Исследование флавоноидного состава травы зверобоя пятнистого методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Тип работы:
Реферат
Предмет:
Биология


Узнать стоимость

Детальная информация о работе

Выдержка из работы

УДК 615. 038−073:582. 824
ИССЛЕДОВАНИЕ ФЛАВОНОИДНОГО СОСТАВА ТРАВЫ ЗВЕРОБОЯ ПЯТНИСТОГО МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Л. Н. Зимина, В. А. Куркин, В. М. Рыжов,
ГОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет»
Куркин Владимир Александрович — e-mail: vakur@samaramaii. ru
С использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) проведено исследование флавоноидного состава травы зверобоя пятнистого (Hypericum maculatum Crantz.). В водно-спиртовом извлечении из травы данного растения идентифицированы гиперозид, рутин и кверцетин. Установлено, что доминирующим флавоноидом травы зверобоя пятнистого является гиперозид, обладающий антидепрессантной активностью.
Ключевые слова: зверобой пятнистый, Hypericum maculatum Crantz., трава, флавоноиды, гиперозид,
высокоэффективная жидкостная хроматография, стандартизация.
With the using of high performance liquid chromatography the study of flavonoid composition of Hypericum macu-latum Crantz. herbs there was developed. In the water-ethanol extract hyperoside, rutin and quercetin there were identified. There was established, that the predominant flavonoid of Hypericum maculatum Crantz. herbs is hypero-side, which has the antidepressive activity.
Key words: Hypericum maculatum Crantz., herbs, flavonoids, hyperoside, high performance liquid chromatography, standardization.
Введение
В настоящее время в медицинской практике используются два фармакопейных вида рода Зверобой (Hypericum L.) -зверобой продырявленный (Hypericum perforatum L.) и зверобой пятнистый (Hypericum maculatum Crantz.) (синоним: зверобой четырехгранный — Hypericum quadrangulum L.), сырье которых служит источником противовоспалительных, бактерицидных, вяжущих и антидепрессантных лекарственных препаратов [1−8]. Известно, что действующими веществами травы зверобоя являются флавоноиды (гиперозид,
рутин, бисапигенин), антраценпроизводные (гиперицин), флорглюцины (гиперфорин) и дубильные вещества [9−14],
однако результаты ранее проведённых исследований свидетельствуют о том, что фармакопейные виды зверобоя имеют некоторые отличия в химическом составе [15−17]. С учетом недостаточной степени изученности химического состава травы зверобоя пятнистого, а также выявленной нами антидепрессантной активности для флавоноидных гликозидов -гиперозида и бисапигенина, представляло интерес углубленное изучение состава флавоноидов сырья данного растения.
Цель работы: изучение флавоноидного состава травы зверобоя пятнистого с применением высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).
Материалы и методы
Исследовали воздушно-сухой образец травы зверобоя пятнистого, собранный в Республике Марий Эл (Медведевский район) в фазу цветения (июль 2008 г.).
В качестве веществ сравнения использованы рабочие стандартные образцы (РСО) гиперозида, рутина и кверцетина, полученные нами ранее из сырья зверобоя продырявленного [7].
В ходе качественного и количественного ВЭЖХ-анализа использовали водно-спиртовое извлечение, полученное из травы зверобоя пятнистого с использованием 70% этилового спирта.
ВЭЖХ-анализ осуществляли методом обращенно-фазовой ВЭЖХ на хроматографе «Милихром-5» в изократическом режиме (колонка КАХ 6−80−4 № 6 25. 01. 99, стационарная фаза — «Берагоп С18»). Подвижной фазой в анализе служила смесь ацетонитрила и воды в различных соотношениях с добавлением 1% ледяной уксусной кислоты. Скорость потока при анализе составляла 0,1 мл/мин. Детекцию флавонои-дов проводили при аналитической длине волны тах 360 нм. Для обнаружения возможных сопутствующих веществ использовали дополнительные длины волн: 254- 270- 290- 330 нм.
Результаты и их обсуждение
