Идентификация компонентов комплексного лекарственного средства Но-шпалгин и продуктов их биодеструкции в культуральных жидкостях родококков

Тип работы:
Реферат
Предмет:
Биология


Узнать стоимость

Детальная информация о работе

Выдержка из работы

УДК 579. 695: 543. 544
ИДЕНТИФИКАЦИЯ КОМПОНЕНТОВ КОМПЛЕКСНОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА НО-ШПАЛГИН И ПРОДУКТОВ ИХ БИОДЕСТРУКЦИИ В КУЛЬТУРАЛЬНЫХ ЖИДКОСТЯХ РОДОКОККОВ 1Вихарева Е.В., 1Плотников А.Н., 2Мухутдинова А.Н., 1Мишенина И.И., 1Поспелова А.А., 1Тумилович Е.Ю.
]ГБОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия» Минздрава России, Пермь, e-mail: vihareva@pfa. ru-
2ФГБУН «Институт экологии и генетики микроорганизмов» УрО РАН,
Пермь, e-mail: annamukhutdinova@yandex. ru.
Но-шпалгин — комплексное лекарственное средство спазмолитического и анальгезирующего действия, содержащее парацетамол, кодеина фосфат и дротаверина гидрохлорид. Научные статьи, посвященные одновременному обнаружению компонентов данного препарата в культуральной жидкости бактериальных культур, отсутствуют. В настоящей работе проведена идентификация парацетамола, кодеина фосфата, дротаверина гидрохлорида и продуктов их биологической деструкции при совместном присутствии в пост-ферментационных культуральных средах родококков методом тонкослойной хроматографии. Разработан оптимальный состав системы растворителей, установлен наиболее эффективный способ детектирования и определены пределы обнаружения исследуемых веществ и продуктов их биодеструкции. Получена повторяемость (сходимость) измерений коэффициентов их подвижности в оптимальных системах растворителей. Показана возможность использования разработанной методики в лабораторных условиях при изучении механизмов разложения парацетамола, кодеина фосфата и дротаверина гидрохлорида, а также при разработке способов высокоэффективного удаления их из сточных вод.
Ключевые слова: Но-шпалгин, парацетамол, кодеина фосфат, дротаверина гидрохлорид, биологическая деструкция, актинобактерии рода Rhodococcus, тонкослойная хроматография
IDENTIFICATION OF NO-SPALGIN COMPLEX MEDICINE COMPONENTS AND PRODUCTS OF THEIR BIOLOGICAL DESTRUCTION IN RHODOCOCCUS CULTURE LIQUIDS
1Vikhareva E.V., 1Plotnikov A.N., 2Mukhutdinova A.N., 1Mishenina I.I., 1Pospelova A.A., 1Tumilovich E.Y.
]Perm State Pharmaceutical Academy, Perm, e-mail: vihareva@pfa. ru-
2Institute of Ecology and Genetics of Microorganisms, Russian Academy of Sciences, Perm, e-mail: annamukhutdinova@yandex. ru
No-spalgin is a complex spasmolytic and analgesic medicine, containing paracetamol, codeine phosphate and drotaverine hydrochloride. Articles about the simultaneous identification of these medicine components in the bacterial culture liquids are absent. In this paper the identification of paracetamol, codeine phosphate, drotaverine hydrochloride and their biological degradation products in the presence in the post — fermentation Rhodococcus culture media was carried out by thin layer chromatography. The optimum composition of the solvent system has been developed, the most effective method for the detection has been established and the detection limits of the substances tested have been determined. The repeatability of their mobility coefficient measurements has been obtained in optimum solvent systems. The technique can be useful in laboratory when studying degrading mechanisms of paracetamol, codeine phosphate and drotaverine hydrochloride as well as in developing methods of their highly effective removal from sewage.
