Исследование молекулярной структуры фосфатидилэтаноламинов и фосфатидилсеринов меристем почек Picea obovata L. в состоянии низкотемпературной устойчивости

Тип работы:
Реферат
Предмет:
Химия


Узнать стоимость

Детальная информация о работе

Выдержка из работы

УДК 634 0. 813 Е. В. Алаудинова, П. В. Миронов, В.А. Поваляева
ИССЛЕДОВАНИЕ МОЛЕКУЛЯРНОЙ СТРУКТУРЫ ФОСФАТИДИЛЭТАНОЛАМИНОВ И ФОСФАТИДИЛСЕРИНОВ МЕРИСТЕМ ПОЧЕК PICEA OBOVATA L. В СОСТОЯНИИ НИЗКОТЕМПЕРАТУРНОЙ УСТОЙЧИВОСТИ
В статье приведены результаты исследования молекулярно-видового и позиционно-типового состава фосфатидилсеринов и фосфатидилэтаноламинов меристематических тканей зимующих почек Picea obovata L. Показано, что в составе обеих липидных форм преобладают одинаковые молекулярные виды. Доминируют компоненты, содержащие в Sn-2 положении жирные кислоты с 18 атомами углерода. В составе фосфатидилсеринов и фосфатидилэтаноламинов основную долю составляют предельнонепредельные (S/U) и непредельно-непредельные (U/U) типы соединений.
Ключевые слова: Picea obovata L., меристемы, фосфатидилсерины, фосфатидилэтаноламины, жирные кислоты, низкотемпературная устойчивость.
Ye. V. Alaudinova, P.V. Mironov, V.A. Povalyayeva
RESEARCH OF MOLECULAR STRUCTURE OF PHOSPHATIDYL-ETHANOLAMINES AND PHOSPHATIDYL-SERINES OF PICEA OBOVATA L. BUDS FORMATIVE TISSUES IN LOW-TEMPERATURE RESISTANCE STATE
The research results of molecular-specific and positionally-typical composition of phosphatidyl-serines and phos-phatidyl-ethanolamines of wintering Picea obovata L buds meristematic tissues are given in the article. It is shown that identical molecular kinds prevail in the structure of both lipid forms. The components containing fatty acids with 18 carbon atoms in the Sn-2 position dominate. Saturated-unsaturated (S/U) and unsaturated-unsaturated (U/U) types of compounds are the basic part in the composition of phosphatidyl-serines and phosphatidyl-ethanolamines.
Key words: Picea obovata L., formative tissues, phosphatidyl-serines, phosphatidyl-ethanolamines, fatty acids, low temperature resistance.
В предыдущей работе по исследованию сезонных изменений состава фосфолипидов (ФЛ) меристематических тканей почек хвойных древесных растений нами было показано, что у ели сибирской в осеннезимний период формирование криозащищенного состояния вегетативных почек сопровождается значительным увеличением содержания в их меристемах фосфатидилхолинов (ФХ), фосфатидилсеринов (ФС) и фосфатидилэтаноламинов (ФЭ) [1].
Анализ сезонной динамики содержания индивидуальных групп фосфолипидов позволил предположить, что у ели сибирской при формировании низкотемпературной устойчивости меристем в осенне-зимний период ФС образуются из ФЭ по вспомогательной реакции обмена:
ФЭ + серин ^ Фс — этаноламин [2].
Меристематические ткани почек хвойных представляют собой объект, при исследовании которого получение прямых доказательств путей биосинтеза вышеуказанных липидных форм весьма затруднительно. На данном этапе нами предпринята попытка получить косвенные доказательства, подтверждающие высказанное предположение. С этой целью была исследована молекулярная структура фосфатидилэтаноламинов и фосфатидилсеринов, выделенных из меристематических тканей зимующих почек ели сибирской.
Методика
Объектом исследования являлись меристематические ткани вегетативных почек ели сибирской obovata 1_.). Пробы отбирались с деревьев одинакового возраста (55−60 лет) в естественных древостоях пригородной зоны г. Красноярска как описано в работе [3]. Экстракцию и фракционирование липидов проводили по общепринятым методикам [4−6].