На начальном этапе были проведены исследования по подбору оптимальных условий хроматографирования. В подобранных оптимальных условиях разделения на ВЭЖХ-хроматограмме водно-спиртового извлечения из травы зверобоя пятнистого четко видны четыре пика (рис. 1).
Для идентификации пиков веществ в аналогичных условиях были проанализированы РСО рутина, гиперозида и кверцетина (рис. 2−4). Достоверность идентификации пиков флавоноидов на хроматограмме извлечения из травы зверобоя пятнистого подтверждена также использованием в методике анализа соответствущего внутреннего стандартного вещества.
2. 700--1--1--1--1−1--1--1--1−1--1--1--1−1--1--1--1- Н
2. 500
2. ООО
1. 500 1. 000 0. 500 О. ООО
о
РИС. 1.
Хроматограмма извлечения из травы зверобоя пятнистого
(подвижная фаза: ацетонитрил: вода, 25: 75 с добавлением 1%уксусной кислоты).
На основе результатов исследований идентифицированы три пика на ВЭЖХ-хроматограмме (рис. 1), среди которых пик № 3 со временем удерживания 3,496 мин. соответствует гиперозиду, пик № 4 со временем удерживания 14,237 мин. — кверцетину. В области, соответствующей времени удерживания РСО рутина (3,141 мин.), в аналогичных усло-
виях хроматографирования обнаружен незначительный пик рутина (рис. 1).
РИС. 2.
Хроматограмма РСО кверцетина.
РИС. 3.
Хроматограмма РСО гиперозида.
РИС. 4.
Хроматограмма РСО рутина.
С целью количественного определения содержания отдельных флавоноидов анализ извлечения из травы зверобоя проводили по нижеприведенной методике.
Методика количественного определения содержания
флавоноидов в траве зверобоя пятнистого. Около 1 г (точная навеска) воздушно-сухого образца измельченного сырья с размером частиц, проходящих через сито с отверстиями диаметром 1 мм, помещали в колбу с притертой крышкой емкостью 100 мл, добавляли 40 мл 70% этилового спирта. Колбу взвешивали на тарирных весах с точностью до ±0,01 г и присоединяли к обратному холодильнику. Экстракцию осуществляли при нагревании на кипящей водяной бане в течение 60 мин. Извлечение охлаждали, доводили на тарирных весах до первоначальной массы 70% этиловым спиртом и фильтровали через бумажный фильтр с красной полосой.
5 мкл полученного извлечения вводили в хроматограф
«Милихром-5» и хроматографировали со скоростью потока
0,1 мл/мин. Детекцию анализируемых веществ проводили
при аналитической длине волны тах 360 нм. Анализ осуществляют в трех повторностях.
Параллельно осуществляли анализ растворов РСО рутина, кверцетина, гиперозида при длине волны 360 нм.
Содержание флавоноидов в процентах (Х) в траве зверобоя пятнистого в пересчете на абсолютно сухое сырье и соответствующий стандарт вычисляли по формуле:
НхтрсохУкхУпх 0×100
¦Л ---------------------------------- где
НРСОхтхГпхГкх (Ю0-Ж), д
Н — значение высоты пика определяемого флавоноида на хроматограмме испытуемого раствора-
НРСО — высота пика на хроматограмме раствора соответствующего РСО-
УК — объём разведения пробы, мл-
УП — объём пробы раствора, вводимого в колонку, мкл-
т — масса сырья, г-
тРСО — масса РСО, г.
Установлено, что содержание доминирующего флавоноида — гиперозида — в траве зверобоя пятнистого составляет 6,50%, тогда как рутин содержится в сырье данного растения в следовых количествах. Содержание кверцетина в траве зверобоя пятнистого составляет 0,23%. Результаты данных исследований свидетельствуют о том, что в траве зверобоя пятнистого доминирующим флавоноидом является гиперо-зид и, следовательно, этот вид отличается от зверобоя продырявленного, в сырье которого преобладает рутин. Принимая во внимание то обстоятельство, что гиперозид в отличие от рутина обладает антидепрессантной активностью [7], актуальным является сравнительное фармакологическое изучение фармакопейных видов в плане обоснования их использования в качестве источника антидепрессантов. Кроме того, одним из путей совершенствования стандартизации сырья и препаратов зверобоя, с учетом видовой принадлежности, является использование ВЭЖХ, позволяющей объективно оценивать подлинность и качество ЛРС [18].