Keywords: No-spalgin, paracetamol, codeine phosphate, drotaverine hydrochloride, biological destruction, Rhodococcus actinobacteria, thin layer chromatography
Но-шпалгин — комбинированное лекарственное средство, обладающее спазмолитическим и анальгезирующим действием [4]. Широкое использование парацетамола, дротаверина гидрохлорида и кодеина фосфата, являющихся компонентами данного препарата, неизбежно приводит к попаданию их в окружающую среду. В последнее время в почве и в водных источниках все чаще обнаруживаются лекарственные средства и их метаболиты. Попадающие в окружающую среду стабильные и биоак-
тивные фармполлютанты оказывают хроническое воздействие на организм человека и способствуют нарушению экологического баланса [6, 9]. В ранее проведенных исследованиях показано, что биохимическое превращение парацетамола, дротаверина гидрохлорида и кодеина фосфата с использованием доминирующих в почвенных микробиоценозах актинобактерий рода Rhodococcus сопровождается образованием устойчивых метаболитов [2, 3, 5]. Следует отметить, что научные статьи,
посвященные одновременной идентификации парацетамола, кодеина и дротаверина в культуральной жидкости бактериальных культур, отсутствуют. Поиск условий идентификации данных веществ предполагает разработку методики качественного анализа препарата Но-шпалгин в процессе его биологической деструкции.
Цель настоящего исследования — разработка методики идентификации компонентов комплексного лекарственного средства Но-шпалгин, а также продуктов их биологической деструкции в постфер-ментационных культуральных средах ро-дококков с использованием тонкослойной хроматографии.
Материалы и методы исследования
В работе использовали фармацевтические субстанции парацетамола (C8H9NO2, CAS: 103−90−2) («Аньцю Луань Фармасьютикал Ко., Лтд. «, Китай), кодеина фосфата (C18H21NO3 CAS: 76−57−3) («Алка-либер С.А. «, Испания), дротаверина гидрохлорида (C24H31NO4, CAS: 985−12−6) (Ирбитский химико-фармацевтический завод, Россия) и комплексный препарат в виде готовой лекарственной формы (таблетки) Но-шпалгин (ЗАО «Хиноин», Будапешт, Венгрия), содержащий парацетамола 500 мг, дротаверина гидрохлорида 40 мг, кодеина фосфата (в форме гемигидрата) 8 мг.
Эксперименты по биодеструкции лекарственных средств проводили в колбах Эрленмейера, содержащих 100 мл минерально-солевой среды RS [5], в условиях периодического культивирования (160 об/ мин, 28 °C, pH 6,8) на орбитальной качалке Cetromat IS («Sartorius», Германия). Концентрации парацетамола, дротаверина гидрохлорида и кодеина фосфата составляли 200, 20 и 40 мг/л соответственно. В качестве биодеструктора дротаверина гидрохлорида и кодеина фосфата использовали штамм R. rhodochrous ИЭГМ 647, парацетамола — штамм R. erythropolis ИЭГМ 767 из Региональной профилированной коллекции алканотрофных микроорганизмов (акроним коллекции ИЭГМ, номер во Всемирной федерации коллекции культур 768, [8]) [2, 3, 5]. Для биодеструкции Но-шпалгина использовали ассоциацию обоих штаммов. Посевным материалом служили клетки R. rhodochrous ИЭГМ 647, предварительно выращенные в присутствии низких концентраций дротаверина (2 мг/л) и кодеина (4 мг/л). Клетки штамма R. erythropolis ИЭГМ 767 выращивали в присутствии структурного аналога парацетамола — фенола (1000 мг/л). Продолжительность процесса биодеструкции парацетамола составила 20 сут, кодеина фосфата — 90 сут, дротаверина гидрохлорида — 25 сут, Но-шпалгина — 90 сут. В качестве контролей абиотической деструкции использовали стерильный раствор соединений в среде RS.