Определение индивидуального состава ФЛ проводили методом микротонкослойной хроматографии как описано в работе [5]. Отдельные группы ФЛ идентифицировали с помощью общих и специфических обнаружителей, позволяющих осуществлять характерные цветные реакции [7]. Выделение индивидуальных соединений ФС и ФЭ осуществляли методом препаративной тонкослойной хроматографии (ТСХ). Препаративное разделение проводили на стеклянных обезжиренных пластинках (20×20 см) с закрепленным слоем силикагеля. В качестве адсорбента использовали силикагель марки КСК Воскресенского химкомбината с размером частиц 100−200 меш. ФЛ наносили на пластинку в виде полосы на расстоянии 20 мм от нижнего края и хроматографировали в системе растворителей: хлороформ-метанол-вода (65: 25:4) [6]. По прохождении
фронта растворителей на 17−18 см пластинку извлекали из камеры, высушивали до полного удаления растворителя и опрыскивали 10% спиртовым раствором фосфорномолибденовой кислоты- проявившиеся полосы, соответствующие ФЭ и ФС, очерчивали иглой и соскабливали в пробирки. Адсорбированные вещества элюировали с поверхности силикагеля смесью хлороформ-метанол (2: 1), элюаты фильтровали и упаривали под вакуумом. Чистоту полученных индивидуальных компонентов ФЛ подтверждали методом ИК-спектроскопии в сочетании с аналитической микротонкослойной хроматографией (МТСХ) [6, 8].
Жирные кислоты ФЭ и ФС анализировали в виде их метиловых эфиров, которые получали путем кислотного метанолиза липидов [6]. Анализ метиловых эфиров проводили на газожидкостном хроматографе «Agilent Technologies» фирмы «Хьюлетт-Паккард» (США) с масс-селективным детектором, работающим в режиме электронного удара и регистрацией разделенных компонентов по полному ионному току. Колонка кварцевая капиллярная HP-5MC (длина 30 м, диаметр 0,25 мм, толщина слоя пленки фазы 0,33 мкм) — начальная температура термостата колонок -15о°С в изотермическом режиме 3 мин, затем температура термостата колонок увеличивалась со скоростью 20 °С/мин- конечная температура термостата колонок 280 °С- газ-носитель — гелий. Идентификацию жирных кислот осуществляли по масс-спектрам (библиотека масс-спектров NIST 02. L) и индексам удерживания.
Позиционное распределение жирных кислот в диглицеридной части молекул определяли путем ферментативного гидролиза фосфолипазой А2, отщепляющей ацильный радикал из Sn-2 положения [6]. Ферментолиз осуществляли, перемешивая образцы при комнатной температуре до полного прохождения реакции. Контроль вели с помощью двумерной МТСХ: 1-е направление — хлороформ-метанол-25%-й NH4OH (65: 35:5), 2-е направление — хлороформ-метанол-вода (65: 25:4). Затем растворитель упаривали досуха, остаток растворяли в смеси хлороформ-метанол (2: 1). Продукты ферментолиза разделяли препаративной ТСХ в системе хлороформ-метанол-вода (65: 25:4). Десорбированные с пластинок свободные жирные кислоты Sn-2 положения метилировали диазометаном и анализировали методом хроматомасс-спектрометрии. На основе данных позиционного распределения жирнокислотных радикалов в молекулах фосфолипидов, применяя расчет по методу Колемана в модификации Маркмана [9, 10], определяли возможный позиционно-видовой состав ФЭ и ФС.
Результаты и обсуждение
Качественный состав жирных кислот ФЭ и ФС представлен 17 одинаковыми компонентами (табл. 1).
Таблица 1
Состав и позиционное распределение жирных кислот в фосфатидилэтаноламинах и в фосфатидилсеринах ели сибирской, % от суммы жирных кислот
Жирная кислота ФЭ ФС
I ЖК ЖК Sn-1 ЖК Sn-2 I ЖК ЖК Sn-1 ЖК Sn-2
14:0 3,04 4,56 1,52 3,83 6,47 1,19
15:0 2,06 2,83 1,28 3,99 6,94 1,04
16:2 2,95 2,46 3,43 2,55 1,93 3,17
16:1 3,50 2,53 4,47 2,56 1,12 3,99
16:0 13,05 22,61 3,48 12,78 22,05 3,51
17:0 3,44 5,67 1,21 3,16 5,13 1,18
18:3 20,01 10,29 29,73 18,99 9,67 28,31
18:2 16,05 8,41 23,68 16,22 8,61 23,83
18:1 3,16 2,44 3,87 2,775 1,99 3,56
18:0 6,11 9,15 3,07 6,275 9,36 3,19
20:4 2,35 0,97 3,72 2,16 0,37 3,95
20:3 2,75 2,55 2,94 3,9 2,86 4,94
20:2 6,71 4,92 8,49 6,26 3,94 8,58
20:1 1,57 1,05 2,08 3,36 1,86 4,86
20:0 5,00 7,01 2,98 4,66 7,19 2,12
22:0 5,56 8,48 2,63 3,87 6,56 1,17
24:0 2,75 4,07 1,42 2,68 3,95 1,41
I S 40,99 64,38 17,59 41,23 67,65 14,81
I U 58,01 35,62 82,41 58,77 32,35 85,19
К 1,44 0,55 4,69 1,43 0,48 5,75
ИДС 1,37 0,80 1,94 1,36 0,72 1,99
Примечание: X б — предельных жирных кислот- X и — непредельных жирных кислот.
