Использование ВЭЖХ в анализе суппозиториев с фенотропилом и циннаризином

Тип работы:
Реферат
Предмет:
Медицина


Узнать стоимость

Детальная информация о работе

Выдержка из работы

УДК 615. 454.2. 07:543. 544.5. 068. 7
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ВЭЖХ В АНАЛИЗЕ СУППОЗИТОРИЕВ С ФЕНОТРОПИЛОМ И ЦИННАРИЗИНОМ
Дуккардт Л. Н., Сенченко С. П., Маркова О. М., Хартюнова Е. И.
Пятигорский медико-фармацевтический институт-филиал ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России, Пятигорск, Россия (357 532, Пятигорск, ул. Калинина, 11), markovaolgami@mail. ru_
Разработана методика анализа суппозиториев, содержащих циннаризин и фенотропил. Для качественного и количественного анализа циннаризина и фенотропила использован метод ВЭЖХ. Исследование проведено на жидкостном хроматографе «Стайер» фирмы Аквилон (Россия — США -Чехия), снабженного колонкой Luna С-18 4,6×150 мм (Phenomenex, США), с содержанием углерода 16%. Установлено, что оптимальным является градиентный режим элюирования. В качестве подвижной фазы использовали ацетонитрил и раствор муравьиной кислоты 2%. Детектирование проводили при длине волны 254 нм. Проведенная валидационная оценка предложенной методики по критериям: линейность, правильность, прецизионность подтвердила возможность использования ее для количественного определения циннаризина и фенотропила в суппозиториях. Ключевые слова: ноотропные препараты, фенотропил, циннаризин, суппозитории, ВЭЖХ.
THE USE OF HPLC IN THE ANALYSIS OF SUPPOSITORIES WITH FENOTROPIL AND CINNARIZINE
Dukkardt L.N., Senchenko S.P., Markova O.M., Khartyunova E.I.
Pyatigorsk Medical — Pharmaceutical Institute — branch of PBEI of HPT to VolgGMU, Pyatigorsk, Russia (357 532,
Pyatigorsk, Street Kalinin, 11), markovaolgami@mail. ru_
The method of analysis suppositories containing cinnarizine and fenotropil was developed. The method of HPLC used for qualitative and quantitative analysis of cinnarizine and fenotropil. The study was conducted on a liquid chromatograph & quot-Stayer"- firm Aquilon (Russia — USA — Czech Republic) equipped with a column Luna C-18 of 4. 6×150 mm (Phenomenex, USA), with a carbon content of 16%. It is established that the optimum is the gradient elution mode. Acetonitrile and formic acid 2% were used as the mobile phase. Detection was performed at a wavelength of 254 nm. Conducted a validation assessment of the proposed methodology criteria: linearity, accuracy, precision confirmed the possibility of its use for the quantitative determination of cinnarizine and fenotropil in suppositories.
Keywords: nootropic drugs, fenotropil, cinnarizine, suppositories, HPLC.
Сосудистые поражения мозга в экономически развитых странах в последние десятилетия выдвинулись в число ведущих причин смертности населения, составляя в её структуре около 14%. Мозговой инсульт определяет более 30% всех случаев смерти от сердечно-сосудистых заболеваний.
Факторами, способствующими развитию сосудистых заболеваний сердца и мозга, являются условия современной жизни, прежде всего экологическое неблагополучие, урбанизация и автоматизация, нервное перенапряжение в трудовых процессах, недостаточная двигательная активность, особенности современного питания, повышение потребления алкоголя [1].
Для лечения заболеваний, связанных с нарушением мозгового кровообращения, широко применяются ноотропные лекарственные средства.
Ноотропы — это вещества, оказывающие специфическое влияние на высшие интегративные функции мозга, улучшающие память, облегчающие процесс обучения, стимулирующие интеллектуальную деятельность, повышающие устойчивость мозга к повреждающим факторам, улучшающие кортикально-субкортикальные связи. Ноотропные препараты способны улучшать когнитивные (познавательные) функции как у здоровых людей, так и, в особенности, нарушенные при различных заболеваниях [1,2].