Пробы культуральных жидкостей для аналитических исследований (2 мл) в процессе биодеструкции лекарственных средств отбирали на 10 сут в случае парацетамола, на 15 сут — дротаверина гидрохлорида, 75 сут — кодеина фосфата и 30 сут — Но-шпалгина. Подготовку проб для анализа осуществляли посредством их центрифугирования при 10 000 об/мин (MiniSpin Eppendorf, Германия) в течение 5 мин. Для
хроматографического анализа дротаверина гидрохлорида использовали надосадочную жидкость (10 мкл), парацетамола и Но-шпалгина — осадок и надосадоч-ную жидкость. В случае кодеина фосфата использовали хлороформенный экстракт надосадочной жидкости (pH 8,0).
При изучении хроматографической подвижности парацетамола и продуктов его биодеструкции исследовали 8 систем растворителей: 1 П — хлороформ-ацетон (9: 1) — 2П — хлороформ — ацетон (8: 2) — 3П — гексан — этилацетат (85: 15) — 4П — диоксан — хлороформ — ацетон — раствор аммиака 25 / (47,5: 45:5:2,5) — 5П — этилацетат — спирт этиловый 95 / раствор аммиака 25 / (17: 2:1) — бП — хлороформ — спирт этиловый 95 / (7: 3) — 7П — толуол — ацетон — спирт этиловый 95 / раствор аммиака 25 / (45: 45:7,5:2,5) — 8П — хлороформ — спирт этиловый 95 / (8: 2). В отношении кодеина фосфата и продуктов его биодеструкции апробировали б систем растворителей: 1К — толуол-ацетон-спирт этиловый 95 / раствор аммиака 25 / (45: 45:7,5:2,5) — 2К — толуол-спирт этиловый 95 / триэтиламин (9: 1:1) — 3К — этилацетат — спирт — этиловый 95 / раствор аммиака 25 / (17: 2:1) — 4К — хлороформ — н-бутанол — раствор аммиака 25 / (70: 40:15) — 5К — хлороформ-спирт этиловый 95 / (9: 1) — бК -хлороформ-спирт этиловый 95 / раствор аммиака 25 / (9,5: 0,5:1) — 7К — хлороформ-метанол-раствор аммиака 25 / (9: 0,9:0,1). Для разделения дротаверина гидрохлорида и продуктов его биодеструкции использовали б составов подвижных фаз: 1Д — хлороформ — спирт этиловый 95 / (80: 20) — 2Д — бензол — метанол — раствор аммиака 25 / (20: 4:0,1) — 3Д — бензол-спирт этиловый 95 / раствор аммиака 25 / (80: 10:0,1) — 4Д — хлороформ -спирт этиловый 95 / ацетон (80: 20:10) — 5Д — хлороформ — спирт этиловый 95 / ацетон (80: 10:5) — бД — толуол — ацетон — спирт этиловый 95 / раствор аммиака 25 / (45: 45:7,5:2,5).
Хроматографирование проводили на пластинах «Сорбфил» ПТСХ-АФ-А-УФ (ЗАО «Сорбполимер», Россия). Детекцию веществ осуществляли УФ облучением при длинах волн 254 и 3б5 нм, а также обработкой парами йода и реактивами Фреде, Эрдмана, Зонненшейна, Марки, Драгендорфа [1]. В качестве свидетелей лекарственных средств использовали растворы парацетамола 0,2 /, дротаверина гидрохлорида 0,002 / и кодеина фосфата 0,004 / в среде RS. Свидетелями продуктов разложения парацетамола являлись спиртовые растворы п-аминофенола, гидрохинона, бензохинона и пирокатехина (Merck, Германия), а продуктов биодеструкции дротавери-на гидрохлорида — спиртовые растворы 3,4-диэток-сибензальдегида и 3,4-диэтоксибензойной кислоты (Merck, Германия).
Результаты исследования и их обсуждение
По нашим данным, наиболее эффективное разделение парацетамола и продуктов его биодеструкции наблюдалось в системах 1П, 7П и 8П (табл. 1).
Наиболее чувствительным детектором парацетамола и его метаболитов являлся УФ свет при длине волны 3б5 нм (предел обнаружения парацетамола УФ светом в системе 8П — 2,5 мкг/мкл, при обработке парами йода — 5 мкг/мкл).