В обеих липидных формах в равном количестве содержались пальмитиновая (С160), стеариновая (С1& amp-0), линолевая (Сш), линоленовая (Сш), лигноцериновая (С240) кислоты. Эти пять компонентов составляли около 60% от суммы жирных кислот. Необходимо подчеркнуть, что между Sn-1 и Sn-2 положениями в молекулах ФЭ и ФС данные кислоты также распределены одинаково: непредельные (линолевая и линоленовая) преимущественно ацилируют положение Sn-2- предельные (пальмитиновая, стеариновая, лигноцериновая) — положение Sn-1.
Характеристика общего состава жирных кислот, а также жирных кислот, ацилирующих Sn-1 и Sn-2 положения, с помощью коэффициента ненасыщенности (К) выявила как сходства, так и некоторые различия между анализируемыми липидными формами (см. табл. 1). В исходных Фэ и ФС К практически одинаков (1,43+1,44). В положении Sn-1 К выше у ФЭ, в положении Sn-2 — наоборот К выше у ФС. Оценка ненасыщенности жирнокислотных радикалов в молекулах ФЛ с помощью индексов двойных связей (ИДС) показала, что в исходных ФЭ и ФС значения ИДС также практически одинаковы — 1,36+1,37. В положении Sn-1 значение ИДС у Фэ на 10% выше, чем у ФС. Однако в положении Sn-2 значения ИДС, так же, как и у исходных ФЭ и ФС, практически одинаковы (1,94±1,99).
На основании данных позиционного распределения жирных кислот в молекулах ФЭ и ФС (см. табл. 1) рассчитан возможный молекулярно-видовой состав исследованных липидных форм. Для Ф Э и ФС молекулярно-видовой состав представлен 289 компонентами (табл. 2). Из общего числа молекулярных видов у обеих липидных форм преобладали 19 одинаковых видов. Их индивидуальное содержание составляло примерно от 1 до 6,5% от суммы всех молекулярных видов, а общее содержание достигало 45%.
Таблица 2
Молекулярный состав фосфатилиэтаноламинов и фосфатидилсеринов, % от суммы диглицеридов
а& gt-1 14:0 15:0 16:2 16:1 16:0 17:0 18:3 18:2 18:1 18:0 20:4 20:3 20:2 20:1 20:0 22:0 24: 0
Sn-2 14:0 ФЭ 0,07 0,04 0,04 0,04 0,34 0,09 0,16 0,13 0,04 0,14 0,01 0,04 0,07 0,02 0,11 0,13 0,06
ФС 0,08 0,08 0,02 0,01 0,26 0,06 0,12 0,1 0,02 0,11 0,00 0,03 0,05 0,02 0,09 0,08 0,05
Sn-2 15:0 ФЭ 0,06 0,04 0,03 0,03 0,29 0,07 0,13 0,11 0,03 0,12 0,01 0,03 0,06 0,01 0,09 0,11 0,05
ФС 0,07 0,07 0,02 0,01 0,23 0,05 0,1 0,09 0,02 0,10 0,00 0,03 0,04 0,02 0,07 0,07 0,04
Sn-2 16:2 ФЭ 0,16 0,10 0,08 0,09 0,78 0,19 0,35 0,29 0,08 0,31 0,03 0,09 0,17 0,04 0,24 0,29 0,14
ФС 0,21 0,22 0,06 0,04 0,70 0,16 0,31 0,27 0,06 0,30 0,01 0,09 0,12 0,06 0,23 0,21 0,13
