХ окрашивание. Увеличение х 400
Рис. 3. Иммуноокрашивание на р53 в эпителии канальцев ПЗ в группах исследования: а — слабая интенсивность иммуноокрашивания р53 эпителия канальцев ПЗ в І группе исследования- б — сильная интенсивность иммуноокрашивания р53 эпителия канальцев ПЗ во и группе исследования. ИГХ окрашивание. Увеличение х 1000
Заключение
Таким образом, результаты проведенного исследования показали, что процессы пролиферации и апоптоза в ПЗ рака почки зависели, прежде всего, от биологических и клинико-анатомических особенностей опухоли. В ПЗ зонах опухолей высокой степенью злокачественности, по сравнению с опухолями низкой степени злокачественности, в эпителии канальцев отмечались возрастание процессов пролиферации (по данным выяв-
ления антигена Ю-67). Также в эпителии канальцев ПЗ таких опухолей было обнаружено увеличение числа AgNORs, что говорит о возрастании скорости пролиферации. В ПЗ опухолей высокой степени злокачественности в эпителии канальцев в большей мере отмечали экспрессию активатора апоптоза р53, что, скорее всего, говорит о мутации гена р53 и его активации в условиях гипоксии на фоне склеротических процессов, происходящих в ПЗ. Исследование белка супрессора-
апоптоза bcl-2 в ПЗ опухолей высоких степеней анаплазии показало высокую степень его экспрессии. Данный факт может свидетельствовать о блокаде апоптоза в патологически измененных клетках, что способствует их выживанию и размножению. Таким образом, найденные изменения, происходящие в эпителии канальцев ПЗ рака почки, можно отнести к проявлениям ренальной интрату-булярной неоплазии, степень которой зависит от особенностей неоплазии.
Список литературы
1. Модификация гистохимического метода выявления ядрышковых организаторов на гистологических срезах / И. П. Бобров, А. М. Авдалян, В. В. Климачев и др. // Архив патологии. — 2010. — T. 72, № 3. — С. 35−37.
2. Непомнящий В. М. Ренальная интратубулярная неопла-зия — предрак? / В. М. Непомнящий, А. М. Романенко, Р. О. Да-нилец // Материалы 1 конгресса Российского общества онкоурологов. (Москва 4 — 5 октября, 2006). — М., 2006. — С. 156−157.
3. Романенко А. М. Иммуногистохимическая диагностика опухолей почек // Руководство по иммуногистохими-ческой диагностике опухолей человека / под. ред. С. В. Петрова и Н. Т. Райхлина. — Титул, 2004. — С. 93−97.
4. Романенко А. М. Реальная интратубулярная неопла-зия как предрак почки/ А. М. Романенко, А. М. Возианов, В. М. Непомнящий и др. // Урология. — 2003. — № 4. — С. 4−9.
5. Daskal Y. Evedence from studies on segregated that nucleolar silver proteins C23 and B23 are in fibrillar components / Y. Daskal, K. Smetana, H. Buch // Exp. Cell. Res. — 1980. -Vol. 127. — P. 285−291.
6. Fuhrman S.A. Prognostic significance of morfologic parameters in renal cell carcinoma / S. A Fuhrma, Lasky., L.C. Limas // Am. J. Surg. Pathol. — 1982. — Vol.6. — P 655−663.
7. Kennedy S. Collecting duct carcinoma of the kidney / S. Kennedy, М. Merino, W. Lineham // Hum. Pathol. — 1990. -Vol. 21. — P 449−453.
8. Mourad W.A. Dysplastic tubular epithelium in «normal» kidney associated with renal cell carcinoma / W.A. Mourad, B.R. Nestok, G.Y. Saleg // American Jornal Surgical Pathology. — 1994. — Vol. 18. — P. 1117−1124.
9. Yorukoglu O.K. Tubular dysplasia and carcinoma in situ: precursor of renal cell carcinoma / O.K. Yorukoglu, S. Aktas,
S.U. Mungan // Urol. — 1999. — Vol. 53. — P. 684−689.
References
1. Bobrov I. P, A.M. Avdaljan A.M., Klimachev V.V. Zhurnal Arhiv patologii — Magazine pathology archive, 2010, Vol. 72, no. 3, pp. 35−37.
2. Nepomnjawij V.M., Romanenko A.M., Danilec R.O.
Materialy 1 kongressa Rossijskogo obwestva onkourologov. [Materials of 1 congress of the Russian society oncourology]. Moscow, 2006, pp. 156−157.
3. Romanenko A.M. Immunogistohimicheskaja diagnostika opuholej pochek.(Rukovodstvo po immunogistohimicheskoj diagnostike opuholej cheloveka. Pod. Red. S. V Petrova i N.T. Rajhlina). [Manual immunohistochemical diagnosis of human tumors]. Titul, 2004, pp. 93−97.
4. Romanenko A.M., Vozianov A.M., Nepomnjawij V.M. i dr. Urologija, Urology, 2003, no. 4, pp. 4−9.
5. Daskal Y. Evedence from studies on segregated that nucleolar silver proteins C23 and B23 are in fibrillar components / Y. Daskal, K. Smetana, H. Buch // Exp. Cell. Res. 1980. Vol. 127. pp. 285−291.
6. Fuhrman S.A. Prognostic significance of morfologic parameters in renal cell carcinoma/ S. A Fuhrma, Lasky., L.C. Limas // Am. J. Surg. Pathol. 1982. Vol.6. pp. 655−663.
7. Kennedy S. Collecting duct carcinoma of the kidney / S. Kennedy, M. Merino, W. Lineham // Hum. Pathol. 1990. Vol. 21. pp. 449−453.
8. Mourad W.A. Dysplastic tubular epithelium in «normal» kidney associated with renal cell carcinoma / W.A. Mourad, B.R. Nestok, G.Y. Saleg // American Jornal Surgical Pathology. 1994. Vol. 18. pp. 1117−1124.
9. Yorukoglu O.K. Tubular dysplasia and carcinoma in situ: precursor of renal cell carcinoma / O.K. Yorukoglu, S. Aktas,
S.U. Mungan // Urol. 1999. Vol. 53. pp. 684−689.
Рецензенты:
Калачев Г. А., д.м.н., профессор, зав. кафедрой анатомии, физиологии и валеологии ГОУ ВПО «Алтайская государственная педагогическая академия», г. Барнаул.
Высоцкий Ю. А., д.м.н., профессор, зав. кафедрой нормальной анатомии человека ГБОУ ВПО «Алтайский государственный медицинский университет» г. Барнаул.
Работа поступила в редакцию 06. 02. 2012.

ПоказатьСвернуть
Заполнить форму текущей работой