Таблица 1
Значения величин КМОО парацетамола и продуктов его биодеструкции в культуральной среде R. erythropolis ИЭГМ 767
Исследуемые вещества Система растворителей
1П 2П 3П 4П 5П 6П 7П 8П
Парацетамол 18 33 41 63 78 74 51 55
и-Аминофенол 16 34 38 71 81 82 53 51
Г идрохинон 59 63 49 83 94 77 69 60
Бензохинон 46 66 57 — 82 82 64 58
Пирокатехин 43 — 68 83 84 82 61 73
Неидентифицированный продукт биодеструкции 29 12 — - - - 11 81
Примечание. «-» зона вещества не обнаружена.
Эффективное разделение кодеина фосфата и продуктов его биодеструкции наблюдалось в системах 1К, 3К, 7К (табл. 2). Предел обнаружения кодеина фосфата в данных системах: при облучении УФ светом с длиной волны 365 нм — 1 мкг/мл, при обработке парами йода — 2 мкг/мл, при обработке реактивом Драгендорфа — 0,5 мкг/мл. Несмотря на высокую чувствительность в отношении кодеина, реактив Драгендорфа не позволяет идентифицировать большинство продуктов биодеструкции данного вещества. Поэтому рациональным является использование ком-
бинированного детектирования: облучение УФ светом при длине волны 365 нм с последующей обработкой пластин реактивом Драгендорфа. Поскольку система 7К по сравнению с системами 1К и 3К позволяет обнаружить наибольшее количество продуктов биодеструкции кодеина, два из которых, согласно данным Lister D.L., Kanungo G. и др. [7], представляют собой 14-гидроксикодеинон (Rfxloo = 53) и дигидрокодеин (RfM00 = 23), ее можно считать оптимальной для дальнейшего изучения параметров удерживания коде -ина и продуктов его биодеструкции.
Таблица 2
Значения величин КМОО кодеина фосфата и продуктов его биодеструкции в культуральной среде R. rhodochrous ИЭГМ 647
Исследуемые вещества Система растворителей
1К 2К 3К 4К 5К 6К 7К
Кодеина фосфат 34 44 23 63 28 44 36
Продукты биодеструкции 25 — 19- 41 — - - 15−23−29−53
Примечание. «-» зона вещества не обнаружена.
Наиболее селективными системами, струкции дротаверина гидрохлорида, явля-позволяющими разделить продукты биоде- лись 1Д, 3Д и 6Д (табл. 3).
Таблица 3
Значения величин КГ*100 дротаверина гидрохлорида и продуктов его биодеструкции в культуральной среде R. rhodochrous ИЭГМ 647
Исследуемые вещества Система растворителей
1Д 2Д 3Д 4Д 5Д 6Д
Дротаверина гидрохлорид 71 32 25 65 53 75
3,4-Диэтоксибензальдегид 80 — 78 — - -
3,4-Диэтоксибензойная кислота 90 — - - - 88
Неидентифицированный продукт биодеструкции — - - - - 80
Примечание. «-» зона вещества не обнаружена.
Предел обнаружения дротаверина гидрохлорида в данных системах составил
2 мкг/мл при детектировании УФ светом (длина волны 365 нм), парами йода и реактивом Драгендорфа. Однако предпочтительно использовать УФ свет, так как данный способ, в отличие от других, наряду с дротаверином позволяет обнаружить продукты его биодеструкции.
Для определения парацетамола, дрота-верина гидрохлорида и кодеина фосфата
как компонентов препарата Но-шпалгин, а также продуктов их биологической деструкции в культуральных средах родо-кокков использовали 3 системы растворителей (табл. 4), выбранные в качестве оптимальных: 1Н — хлороформ — спирт этиловый 95% (80: 20) — 2Н — этилацетат-спирт этиловый 95% раствор аммиака 25% (17: 2:1) — 3Н — толуол — ацетон -спирт этиловый 95% раствор аммиака 25% (45: 45:7,5:2,5).