С целью расширения ассортимента ноотропных лекарственных средств была разработана оптимальная технология суппозиториев на гидрофильной основе, содержащих два ноотропных препарата — циннаризин и фенотропил. Циннаризин (транс-1-циннамил-4-дифенилметилпиперазин) избирательно влияет на мозговое, периферическое и коронарное кровообращение [2]. Фенотропил (К-карбамоил-метил-4-фенил-2-пирролидон) — ноотропный препарат нового поколения, отличающийся широким спектром действия и высокой активностью. Известно, что фенотропил может усиливать действие препаратов, стимулирующих ЦНС, антидепрессантов и ноотропных препаратов [3, 4].
Целью данного исследования явилась разработка методик анализа суппозиториев, содержащих циннаризин и фенотропил.
Материалы и методы
Материалом для исследования служили субстанции, соответствующие требованиям НД: фенотропил (ФСП 42−0348−4414−03) и циннаризин (НД 42−11 672−06).
Для разработки методикЬ анализа и ее валидационной оценки были изготовлены суппозитории с циннаризином и фенотропилом состава:
Циннаризина 0,05
Фенотропила 0,05
Основы (ПЭО) необходимое количество для получения суппозиториев массой 2,0 г.
Полученные суппозитории имели торпедообразную форму белого цвета со слегка кремоватым оттенком. Масса одного суппозитория находилась в пределах 2,0±0,01 г.
Для качественного и количественного анализа циннаризина и фенотропила в суппозиториях использовали метод ВЭЖХ.
Исследование проводили с использованием жидкостного хроматографа «Стайер» фирмы Аквилон (Россия — США — Чехия), снабженного колонкой Luna С-18 4,6*150 мм (Phenomenex, США), с содержанием углерода 16%.
В результате предварительных исследований было установлено, что оптимальным является градиентный режим элюирования. В качестве подвижной фазы использовали ацетонитрил и раствор муравьиной кислоты 2%. Содержание ацетонитрила первые три минуты составляло 30%, а с третьей до пятнадцатой минуты его концентрация возрастала до
100%, при расходе подвижной фазы 1 мл/мин. Объём пробы — 20 мкл. Детектирование проводили при длине волны 254 нм.
Для приготовления испытуемого раствора один суппозиторий помещали в термостойкую колбу с обратным холодильником, добавляли 100 мл спирта этилового 96% и нагревали на кипящей водяной бане до его полного растворения. Полученное извлечение охлаждали, фильтровали, переносили в мерную колбу вместимостью 200 мл, доводили спиртом этиловым 96% до метки и перемешивали. Полученный раствор перед вводом в хроматограф центрифугировали при 7000 мин-1 в течение 5 мин.
Раствор С О готовили по методике: около 0,05 г (точные навески) фенотропила и циннаризина помещали в мерную колбу вместимостью 200 мл, растворяли в 100 мл спирта этилового 96% и доводили до метки тем же растворителем.
Результаты и их обсуждение
Полученные хроматограммы раствора сравнения и испытуемого раствора представлены на рисунках 1 и 2.
Идентификацию проводили, сравнивая времена удерживания пиков на хроматограммах испытуемого раствора и раствора сравнения. Исходя из предложенных хроматограмм, следует, что время удерживания циннаризина и фенотропила в исследуемом растворе совпадает со временем удерживания этих веществ при анализе раствора стандартных образцов. Кроме того, методом добавок было установлено, что площади пиков увеличиваются пропорционально количеству добавленных стандартов, а асимметричность и эффективность остается на прежнем уровне, что свидетельствует о способности методики специфично определить циннаризин и фенотропил в суппозиториях.
mV 350
300
250
200
150
100
50
0 123 456 789 мин
н I
в ни
р 1
1 1 1
1 1 1 1
1 1 1
1 1 1
А 1 1
ch 1 1 1 1 1 ------Н-------1------11 1 1
Рис. 1. Хроматограмма раствора СО, содержащего циннаризин и фенотропил
шУ 350
300
250
200
150
100
50
0
? 1
|
¦ |
1 ¦ 1
1 1 ¦ 1
Ц 1 1 ¦
К ц II II
/Л ¦ л л! 1
еЬ 1 1 1 1 4 1 1- 4 1 1
0 123 456 789 мин
Рис. 2. Хроматограмма испытуемого раствора из суппозиториев с циннаризином и фенотропилом Предложенная методика количественного определения циннаризина и фенотропила в суппозиториях была подвергнута валидационной оценке по критериям прецизионность (воспроизводимость), линейность и правильность [5].
