[Pin+]-независимая агрегация химерного белка Sup35SP в дрожжах Saccharomyces cerevisiae

Тип работы:
Реферат
Предмет:
Биология


Узнать стоимость

Детальная информация о работе

Выдержка из работы

Ю. В. Сопова, С. П. Задорский, Д. А. Ахмедов, С. Г. Инге-Вечтомов
[PIN+]-НЕЗАВИСИМАЯ АГРЕГАЦИЯ ХИМЕРНОГО БЕЛКА SUP35SP В ДРОЖЖАХ SACCHAROMYCES CEREVISIAE*
Введение
Цитоплазматический фактор [PSI+] дрожжей Saccharomyces cerevisiae -прионная форма фактора терминации трансляции eRF3 (Sup35p) [8, 24, 26]. Прионизация Sup35 сопровождается агрегацией этого белка, приводящей к его частичной инактивации. Снижение количества функционально активного белка Sup35, в свою очередь, ведет к повышению эффективности считывания стоп-кодонов некоторыми тРНК, обладающими латентной супрессорной активностью, и, в результате, к нонсенс-супрессии [4].
Белок Sup35 состоит из трех доменов: N (1−123 а. к.), M (124−253 а. к.) и C (254−685 а. к.) [14]. С-домен (функциональный) необходим и достаточен для поддержания жизнеспособности клетки и выполнения функции eRF3 в терминации трансляции- домены N и M несущественны для жизнеспособности клеток, их делеция не приводит к существенному изменению эффективности терминации трансляции [22]. В то же время N-домен Sup35 отвечает за индукцию и поддержание приона [PSI+]. Переход белка Sup35 в прионную конформацию можно индуцировать амплификацией или сверхэкспрессией полноразмерного гена SUP35 или его делеционных вариантов, содержащих область, кодирующую N-домен [5, 6, 8, 23].
Переход Sup35 в прионную конформацию сопровождается агрегацией этого белка. Наличие прионных агрегатов Sup35 может быть выявлено при помощи дифференциального центрифугирования клеточных экстрактов и последующей иммуногибридизации осадочной и надосадочной фракций с антителами, специфичными к Sup35 [18]. Кроме того, агрегация молекул Sup35 может быть выявлена при помощи флуоресцентного микроскопирования с использованием GFP. В клетках [PSI+] при продукции белка Sup35 или его прионизующего домена, слитых с GFP, наблюдаются точкообразные флуоресцирующие пятна, свидетельствующие об образовании прионных агрегатов белка Sup35. При индукции [PSI + ] de novo, как правило, образуются сначала кольцеобразные агрегаты, которые по мере стабилизации приона замещаются точкообразными. В клетках [psi_] Sup35 находится в растворимой форме и не образует агрегаты, при флуоресцентном микроскопировании наблюдается равномерное свечение цитоплазмы [17, 27].
Для индукции [PSI+] при сверхпродукции белка Sup35 или его делеционных вариантов, включающих N-домен, необходимо присутствие в клетке цитоплазматического фактора [PIN+]-прионной формы белка Rnq1 [9, 11]. По всей видимости, агрегаты Rnq1 служат гетерологичной матрицей, на которой происходит зарождение первых «зерен» новообразующегося [PSI +]. Эффективность этого процесса намного меньше эффективности гомологичной прионной конверсии. Вероятно, для инициации прио-низации достаточно образования одного или нескольких гетероприонных олигомеров,
* Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ (грант № 07−04−873), CRDF (грант ST012−0/BP3C12), ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» (Госконтракт П799) и Программы государственной поддержки ведущих научных школ (грант НШ-197. 2008. 4).
© Ю. В. Сопова, С. П. Задорский, Д. А. Ахмедов, С. Г. Инге-Вечтомов, 2009.