Таблица 4
Значения Rf*100 компонентов Но-шпалгина и продуктов их биодеструкции в культуральных средах R. rhodochrous ИЭГМ 647 и R. erythropolis ИЭГМ 767
Объекты исследования Подвижная фаза
1Н 2Н 3Н
Значения Rf*100 компонентов препарата Но-шпалгин и продуктов их биодеструкции
Парацетамол 55 78 51
Продукты биодеструкции 13, 58, 60, 73, 81 81, 82, 84, 94 11, 53, 64, 61, 69
Дротаверина гидрохлорид 51 13 75
Продукты биодеструкции 22 5, 88 5, 15, 90
Кодеина фосфат 32 23 34
Продукты биодеструкции — 19, 41 25, 43, 48, 71
Неидентифицированные продукты биодеструкции препарата Но-шпалгин — - 80, 86
Примечание. «-» зона вещества не обнаружена.
По нашим данным, оптимальной системой для разделения компонентов препарата Но-шпалгин и продуктов их биодеструкции является система 3Н (табл. 5, рисунок). Детектор — УФ свет при длине волны 365 нм. Анализ продуктов биодеструкции парацетамола в данной системе растворителей позволил обнаружить, помимо парацетамола (ШМОО = 51),
и-аминофенол (Ш^ЮО = 53), бензохинон (ШМОО = 64), гидрохинон (ШМОО = 69) и два неидентифицированных вещества (ШМОО = б1 и ШМОО = 11). Среди продуктов биодеструкции дротаверина гидрохлорида, помимо дротаверина (ШМОО = 75), обнаружены соединения: 3,4-диэтокси-
бензальдегид (ШМОО = 9О), 3,4-диэтокси-бензойная кислота (ШМОО = 5) и неиден-тифицированное вещество (ШМОО = 15). В качестве продуктов биодеструкции кодеина фосфата в культуральной жидкости ро-дококков, помимо кодеина (Ш^ЮО = 34), присутствовало четыре неидентифициро-
ванных вещества с Rf*100: 25- 43- 48- 71. Кроме того, в культуральной среде обнаружены два неидентифицированных соединения с RfxloO: 80 и 86.
Хроматографическую подвижность парацетамола, кодеина фосфата, дротаверина гидрохлорида и продуктов их биодеструкции как таковых, а также при совместном присутствии в составе комплексного препарата Но-шпалгин изучали в трехкратной повторности в выбранных оптимальных системах растворителей (табл. 5). Результаты параллельных определений считали сходи-мыми (repeatability) при условии:
|Xi — Х| & lt- L (P, m) S. [1].
Данные табл. 6 свидетельствуют о повторяемости (сходимости) измерений ко -эффициентов подвижности парацетамола, кодеина фосфата, дротаверина гидрохлорида, препарата Но-шпалгин и продуктов их биодеструкции в оптимальных системах растворителей.
1036
¦ РНАЯМАСЕИТІСЛЬ БСІЕКСЕБ ¦
Хроматографическое поведение компонентов препарата Но-шпалгин и продуктов их биодеструкции в культуральных средах родококков в системе 3Н:
I — свидетели парацетамола и продуктов его биодеструкции: 1 — парацетамол- 2 — пирокатехин-
3 — гидрохинон- 4 — бензохинон- 5 — п-аминофенол- II — свидетели дротаверина гидрохлорида и продуктов его биодеструкции: 6 — дротаверина гидрохлорид- 7 — 3−4-диэтоксибензальдегид-
8 — 3−4-диэтоксибензойная кислота- III — свидетель кодеина фосфата (9) —
IV- культуральная жидкость, содержащая Но-шпалгин и продукты его биодеструкции (10) —
* - неидентифицированные продукты биодеструкции (Я/^100: 11- 15- 25- 48- 80)
Таблица 5
Оценка повторяемости результатов параллельных определений коэффициентов подвижности компонентов препарата «Но-шпалгин» и продуктов их биодеструкции
Исследуемые вещества Метрологические характеристики (т = 3, Р = 95%, Ь = 3,31)