Изучение зависимости между площадями пиков анализируемого раствора и содержанием в нем фенотропила и циннаризина показало, что она имела линейный характер при содержании фенотропила в интервале от 0,1 до 0,5 мг/мл, а циннаризина — от 0,05 до 0,4мг/мл. Линейная зависимость выражается уравнениями: у=870,8х-8,3 (для фенотропила) и у=10 854,7х-201,3 (для циннаризина), коэффициенты корреляции при этом составляли 0,999 и 0,998 соответственно.
Для установления прецизионности методики проводили 6 параллельных определений циннаризина и фенотропила. Определялась величина стандартного отклонения (ББ) и относительного стандартного отклонения (ЯБО). Полученные результаты представлены в таблице 1.
Таблица 1
Результаты испытания прецизионности методики определения фенотропила и циннаризина в суппозиториях
Найдено фенотропила, г/суппозиторий Метрологические характеристики Найдено циннаризина, г/суппозиторий Метрологические характеристики
0,0500 0,0489
0,0498 0,0498
0,0496 X = 0,0498 ББ = 0,286 ЯББ = 0,57% 0,0500 X = 0,0493 ББ = 0,490 ЯББ = 0,99%
0,0501 0,0492
0,0499 0,0495
0,0494 0,0488
Для обоих веществ значение Я8Б составляет менее 1%, что свидетельствует о низком значении случайной погрешности.
Правильность разработанной методики определяли на модельной смеси циннаризина и фенотропила. Содержание активных веществ определяли предложенным методом ВЭЖХ. С этой целью был построен трехуровневый эксперимент по 3 опыта на каждом уровне. Для оценки полученных результатов наиболее простым и наглядным критерием служит открываемость (Я). Полученные данные представлены в таблицах 2 и 3.
Таблица 2
Результаты установления правильности методики количественного определения
фенотропила
Уровень Взято Найдено фенотропила, г Я, %
Навеска суппозитория, г Расчетное содержание фенотропила, г
1 1,53 0,0383 0,0378 98,69
1 1,56 0,0390 0,0391 100,26
1 1,51 0,0378 0,0380 100,53
2 2,03 0,0508 0,0507 99,80
2 2,02 0,0505 0,0509 100,79
2 2,05 0,0513 0,0511 99,61
3 2,58 0,. 645 0,0651 100,93
3 2,52 0,0630 0,0633 100,48
3 2,55 0,0638 0,0633 99,22
Ё=юо, оз
Таблица 3
Результаты установления правильности методики количественного определения
циннаризина
Уровень Взято Найдено R, %
Навеска суппозитория, г Расчетное содержание циннаризина, г циннаризина, г
1 1,53 0,0383 0,0382 99,74
1 1,56 0,0390 0,0391 100,26
1 1,51 0,0378 0,0377 99,74
2 2,03 0,0508 0,0506 99,61
2 2,02 0,0505 0,0506 100,20
2 2,05 0,0513 0,0514 100,19
3 2,58 0,. 645 0,. 647 100,31
3 2,52 0,0630 0,0635 100,79
3 2,55 0,0638 0,0635 99,53
R =100,04
Согласно данным таблиц 3 и 4 величина средней открываемости (И) для обоих веществ находится в пределах 99−101%, что свидетельствует об отсутствии влияния систематической погрешности на результаты эксперимента.
Выводы:
1. Разработана методика ВЭЖХ определения фенотропила и циннаризина в суппозиториях.
2. Проведена валидационная оценка предложенной методики по критериям: линейность, правильность, прецизионность.
3. Результаты валидационной оценки методики количественного определения циннаризина и фенотропила в суппозиториях показали, что этот метод позволяет достоверно определять данные вещества при их совместном присутствии.
Список литературы
1. Довгун С. С. Анализ «минимизации затрат» использования ноотропных препаратов в лечении больных с инсультом // Современные проблемы науки и образования. — 2011. — № 6-
URL: www. science-education. ru/100−5274.
2. Регистр лекарственных средств России РЛС-Энциклопедия лекарств.- 19-й вып. /Под. ред. Г. Л. Вышковского. — М.: «РЛС-МЕДИА», 2010.- С. 80.
3. Ахапкина, В. И. Спектр фармакологических эффектов фенотропила / В. И. Ахапкина, Т. А. Воронина // Фарматека. — 2005. — № 13. — С. 19−25.
4. Фенотропил: новый лидер в ряду ноотропов // Новая аптека. Аптечный ассортимент. 2005. — № 10. — С. 31−32.
5. Эпштейн, Н. А. Оценка пригодности (валидация) ВЭЖХ методик в фармацевтическом анализе (обзор) / Н. А. Эпштейн // Хим. -фармац. журнал. — 2004. — Т. 38, № 4. — С. 40−56.
Резензенты:
Компанцев Д. В., д. фарм.н., профессор кафедры технологии лекарств Пятигорского медико-фармацевтического института, филиала ГБОУ ВПО ВолгГМУ, г. Пятигорск- Попова О. И., д. фарм.н., профессор кафедры фармакогнозии Пятигорского медико-фармацевтического института, филиала ГБОУ ВПО ВолгГМУ, г. Пятигорск.

ПоказатьСвернуть
Заполнить форму текущей работой