Таким образом, проведено ВЭЖХ исследование компонентного состава травы зверобоя пятнистого. Установлено наличие и определены концентрации двух фармакологически активных компонентов — гиперозида и кверцетина. Показана перспективность использования метода ВЭЖХ в анализе сырья и препаратов зверобоя пятнистого.
Выводы
1. Изучен флавоноидный состав травы зверобоя пятнистого методом ВЭЖХ.
2. На хроматограмме водно-спиртового извлечения травы зверобоя пятнистого идентифицированы кверцетин, рутин и гиперозид, причем последний является доминирующим флавоноидом, и его содержание в сырье составляет 6,50%.
3. Показана перспективность использования метода ВЭЖХ для стандартизации травы зверобоя пятнистого и препаратов на основе сырья данного растения.
ш
ЛИТЕРАТУРА
1. Государственный реестр лекарственных средств. Том I. Официальное издание. Москва. 2008. 1398 с.
2. Куркин В. А., Правдивцева О. Е., Дубищев А. В., Кадацкая Д. В., Запесочная Г. Г., Жданов И. П. Исследование сырья и препаратов зверобоя. Фармация. 2005. Т. 53. № 3. С. 23−25.
3. Куркин В. А. Фармакогнозия: Учебник для студентов фармацевтических вузов (факультетов). 2-е изд., перераб. и доп. Самара: ООО «Офорт" — ГОУ ВПО «СамГМУ Росздрава», 2007. 1239 с.
4. Куркин В. А., Дубищев А. В., Правдивцева О. Е., Зимина Л. Н. Изучение нейротропной активности новых лекарственных препаратов из травы зверобоя. Медицинский альманах. 2009. № 4. С. 33−36.
5. Куркин В. А., Правдивцева О. Е., Зимина Л. Н., Дубищев А. В., Буланкин Д. Г., Корчагина Д. В. Актуальные аспекты создания нейротропных фитопрепаратов. Медицинский альманах. 2009. № 1. С. 46−49.
6. Куркин В. А., Правдивцева. О.Е., Зимина Л. Н. Антидепрессантная активность препаратов травы зверобоя. Фармация. 2010. Т. 58. № 5. С. 40−41.
7. Куркин В. А., Правдивцева О. Е. Зверобой: итоги и перспективы создания лекарственных средств: Монография. Самара: ГОУ ВПО «СамГМУ" — ООО «Офорт», 2008. 127 с.
8. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование- Семейства Pаeoniaceae — Thymaeleaceae. Л.: Наука, 1985. С. 11−19.
9. Беленовская Л. М., Буданцев А. Л. Продукты вторичного метаболизма Hypericum perforatum L. и их метаболическая активность. Растительные ресурсы. 2004. Т. 40. Вып. 3. С. 131−153.
10. Китанов Г. М., Блинова К. Ф. Современное состояние химического изучения видов рода Hypericum. Химия природных соединений. 1987. № 2. C. 185 203.
11. Куркин В. А., Правдивцева О. Е. Флавоноиды надземной части Hypericum perforatum L. Химия природных соединений. 2007. № 5. С. 512−513.
12. Куркин В. А., Правдивцева О. Е., Зимина Л. Н. Вопросы стандартизации сырья и препаратов зверобоя. Фармация. 2007. Т. 55. № 4. С. 12−14.
13. Куркин В. А., Правдивцева О. Е. Флавоноиды надземной части Hypericum perforatum. Химия природных соединений. 2007. № 5. С. 512−513.
14. Куркин В. А., Правдивцева О. Е. Сравнительное исследование содержания суммы флавоноидов и антраценпроизводных в препаратах травы зверобоя. Химико-фармацевтический журнал. 2008. Т. 42. № 10. С. 39−42.
15. Правдивцева О. Е., Куркин В. А. Исследования по обоснованию новых подходов к стандартизации сырья и препаратов зверобоя продырявленного. Химия растительного сырья. 2008. № 1. С. 81−86.
16. Правдивцева О. Е., Куркин В. А., Зимина Л. Н. Обоснование ресурсосберегающих технологий производства и переработки сырья зверобоя. Известия Самарского научного центра Российской академии наук. 2008. Т. 2. С. 156−158.
17. Правдивцева О. Е., Куркин В. А. Сравнительное исследование химического состава надземной части некоторых видов рода Hypericum L. Химия растительного сырья. 2009. № 1. С. 79−82.
18. Самылина И. А., Баландина И. А. Пути использования лекарственного растительного сырья и его стандартизация. Фармация. 2004. Т. 52. № 2. С. 39−41.

ПоказатьСвернуть
Заполнить форму текущей работой