**3 X ?
1 2 3 4 5 6 7
Парацетамол и продукты биодеструкции, система 8П
Парацетамол 55 55 54 54,67 0,46 1,52
п-Аминофенол 51 50 52 51,00 1,0 3,31
Г идрохинон 60 59 59 59,33 0,96 3,18
Бензохинон 58 57 58 57,67 0,49 1,62
Пирокатехин 73 74 71 72,67 1,26 4,17
Неидентифицированный продукт биоде струкции 81 81 80 80,67 0,69 2,28
Кодеина фосфат и продукты биодеструкции, система 7К
Кодеина фосфат 36 36 36 36,0 0 0
14-Гидроксикодеинон 53 53 54 53,33 0,93 3,07
Продукт биодеструкции № 1 28 28 26 27,33 1,15 3,80
Дигидрокодеин 23 23 23 23,0 0 0
Продукт биодеструкции № 2 15 15 14 14,67 0,58 1,92
Дротаверина гидрохлорид и продукты биодеструкции, система 1Д
Дротаверина гидрохлорид 71 71 70 70,67 0,61 2,02
3,4-Диэтоксибензальдегид 91 90 89 90 1,0 3,31
3,4-Диэтоксибензойная кислота 80 80 79 79,67 0,68 2,25
Дротаверина гидрохлорид 71 71 70 70,67 0,61 2,02
¦ ЕШБАМЕШАЬ КЕБЕЛЯСН № 9, 2014 ¦
Окончание табл. 6
1 2 3 4 5 6 7
Препарат Но-шпалгин, система 3Н
Парацетамол 61 61 60 60,67 0,52 1,72
Кодеина фосфат 34 34 32 33,33 1,29 4,27
Дротаверина гидрохлорид 74 74 75 74,33 0,58 1,92
Примечания: Хп- экспериментально полученное значение ШМ00- X- среднее значение-? — стандартное отклонение- Ь — фактор, вычисленный по Пирсону Ь (Р- т) при Р = 95% [1].
Заключение
Установлены оптимальные условия идентификации парацетамола, дротавери-на гидрохлорида, кодеина фосфата и продуктов их биодеструкции в культуральных жидкостях родококков методом тонкослойной хроматографии. Получена повторяемость (сходимость) измерений коэффициентов подвижности исследуемых веществ. Показана возможность использования разработанной методики для идентификации компонентов комплексного лекарственного средства Но-шпалгин в культуральной жидкости родококков. Относительная простота и экспрессность методики обеспечивают ее использование в лабораторных условиях при изучении механизмов разложения лекарственных средств, а также при разработке способов высокоэффективного удаления их из сточных вод.
Список литературы
1. Акроним коллекции ИЭГМ, номер во Всемирной федерации коллекции культур 768, www. iegm. ru/iegmcol/ strains/index. html. Государственная Фармакопея Р Ф: в 2 ч. (2 часть). Общие методы анализа / МЗ и СР РФ. — 12-е изд., доп. — М.: Медицина, 2010. — C. 198−204.
2. Ившина И. Б., Рычкова М. И., Вихарева Е. В., Чекрыш-кина Л.А., Мишенина И. И. Деградация парацетамола с истекшим сроком годности свободными клетками актинобакте-рий // Катализ в промышленности. — 2006. — № 2. — С. 44−49.
3. Плотников А. Н., Тюмина Е. А., Рычкова М. И., Мишенина И. И., Вихарева Е. В., Ившина И. Б. Обнаружение кодеина в культуральных средах родококков методом тонкослойной хроматоргаии // Человек и лекарство: сб. материалов конгресса: XXI Росс. Нац. Конгресс «» (Москва, 7−11 апреля 2014 г.). — М., 2014. — С. 308−309.