Sn-2 16:1 ФЭ 0,20 0,13 0,11 0,11 1,01 0,25 0,46 0,38 0,11 0,41 0,04 0,11 0,22 0,05 0,31 0,38 0,18
ФС 0,26 0,28 0,08 0,04 0,88 0,20 0,39 0,34 0,08 0,37 0,01 0,11 0,16 0,07 0,29 0,26 0,16
Sn-2 16:0 ФЭ 0,16 0,10 0,09 0,09 0,79 0,20 0,36 0,29 0,08 0,32 0,03 0,09 0,17 0,04 0,24 0,30 0,14
ФС 0,23 0,24 0,07 0,04 0,77 0,18 0,34 0,30 0,07 0,33 0,01 0,10 0,14 0,07 0,25 0,23 0,14
Sn-2 17:0 ФЭ 0,06 0,03 0,03 0,03 0,27 0,07 0,12 0,10 0,03 0,11 0,01 0,03 0,06 0,01 0,08 0,10 0,05
ФС 0,08 0,08 0,02 0,01 0,26 0,06 0,11 0,10 0,02 0,11 0,00 0,03 0,05 0,02 0,08 0,08 0,05
Sn-2 18:3 ФЭ 1,36 0,84 0,73 0,75 6,72 1,69 3,06 2,50 0,73 2,72 0,29 0,76 1,46 0,31 2,08 2,52 1,21
ФС 1,83 1,96 0,55 0,32 6,24 1,45 2,74 2,44 0,56 2,65 0,10 0,81 1,12 0,53 2,04 1,86 1,12
Sn-2 18:2 ФЭ 1,08 0,67 0,58 0,60 5,35 1,34 2,44 1,99 0,58 2,17 0,23 0,60 1,17 0,25 1,66 2,01 0,96
ФС 1,54 1,65 0,46 0,27 5,25 1,22 2,30 2,05 0,47 2,23 0,09 0,68 0,94 0,44 1,71 1,56 0,94
Sn-2 18:1 ФЭ 0,18 0,11 0,10 0,10 0,88 0,22 0,40 0,33 0,09 0,35 0,04 0,10 0,19 0,04 0,27 0,33 0,16
ФС 0,23 0,25 0,07 0,04 0,78 0,18 0,34 0,31 0,07 0,33 0,01 0,10 0,14 0,07 0,26 0,23 0,14
Sn-2 18:0 ФЭ 0,14 0,09 0,08 0,08 0,69 0,17 0,32 0,26 0,07 0,28 0,03 0,08 0,15 0,03 0,22 0,26 0,12
ФС 0,21 0,22 0,06 0,04 0,70 0,16 0,31 0,27 0,06 0,30 0,01 0,09 0,13 0,06 0,23 0,21 0,13
Sn-2 20:4 ФЭ 0,17 0,11 0,09 0,09 0,84 0,21 0,38 0,31 0,09 0,34 0,04 0,09 0,18 0,04 0,26 0,32 0,15
ФС 0,26 0,27 0,08 0,04 0,87 0,20 0,38 0,34 0,08 0,37 0,01 0,11 0,16 0,07 0,28 0,26 0,16
Sn-2 20:3 ФЭ 0,13 0,08 0,07 0,07 0,66 0,17 0,30 0,25 0,07 0,27 0,03 0,07 0,14 0,03 0,21 0,25 0,12
ФС 0,32 0,34 0,10 0,06 1,09 0,25 0,48 0,43 0,10 0,46 0,02 0,14 0,19 0,09 0,36 0,32 0,20
Sn-2 20:2 ФЭ 0,39 0,24 0,21 0,21 1,92 0,48 0,87 0,71 0,21 0,78 0,08 0,22 0,42 0,09 0,60 0,72 0,35
ФС 0,56 0,60 0,17 0,10 1,89 0,44 0,83 0,74 0,17 0,80 0,03 0,25 0,34 0,16 0,62 0,56 0,34
Sn-2 20:1 ФЭ 0,09 0,06 0,05 0,05 0,47 0,12 0,21 0,17 0,05 0,19 0,02 0,05 0,10 0,02 0,15 0,18 0,08
ФС 0,31 0,34 0,09 0,05 1,07 0,25 0,47 0,42 0,10 0,45 0,02 0,14 0,19 0,09 0,35 0,32 0,19
Sn-2 20:0 ФЭ 0,14 0,08 0,07 0,08 0,67 0,17 0,31 0,25 0,07 0,27 0,03 0,08 0,15 0,03 0,21 0,25 0,12
ФС 0,14 0,15 0,04 0,02 0,47 0,11 0,21 0,18 0,04 0,20 0,01 0,06 0,08 0,04 0,15 0,14 0,08
Sn-2 22:0 ФЭ 0,12 0,07 0,06 0,07 0,59 0,15 0,27 0,22 0,06 0,24 0,03 0,07 0,13 0,03 0,18 0,22 0,11
ФС 0,08 0,08 0,02 0,01 0,26 0,06 0,11 0,10 0,02 0,11 0,00 0,03 0,05 0,02 0,08 0,08 0,05
Sn-2 24:0 ФЭ 0,06 0,04 0,03 0,04 0,32 0,08 0,15 0,12 0,03 0,13 0,01 0,04 0,07 0,01 0,10 0,12 0,06