после чего передача прионной конформации новым молекулам Sup35 может осуществляться путем гомологичной прионизации [11]. В пользу данной модели говорят экспериментальные данные о колокализации химерных белков Rnq1-CFP и Sup35NM-YFP при их одновременной продукции в клетках [PIN+] [psi_]. Кроме того, было показано, что фибриллы Rnq1 индуцируют прионизацию NM-домена Sup35 in vitro [12]. Альтернативная модель, согласно которой прионная форма Rnq1 облегчает инициацию прионизации Sup35, связываясь с гипотетическим ингибитором прионизации Sup35 и инактивируя его, не получила серьезных экспериментальных подтверждений [11, 12]. Фактор [PIN+], как правило, является необходимым на этапе индукции [PSI+], при этом он не является необходимым для дальнейшего воспроизведения установившегося (зрелого) [PSI +]-фактора [10].
Хотя индукция [PSI +] при сверхпродукции белка Sup35 и большинства его делеционных вариантов является строго [PIN+]-зависимой, сверхпродукция некоторых N-терминальных фрагментов Sup35, содержащих N-домен и часть М-домена, может приводить к индукции [PSI +] в штаммах [pin_]. При этом возникновения фактора [PIN+] в этих штаммах не происходит [9]. Показано, что [PIN+]-независимость индукции [PSI +] связана с наличием у описанных делеционных вариантов Sup35 специфических С-терминальных олигопептидов (так называемых «магических пептидов»), состоящих из 16 аминокислот. Механизм действия «магических пептидов» остается невыясненным. Одно из наиболее вероятных объяснений состоит в том, что «магические пептиды» дестабилизируют конформацию N-терминальных фрагментов Sup35, что приводит к повышенной склонности последних к агрегации, позволяющей инициировать образование приона [PSI+] в отсутствие фактора [PIN+] [10].
В данной работе показано, что химерный белок Sup35SP, состоящий из прионизу-ющего домена (NM) Sup35 S. cerevisiae и функционального домена © Sup35 дрожжей Pichia methanolica, также способен к [PIN+]-независимой агрегации в дрожжах
S. cerevisiae. В отличие от конструкций, содержащих «магические пептиды», сверхпродукция Sup35SP в штаммах с аутентичным геном SUP35 в хромосоме не сопровождается нонсенс-супрессорным эффектом.
Материалы и методы исследования
В работе использовали изогенные варианты [PIN+] и [pin_] штамма 74-Д694 (MATa ade1−14uga his3-A200 ura3−52 leu2−3,112 trpl-289uag [7]. Трансгенные штаммы SP-74694 [PIN+] и SP-74694 [pin_], содержащие химерный ген SUP35SP в хромосоме, были получены на основе 74-Д694 [PIN+] и 74-Д694 [pin_], соответственно, путем замещения хромосомной копии гена SUP35 химерным геном SUP35SP, тесно сцепленным с геном LEU2. Замещение было проведено при помощи трансформации штаммов 74-Д694 [PIN+] и 74-Д694 [pin_] фрагментом BamHI — XhoI плазмиды pSPZ3[1], содержащим ген SUP35SP и тесно сцепленный с ним ген LEU2 между 5'- и 3'- последовательностями, фланкирующими ген SUP35 в IV хромосоме S. cerevisiae.
Плазмида pSUP35-GFP, полученная Патино и соавторами [17] на основе вектора pRS316 [21], содержит ген SUP35, слитый с геном GFP, под контролем промотора Pcup 1. Плазмида pSP-GFP получена в настоящей работе и содержит ген SUP35SP, слитый с геном GFP, под контролем промотора Pcup 1. Для получения данной плазмиды амплифицировали кодирующую область гена SUP35SP при помощи ПЦР с использованием праймеров SUP35SP-F (5'--CGGGGATCCATGTCGGATTCAAACCAAG-3'-) и SUP35SP-R (5'--CGCCGCGGCAATAGCTTGGTAACTTTAC-3'-) (пр-во компании «Син-тол», Москва) и плазмиды pSPZ3 в качестве матрицы. Продукт ПЦР гидролизовали
рестриктазами BamHI и SacII и встраивали в плазмиду pCUP-GFP [17], гидролизованную этими же рестриктазами.