4. Регистр лекарственных средств России [Электронный ресурс]: официальный сайт. — Электрон. дан. — Режим доступа: http: //www. rlsnet. ru/ (дата обращения: 15. 05. 2014).
5. Ivshina I.B., Vikhareva E.V., Richkova M.I., Mukhutdinova A.N., Karpenko Ju.N. Bio de gradation of drotaverine hydrochloride by free and immobilized cells of Rhodococcus rhodochrous IEGM 608 // World J. Microbiol. Biotechnol. — 2012. — Vol. 28. — P. 2997−3006.
6. Lee E., Lee S., Park J., Kim Y., Cho J. Removal and transformation of pharmaceuticals in wastewater treatment plants and constructed wetlands // Drink. Water Eng. Sci. Discuss. — 2013. — Vol. 6. — P. 89−98.
7. Lister D. L., Kanungo G., Rathbone D. A., Bruce N.C. Transformations of codeine to important semisynthetic opiate derivatives by Pseudomonas putida m 10 // Microbiology Letters. — 1999. — Vol. 181. — P 137−144.
8. The List of Species and Strains of IEGM Collection [Электронный ресурс]. — Режим доступа: http: //www. iegm. ru/iegmcol/strains/index. html (дата обращения: 10. 03. 2014).
9. Nikolaou A. Pharmaceuticals and related compounds as emerging pollutants in water: analytical aspects / A. Nikolaou // Global NEST Journal. — 2013. — Vol 15, № 1. — P. 1−12.
References
1. Gosudarstvennaja Farmakopeja RF: v 2 ch (2 chast '). Obschie metody analiza /MZ i SR RF. — 12-e izd., dop. (The State Pharmacopoeia of Russian Federation in 2 parts [2nd part]. Gen-ral methods of analysis), Moscow, 2010, Vol. 12, pр. 198−204.
2. Ivshina I.B., Rychkova M.I., Vikhareva E.V., Chekrysh-kina L.A., Mishenina I.I., Kataliz v promyshlennosti (Catalyse in industry), 2006, no 2, pр. 44−49.
3. Plotnikov A.N., Tyumina E.A., Rychkova M.I., Mish-enina I.I., Vikhareva E.V., Ivshina I.B., Sb. materialov kongres-sa: XXI Ross. Nac. Kongress «Chelovek i lekarstvo» (Congress sourcebook: XXI Russian National Congress ««Man and medicine»), Moscow, 2014, рp. 308−309.
4. Registr lekarstvennyh sredstv Rossii [Jelektronnyj resurs]: oficial’nyj sajt (Register of medicines of Russia [electronic resource]: official site) available at: www. rlsnet. ru.
5. Ivshina I. B., Vikhareva E.V., Richkova M.I., Mukhutdinova A.N., Karpenko Ju.N., World J. Microbiol. Biotechnol, 2012, vol. 28, pр. 2997−3006.
6. Lee E., Lee S., Park J., Kim Y., Cho J., Drink. Water Eng. Sci. Discuss, 2013, vol. 6, рp. 89−98.
7. Lister D.L., Kanungo G., Rathbone D.A., Bruce N.C. ,
Microbiology Letters, 1999, vol. 181, рp. 137−144.
8. The List of Species and Strains of IEGM Collection
[electronic resource]: available at: www. iegm. ru/iegmcol/
strains/index. html.
9. Nikolaou A, Global NEST Journal, 2013, vol. 15, no. 1, pр. 1−12.
Рецензенты:
Хомов Ю. А., д. фарм.н., профессор кафедры фармацевтической химии ФЗО и ФДПО, ГбОу ВпО «ПГФА» Минздрава России, г. Пермь-
Михайловский А. Г., д. фарм.н., профессор кафедры общей и органической химии, ГБОУ вПо «ПГФА» Минздрава России, г. Пермь.
Работа поступила в редакцию 15. 07. 2014.

ПоказатьСвернуть
Заполнить форму текущей работой