ФС 0,09 0,10 0,03 0,02 0,31 0,07 0,14 0,12 0,03 0,13 0,01 0,04 0,06 0,03 0,10 0,09 0,06
Одинаковыми доминирующими молекулярные видами оказались: 14: 0/18:3 (ФЭ — 1,36%, ФС — 1,83%) — 16: 0/18:3 (ФЭ — 6,72%, ФС — 6,24%) — 17: 0/18:3 (ФЭ — 1,69%, ФС — 1,45%) — 18: 3/18:3 (ФЭ — 3,06%, ФС — 2,74%) — 18: 2/18:3 (ФЭ — 2,50%, ФС — 0 2,44%) — 18: 0/18:3 (ФЭ — 2,72%, ФС — 2,65%) — 20: 2/18:3 (ФЭ -1,46%, ФС — 1,12%) — 20: 0/18:3 (ФЭ — 2,08%, ФС — 2,04%) — 22: 0/18:3 (ФЭ — 2,52%, ФС — 1,86%) — 24: 0/18:3 (ФЭ — 1,21%, ФС — 1,12%) — 14: 0/18:2 (ФЭ — 1,08%, ФС — 1,54%) — 16: 0/18:2 (ФЭ — 5,35%, ФС — 5,25%) — 17: 0/18:2 (ФЭ — 1,34%, ФС — 1,22%) — 18: 3/18:2 (ФЭ — 2,44%, ФС — 2,30%) — 18: 2/18:2 (ФЭ — 1,99%, ФС — 2,05%) — 18: 0/18:2 (ФЭ — 2,17%, ФС — 2,23%) — 20: 0/18:2 (ФЭ — 1,66%, ФС — 1,71%) — 22: 0/18:2 (ФЭ — 2,01%, ФС —
1,56%) — 16: 0/20:2 (ФЭ — 1,92%, ФС — 1,89%). Из них 18 содержали в Sn-2 положении остатки линолевой или линоленовой жирных кислот. Кроме того, и у ФЭ, и у ФС в одинаковом количестве присутствовал компонент, диглицеридная часть молекулы которого имела вид 16: 0/20:2 (1,89%).
На основании данных позиционно-видового состава (табл. 2) был установлен позиционно-типовой состав ФЭ и ФС (рис.). Как видно из рисунка, основную массу ФЭ и ФС составляли соединения, в которых Sn-2 положение ацилировано непредельными жирными кислотами, т. е. преобладали непредельнонепредельные (U/U) и предельно-непредельные (S/U) типы соединений. Их общее содержание в ФЭ и ФС практически одинаково — более 80%. В составе S/U типов обеих липидных форм преобладали молекулярные виды, в которых Sn-1 положение ацилировано пальмитиновой кислотой (Сш), а Sn-2 положение — ли-ноленовой (С18: 3) или линолевой (С18: 2) кислотами. Основными непредельными кислотами, за счет которых образованы U/U типы соединений, являлись линолевая (Сш) и линоленовая (Сш). Среди U/U типов в наибольшем количестве содержались молекулярные виды Sn-1 и Sn-2 положения, которых ацилированы линоленовой (С183) кислотой. Для предельно-предельных (S/S) типов характерны молекулярные виды, в которых Sn-1 и Sn-2 положения ацилированы пальмитиновой кислотой (С160), а также виды в Sn-1 положении содержащие пальмитиновую (С160), а в Sn-2 положении стеариновую (С180) кислоты. В составе непредельнопредельных (U/S) типов преобладали молекулярные виды, в которых Sn-1 положение ацилировано линолевой (С182) или линоленовой (С183), а Sn-2 — положение пальмитиновой (Сш) или стеариновой (С1& amp-0) кислотами.