В работе применяли стандартные методы генетики дрожжей [2, 3] и стандартные методы получения и анализа рекомбинантных ДНК [20]. Трансформацию дрожжей проводили с использованием ацетата лития [19]. Эффективность супрессии нонсенс-мутации ade1−14 оценивали по интенсивности роста на синтетических средах без аде-нина при инкубации в 30 °C или 20 °C. Для индукции экспрессии гена GFP, а также химерных генов, содержащих последовательность GFP, трансформанты выращивали в жидкой среде, селективной для поддержания плазмиды, с добавлением CuSO4 в концентрации 50 мкМ. Далее клетки отмывали от среды и микроскопировали. Локализацию белка GFP и химерных белков, содержащих GFP, анализировали с помощью флуоресцентного микроскопа Leica DM 6000B, используя фильтр для визуализации GFP. Для фотографирования клеток использовали цифровую фотокамеру Leica DС 500. Выделение белков из клеток S. cerevisiae проводили, как описано в работе Патино и соавторов [17]. Фракционирование экстрактов белков выполняли методом дифференциального центрифугирования при 17 500 g в буфере TNE (150 мМ NaCl- 50 мМ Tris-HCl, pH 7,5- 2 мМ ЭДТА- 2 мМ PMSF- 1 мМ бензамидин- 2 мкг/мл пепстатин-
10 мкг/мл леупептин). Анализ осадочной и надосадочной фракций производили при помощи денатурирующего электрофореза в 8%-ном полиакриламидном геле в присутствии SDS (SDS-PAGE), как было описано ранее [15]. Детекцию гибридизации белков с антителами, специфичными к Sup35N, проводили с помощью набора фирмы «Amer-sham», согласно протоколу производителя.
Результаты исследования
Чтобы оценить влияние структуры функционального домена Sup35 на способность этого белка к образованию агрегатов, мы подвергли белковые экстракты, выделенные из штаммов SP-74694 [PIN+] и SP-74694 [pin-] с химерным геном SUP35SP в хромосоме, дифференциальному центрифугированию. Осадочную и надосадочную фракции анализировали с помощью денатурирующего электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии SDS с последующей иммуногибридизацией с антителами, специфичными к N-домену белка Sup35. В качестве контролей использовали изогенные штаммы 74-Д694 [PIN+] и 74-Д694 [pin-] с SUP35 в хромосоме, а также штамм 74-Д694 [PIN+] [PSI +]. О степени агрегации белков Sup35 или Sup35SP судили по количеству белка, детектируемого в осадочной фракции.
Полученные результаты (рис. 1) говорят о том, что значительная часть химерного белка Sup35SP в штаммах с SUP35SP в хромосоме присутствует в осадочной фракции, независимо от [PIN]-статуса штамма. В контрольных штаммах 74-Д694 [PIN+] и 74-Д694 [pin-] с SUP35 в хромосоме практически весь белок Sup35 присутствовал в растворимой (надосадочной) фракции, в штамме 74-Д694 [PSI+] он был зарегистрирован как в надосадочной, так и в осадочной фракциях. Таким образом, химерный белок Sup35SP обладает повышенной способностью к [PIN]-независимой спонтанной агрегации.
Зарегистрированный высокий уровень спонтанной агрегации Sup35SP может отражать высокую частоту возникновения [PSI + ]-подобного фактора в штаммах с SUP35SP в хромосоме. Основным фенотипическим проявлением фактора [PSI+] является способность штаммов [PSI +] к нонсенс-супрессии, исчезающая после их инкубации на среде с гидрохлоридом гуанидина (ГГХ). Мы зарегистрировали слабую нонсенс-супрессию му-
SP-74-A694
74-Д694
[PIN+]psi] H О
[pin ]['-psi ] [PIN+]psi] |pin ]psi ]
Н О Н О Н О
[Р/ЛГ+][Р57+] Н О
Рис. 1. Анализ агрегации белка Sup35SP в штаммах [PIN+] и [pin ] с химерным геном SUP35SP в хромосоме.
Представлен результат иммуногибридизации экстрактов белков с антителами, специфичными к N-домену белка Sup35. О — осадочная фракция, Н — надосадоч-ная фракция. SP-74694 и 74-Д694 — изогенные штаммы, несущие гены SUP35SP и SUP35 соответственно.
тации ade1−14 у штаммов SP-74694 [PIN+] и SP-74694 [pin- ], уровень которой был значительно ниже, чем у штамма 74-Д694 [PSI+] (рис. 2). Кроме того, эффективность супрессии не изменялась после инкубации штаммов SP-74694 [PIN+] и SP-74694 [pin-] на среде с ГГХ. Исходя из этих данных, нонсенс-супрессия, скорее всего, объясняется не образованием прионной формы Sup35SP, а неполной гомологией C-доменов Sup35 и Sup35SP, вследствие чего эффективность функционирования Sup35SP в процессе терминации трансляции снижена по сравнению с нормальным Sup35.
Рис. 2. Эффективность супрессии мутации ade1−14 у штаммов с SUP35SP в хромосоме (SP-74-Д694), полученных на основе штаммов 74-Д694 [PIN+] и 74-Д694 [pin- ].
Среда без аденина с глюкозой, 7 дней инкубации при 30 °C. В качестве контролей использованы
изогенные штаммы с геном SUP35 Pichia methanolica (Р-74-Д694) и штамм 74-Д694 [PSI + ].
Для исследования способности химерного белка Sup35SP к агрегации и зависимости этого процесса от фактора [PIN+] мы также использовали метод флуоресцентного микроскопирования.
Трансгенные штаммы SP-74694 [PIN+], SP-74694 [pin-], 74-Д694 [PIN+] и 74-Д694 [pin-] были трансформированы плазмидами, несущими ген SUP35SP или SUP35, слитые с геном GFP, под контролем промотора Pcup 1. В качестве контроля использовали трансформанты этих штаммов плазмидами, несущими ген GFP под контролем PcUP1.
Трансформанты инкубировали в жидкой среде С-Ura с добавлением 50 мкМ CuSO4 в течение 40 ч, после чего анализировали клетки под микроскопом. Результаты флуоресцентной микроскопии трансформантов представлены на рис. 3.
Агрегаты белка Sup35-GFP мы наблюдали только в штаммах SP-74694 [PIN+] и 74-Д694 [PIN+], в соответствующих штаммах [pin- ] только равномерное свечение цитоплазмы, что согласуется с литературными данными [17, 27]. При этом в штамме SP-74694 [PIN+] встречались точечные и кольцевые варианты агрегатов Sup35-GFP,
Рис. 3. Агрегация химерных белков Sup35SP-GFP и Sup35-GFP в клетках трансформантов изогенных штаммов 74-Д694 [PIN+] [psi- ] и 74-Д694 [pin- ] [psi- ].
а — 74-Д694 [PIN+] [psi-] / pSP-GFP [SUP35SP-GFP]- б — 74-Д694 [PIN+] [psi-] / pSUP35-GFP [SUP35-GFP]- в — SP-74-Д694 [PIN+] [psi-] / pSP-GFP [SUP35SP-GFP]- г — SP-74694 [PIN+] [psi-] / pSUP35-GFP [SUP35-GFP]- д — 74-Д694 [pin-][psi-] / pSP-GFP [SUP35SP-GFP]- e — 74-Д694 [pin-][psi-] / pSUP35-GFP [SUP35-GFP]- ж — SP-74694 [pin-] [psi-] / pSP-GFP [SUP35SP-GFP]- з — SP-74-Д694 [pin-] [psi-] / pSUP35-GFP [SUP35-GFP].
в штамме 74-Д694 [PIN+] были отмечены только кольцевые агрегаты.