о
о
т
о
g 60 отн
ен50
н
1 40
я и
?
*
й Й 30 S з
н
л
ок
и
«
и
н
и
20
10
0
50,94
10,74
7,56
48,57
37,96
31,65
6,67 5,91
S/S
S/U
U/S
U/U
Молекулярный тип ФЭ ФС
Позиционно-типовой состав фосфатилиэтаноламинов и фосфатидилсеринов меристематических тканей почек ели сибирской
Таким образом, в результате исследования был изучен позиционно-видовой и позиционно-типовой состав фосфатидилэтаноламинов и фосфатидилсеринов меристематических тканей зимующих почек P^cea obovata Ь Показано значительное сходство в составе жирных кислот и распределении ацильных радикалов
в структуре диглицеридной части молекул ФЭ и ФС. Основную долю индивидуальных компонентов у обеих липидных форм составляли молекулярные виды, у которых Sn-1 положение ацилировано пальмитиновой (Сш), стеариновой (С180) и лигноцериновой (С240) кислотами, а Sn-2 положение — линолевой (Сш) и линоленовой (Сш) кислотами. Установлено, что позиционно-типовой состав ФЭ и ФС практически идентичен: характеризуется значительным преобладанием U/U и S/U типов соединений. Показатели степени ненасы-щенности (ИДС и К) молекул ФЭ и ФС имеют очень близкие значения. Все вышесказанное делает предположение о возможности образования ФС в меристемах зимующих почек ели сибирской из ФЭ вполне обоснованным, т. е. ФЭ с большой долей вероятности могли служить непосредственными биосинтетическими предшественниками ФС.
В последнее время нами было получено еще одно доказательство, подтверждающее гипотезу образования в меристемах зимующих почек ели сибирской ФС из ФЭ. Как известно, продуктом реакции обмена между ФЭ и ФС является этаноламин. Его наличие в зимний период было обнаружено в составе водорастворимых веществ цитоплазмы ели методом ионообменной хроматографии [11].
Литература
1. Поваляева В. А., Алаудинова Е. В., Миронов П. В. Особенности состава фосфолипидов живых тканей хвойных в условиях низкотемпературной адаптации // Вестн. КрасГАУ. — 2008. — № 4. — С. 178−182.
2. Гудвин Т., Мерсер Э. Введение в биохимию растений: в 2-х т. Т.1. — М.: Мир, 1986. — 393 с.
3. Миронов П. В., Алаудинова Е. В., Репях С. М. Низкотемпературная устойчивость живых тканей хвойных.
— Красноярск: Изд-во СибГТУ, 2001. — 253 с.
4. Bligh E.G., Dyer W.J. A rapid method of total lipid extraction and purification // Can. J. Biochem. Physiology.
— 1959. — V. 37. — P. 911−917.
5. Folch J., Lees M., Stanley G.H. A simple method for isolation and purification of total lipids from animal tissues // J. Biol. Chem. — 1957. — V. 226. — № 1. — P. 497−509.
6. Кейтс М. Техника липидологии. — М.: Мир, 1975. — 322 с.
7. Исамухаметов А. Ш., Газизов Ф. Ю. Использование реагента Васьсковского-Светашева для комплексного обнаружения фосфолипидов и при их препаративном разделении методом ТСХ // Химия природных соединений. — 1988. — № 1. — С. 40−42.
8. Флеров М. А., Зубер В. Л. Применение инфракрасной спектроскопии для изучения фосфолипидов головного мозга // Вопр. мед. химии. — 1971. — Т. 17. — № 2. — С. 211−216.
9. Coleman M.H. A rapid lipase purification // Biochem. Biophys. Acta. — 1963. — V. 63. — № 1. — P. 146−150.
10. Маркман А. Л., Черненко Т. В., Умаров А. У. Липолитический метод определения глицеридного состава жиров // Прикл. биохим. и микробиол. — 1969. — Т. 5. — № 5. — С. 616−619.
11. Симкина С. Ю. Водорастворимые вещества меристем почек ели сибирской и сосны обыкновенной: сезонные изменения состава и свойств: автореф. дис… канд. хим. наук. — Красноярск, 2009. — 20 с.

ПоказатьСвернуть
Заполнить форму текущей работой