Агрегаты белка Sup35SP-GFP были зафиксированы нами во всех исследованных штаммах, независимо от варианта SUP35 в хромосоме и PIN — статуса штамма. При этом были обнаружены только точечные агрегаты, но не было зафиксировано кольцевых агрегатов. Различий по размеру, форме и числу агрегатов Sup35SP-GFP на клетку между изогенными штаммами [PIN+] и [pin- ] мы не обнаружили.
Экспериментальные данные согласуются с нашими результатами, полученными методом дифференциального центрифугирования и иммуногибридизации, и говорят о способности химерного белка Sup35SP к [PIN+]-независимой агрегации. Кроме того, Sup35SP-GFP и Sup35-GFP, по-видимому, образуют агрегаты, отличающиеся по структуре, судя по различию формы и размеров пятен флуоресценции, наблюдаемых при продукции Sup35SP-GFP и Sup35-GFP.
Образование агрегатов Sup35 или химерных белков, включающих прионизующий домен, как правило, сопровождается нонсенс-супрессорным эффектом за счет вовлечения интактного Sup35 в агрегаты и, следовательно, снижения эффективности терми-нации трансляции. Нами была дана оценка уровня супрессии нонсенс-мутации ade1−14 у трансформантов штаммов 74-Д694 [PIN+] и 74-Д694 [pin- ], несущих плазмиды с генами SUP35SP-GFP и SUP35-GFP.
Супрессию оценивали как на среде C-Ade, Ura с добавлением 50 мкМ CuSO4, обеспечивающей сверхэкспрессию химерных генов, так и на среде C-Ade, Ura без добавления CuSO4 (рис. 4). Рост трансформантов штамма [PIN+] плазмидами pSP-GFP и pSUP35-GFP наблюдали как на среде С-Ura, Ade + CuSO4, так и на среде C-Ade, Ura на 11−12-й день инкубации. У соответствующих трансформантов штамма [pin- ] супрессии ade1−14 в этих условиях не наблюдали. Единственным исключением стало наличие супрессии ade1−14 у трансформантов штамма 74-Д694 [pin- ] плазмидой pSUP35-GFP в условиях сверхэкспрессии SUP35-GFP. Поскольку агрегатов белка Sup35S-GFP в штамме 74-
Д694 [pin_] выявлено не было, мы предполагаем, что супрессия в данном случае связана не с прионизацией белка Sup35, а с тем, что химерный белок Sup35S-GFP, функционально менее активный, при сверхпродукции конкурирует с нормальным белком Sup35 за участие в терминации трансляции, что приводит к понижению эффективности этого процесса.
а б
pRS316 (-)
pSUP35-GFP (Sup35S-GFP)
pSP-GFP (Sup35SP-GFP) pRS316 (-)
pSUP35-GFP (Sup35S-GFP) pSP-GFP (Sup35SP-GFP)
Рис. 4. Рост трансформантов изогенных штаммов 74-Д694 [PIN+] и 74-Д694 [pin_] на среде C-Ura, Ade + 50 мкM CuSO4 (а) и на среде С-Ura, Ade (б) на 7-й день инкубации при +20°С.
Отсутствие супрессии ade1−14 у трансформантов 74-Д694 [pin_ ]
плазмидой pSP-GFP, по-видимому, говорит о том, что интактный белок Sup35 не вовлекается или вовлекается с низкой эффективностью в агрегаты, образуемые Sup35SP-GFP в штамме [pin_ ]. Наличие супрессии ade1−14 у изогенных трансформантов 74-Д694 [PIN+] плазмидой pSP-GFP указывает на эффективное вовлечении белка Sup35 в агрегаты в клетках этих трансформантов. Таким образом, свойства агрегатов химерного белка Sup35SP (в частности, определяющие их способность к вовлечению интактного Sup35 в агрегаты) могут быть различными в зависимости от наличия или отсутствия фактора [PIN+] в клетке.
Обсуждение результатов исследования
Результаты ряда исследований говорят о том, что прионизующие домены известных прионных белков, как правило, сохраняют свою способность к инициации прионизации и поддержанию прионного состояния, будучи присоединенными к различным белкам или их доменам [25]. В то же время вопрос о влиянии структуры полипептида, присоединенного к прионизующему домену, на прионизующие свойства последнего является недостаточно изученным.
В настоящей работе показано, что замена функционального домена C в молекуле белка Sup35 (eRF3) S. cerevisiae на гомологичный домен Sup35 дрожжей Pichia methanolica приводит к существенному повышению способности белка к переходу в агрегированную форму. В штаммах с химерным геном SUP35SP в хромосоме значительная часть белка Sup35SP находится в агрегированном состоянии даже в отсутствие сверхпродукции белков, содержащих прионизующий домен Sup35. Вторым существенным отличием химерного белка Sup35SP от Sup35, показанным нами как при помощи флуоресцентного микроскопирования, так и иммунохимически, является то, что его
агрегация происходит эффективно и в отсутствие фактора [PIN+], который в норме необходим для индукции агрегации Sup35 de novo [9, 10].
Механизмы, лежащие в основе обоих свойств белка Sup35SP, требуют дальнейших исследований. В качестве вероятных причин отличий свойств Sup35SP и интактно-го белка Sup35 могут быть рассмотрены следующие. 1) Вследствие неполной гомологии C-доменов белков Sup35 S. cerevisiae и P. methanolica белок Sup35SP, содержащий С-домен Sup35 P. methanolica, может иметь сниженную эффективность взаимодействия с функциональными партнерами, прежде всего, с фактором терминации трансляции Sup45 (eRF1). Повышение концентрации несвязанного белка Sup35SP может быть одной из причин его повышенной склонности к агрегации. 2) Как повышенная способность белка Sup35SP к агрегации, так и [PIN+]-независимость этого процесса могут быть объяснены нарушением взаимодействия прионизующего (N) и функционального © доменов белка Sup35 при объединении доменов Sup35 из двух разных видов дрожжей в молекуле химерного белка Sup35SP. Возможность физического взаимодействия доменов N и С между собой была ранее показана в работе Конга и соавторов [13] для гомолога Sup35 — белка eRF3 дрожжей Schizosaccharomyces pombe. Особенности взаимодействия N и С доменов белка Sup35SP могут приводить к дестабилизации конформации N-домена, вследствие чего белок Sup35SP становится склонным к агрегации даже без участия агрегатов белка Rnq1 ([PIN+]), в норме играющих роль гетероло-гичной затравки для инициации агрегации Sup35 [11, 12, 16]. Для делеционных вариантов белка Sup35, содержащих специфические С-концевые «магические пептиды», обеспечивающие их [PIN+]-независимую агрегацию, также, по-видимому, характерна конформационная нестабильность [10].
Примененные в данной работе методы не позволили зарегистрировать различий по форме, размерам и структуре агрегатов, образующихся при экспрессии химерного гена SUP35SP, между штаммами [PIN+] и [pin-]. Вместе с тем полученные нами результаты косвенно свидетельствуют о влиянии фактора [PIN+] на свойства агрегатов. Было обнаружено, что агрегация белка Sup35SP-GFP сопровождалась нонсенс-супрессией только у трансформантов штамма 74-Д694 [PIN+]. Наличие нонсенс-супрессии свидетельствует об эффективном вовлечении молекул интактного Sup35 в прионные агрегаты. Таким образом, передача способности к агрегации от белка Sup35SP-GFP к белку Sup35 является [PIN+]-зависимой в отличие от агрегации самого Sup35SP-GFP. Полученные нами результаты говорят о том, что агрегаты химерного белка Sup35SP (Sup35SP-GFP), образующиеся в штаммах [pin-], могут иметь аморфную или амилоидоподобную структуру, конформация молекул в которой не позволяет эффективно присоединять молекулы Sup35. В то же время наличие гетерологичной матрицы в виде агрегатов белка Rnq1 в штаммах [PIN+], вероятно, инициирует образование амилоидных агрегатов Sup35SP, способных к присоединению Sup35. Согласно другой возможности, присоединение Sup35 к агрегатам белка Sup35SP происходит как в штаммах [PIN+], так и в штаммах [pin- ], однако различная структура образующихся смешанных агрегатов, состоящих из Sup35 и Sup35SP, приводит к различному соотношению количеств агрегированной и мономерной форм белка Sup35. В этом случае в штаммах [pin-] в мономерной фракции остается количество молекул Sup35, достаточное для эффективной терминации трансляции, тогда как в штаммах [PIN+] большая часть белка Sup35 присутствует в агрегированной форме, что приводит к эффекту нонсенс-супрессии.
1. Задорский С. П., Борхсениус А. С., Сопова Ю. В., Старцев В. А., Инге-Вечтомов С. Г. Супрессия нонсенс-мутаций и мутаций сдвига рамки считывания при различных способах инактивации фактора терминации трансляции eRF3 у дрожжей Saccharomyces cerevisiae // Генетика. 2003. Т. 39 (4). C. 489−494.
2. Захаров И. А., Кожин С. А., Кожина Т. Н., Федорова И. В. Сборник методик по генетике дрожжей-сахаромицетов. Л., 1984. 143 с.
3. Инге-Вечтомов С. Г. Идентификация некоторых групп сцепления у Петергофских генетических линий дрожжей // Генетика. 1971. Т. 7. C. 113−124.
4. Инге-Вечтомов С. Г., Миронова Л. Н., Аленин В. В., Борхсениус А. С. Прионы, синтез белка и клеточный цикл // Вестн. С. -Петерб. ун-та. 1999. Сер. 3. Вып. 4. C. 53−71.
5. Чернов Ю. О., Деркач И. Л., Дагкесаманская А. Р., Тихомирова В. Л., Тер-Аване-сян М. Д., Инге-Вечтомов С. Г. Нонсенс-супрессия при амплификации гена, кодирующего белковый фактор трансляции // Докл. Акад. наук. 1988. Т. 301. С. 1227−1229.
6. Chernoff Y. O., Derkach I. L., Inge-Vechtomov S. G. Multicopy SUP35 gene induces de-novo appearance of psi-like factors in the yeast Saccharomyces cerevisiae // Curr. Genet. 1993. Vol. 24. P. 268−270.
7. Chernoff Y. O., Lindquist S.L., Ono B., Inge-Vechtomov S. G. and Liebman S. W. Role of the chaperone protein Hsp104 in propagation of the yeast prion-like factor [PSI+] // Science. 1995. Vol. 268. P. 880−884.
8. Derkatch I.L., Chernoff Y. O., Kushnirov V. V., Inge-Vechtomov S. G., Liebman S. W. Genesis and variability of [PSI+] prion factors in Saccharomyces cerevisiae // Genetics. 1996. Vol. 144. P. 1375−1386.
9. Derkatch I. L., Bradley M. E., Zhou P., Chernoff Y. O., Liebman S. W. Genetic and environmental factors affecting the de novo appearance of the [PSI+] prion in Saccharomyces cerevisiae // Genetics. 1997. Vol. 147. P. 507−519.
10. Derkatch I.L., Bradley M. E., Masse S., Zadorsky S. P., Polozkov G.I., Inge-Vechto-mov S. G., Liebman S. W. Dependence and independence of [PSI+] and [PIN+]: a two-prion system in yeast? // EMBO J. 2000. Vol. 19. P. 1942−1952.
11. Derkatch I.L., Bradley M.E., Hong J. Y., Liebman S. W. Prions affect the appearance of other prions: the story of [PIN+] // Cell. 2001. Vol. 106. P. 171−182.
12. Derkatch I.L., Uptain S.M., Outeiro T.F., Krishnan R., Lindquist S.L., Liebman S. W. Effects of Q/N-rich, polyQ, and non-polyQ amyloids on the de novo formation of the [PSI+] prion in yeast and aggregation of Sup35 in vitro // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2004. Vol. 101. P. 1 293 412 939.
13. Kong C., Ito K., Walsh M.A., Wada M., Liu Y., Kumar S., Barford D., Nakamura Y., Song H. Crystal structure and functional analysis of the eukaryotic class II release factor eRF3 from S. pombe // Mol. Cell. 2004. Vol. 14. P. 233−245.
14. Kushnirov V. V., Ter-Avanesyan M. D., Telkov M. V., Surguchov A. P., Smirnov V. N., Inge-Vechtomov S. G. Nucleotide sequence of the SUP2 (SUP35) gene of S. cerevisiae // Gene. 1988. Vol. 66. P. 45−54.
15. Laemmli U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 // Nature. 1970. Vol. 227. P. 680−685.
16. Osherovich L. Z., Weissman J. S. Multiple Gln/Asn-rich prion domains confer susceptibility to induction of the yeast [PSI+] prion // Cell. 2001. Vol. 106. P. 183−194.
17. Patino M., Liu J., Glover J., Lindquist S. Support for the prion hypothesis for inheritance of a phenotypic trait in yeast // Science. 1996. Vol. 273. P. 622−626.
18. Paushkin S. V., Kushnirov V. V., Smirnov V.N., Ter-Avanesyan M.D. Propagation of the yeast prion-like [PSI+] determinant is mediated by oligomerization of the SUP35-encoded polypeptide chain release factor // EMBO J. 1996. Vol. 15. P. 3127−3134.
19. Rose M. D., Winston F., Hieter P. Methods in yeast genetics // New York, 1990. 198 p.
20. Sambrook J., Fritsch E. E., Maniatis T. Molecular cloning. A laboratory manual Ц New York, 1990. Vol. 1−3.
21. Sikorski R. S., Hieter P. A system of shuttle vectors and yeast host strains designed for efficient manipulation of DNA in Saccharomyces cerevisiae ll Genetics. 1989. Vol. 122. P. 19−27.
22. Ter-Avanesyan M.D., Kushnirov V. V., Dagkesamanskaya A.R., Didichenko S. A., Chernoff Y. O., Inge-Vechtomov S. G., Smirnov V. N. Deletion analysis of the SUP35 gene of the yeast Saccharomyces cerevisiae reveals two non-overlapping functional regions in the encoded protein ll Mol. Microbiol. 199З. Vol. 7. P. б8З-б92.
23. Ter-Avanesyan M. D., Dagkesamanskaya A. R., Kushnirov V. V., Smirnov V. N. The SUP35 omnipotent suppressor gene is involved in the maintenance of the non-Mendelian determinant [PSI+] in the yeast Saccharomyces cerevisiae Ц Genetics. 1994. Vol. 137. P. б71-б7б.
24. Wickner R. B. [URE3] is an altered Ure2 protein: evidence for a prion analog in Saccharomyces cerevisiae ll Science. 1994. Vol. 2б4. P. 5бб-5б9.
25. Wickner R. B., Taylor K. L., Edskes H. K., Maddelein M. -L. Prions: portable prion domains
ll Current Biology. 2000. Vol. 10. P. 335−337.
26. Zhouravleva G., Frolova L., Le Goff X., Le Guillec R., Inge-Vechtomov S. G., Kisselev L., Philippe M. Termination of translation in eukaryotes is governed by two interacting polypeptide chain release factors eRF1 and eRF3 ll EMBO J. 1995. Vol. 14. P. 40б5−4072.
27. Zhou P., Derkatch I.L., Liebman S. W. The relationship between visible intracellular aggregates that appear after overexpression of Sup35 and the yeast prion-like elements [PSI+] and [PIN+] ll Mol. Microbiol. 2001. Vol. 39. P. 37−4б.
Статья поступила в редакцию 31 июля 2009 г.

ПоказатьСвернуть
Заполнить форму текущей работой