Применение автоматического анализатора mini Vidas для определения сальмонелл

Тип работы:
Реферат
Предмет:
Сельскохозяйственные науки


Узнать стоимость

Детальная информация о работе

Выдержка из работы

¦р .,.
УСКОРЕННЫЕ МЕТОДЫ МИКРОБИЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИ
Применение автоматического анализатора mini VIDAS
для определения сальмонелл
НЕЧАЕВ А.Ю., канд. вет. наук, докторант
Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины БАТАЕВА Д.С., кан. техн. наук
ВНИИ мясной промышленности ^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^
Сальмонеллезная пищевая токсикоинфекция относится к наиболее опасным и распространённым. Основной путь заражения-алиментарный. Факторами передачи инфекции являются различные продукты питания (мясо и мясные продукты, молоко и молочные продукты, рыба, яйца, овощи, фрукты и т. д.), изготовленные с нарушением режимов тепловой обработки или обсеменённые сальмонеллами на этапе производства. Сальмонеллы способны не только выживать, но и размножаться в мясе и мясопродуктах, не изменяя их органолептических свойств.
При существующей значительной доле импорта мяса и мясопродуктов на отечественном рынке сохраняется настороженность в отношении пищевых токсикоинфекций. Статистика, приведенная ВОЗ, регистрирует значительное увеличение в Европе заболеваний, обусловленных потреблением продуктов питания, контаминированных патогенными микроорганизмами. Один из возбудителей пищевых токсикоинфекций -сальмонелла, которая является причиной 77% случаев всех вспышек заболеваний пищевого происхождения.
Сальмонеллы представляют собой один из 12 родов большого семейства бактерий Enterobacteriacae. По морфологическим и культуральным характеристикам, а также токсино-обра-зованию большинство видов многочисленного рода Salmonella не отличаются друг от друга. В основе их классификации лежит строение соматического О-антигена и флагеллярных белков (жгутикового Н-антигена). На основании различий в строении соматического О-антигена их делят на серологические группы А, В, С, D, Е и т. д. По особенностям жгутикового Н-ан-тигена внутри каждой группы выделяются различные серова-рианты. По серологической типизации систематизировано более 2200 серотипов сальмонелл.
Длительность выявления сальмонелл из пищевых продуктов при использовании классических методов согласно ГОСТу составляет пять суток.
Таким образом, становится очевидной необходимость совершенствования микробиологических методов ветеринар-но-санитарной экспертизы с целью обеспечения безопасности пищевых продуктов, что требует использования высокоэффективных методов качественного определения бактерий рода Salmonella. Одна из возможностей быстрого выявления сальмонелл в пищевых продуктах — применение фермент-связанного флуоресцентного анализа с помощью тестов VIDAS SLM (Salmonella) на приборе miniVIDAS. Принцип его действия основан на взаимодействии комплекса высокоспецифичных моноклональных антител и антигенов О и Н. В состав набора для определения сальмонелл входят 60 стрипов, стандарт SLM, положительный контроль SLM (очищенный инактивированный антиген Salmonella), отрицательный контроль SLM, 60 наконечников SLM. На внутреннюю поверхность последних нанесены моноклональные антитела к Salmonella.
Согласно санитарно-эпидемиологическим правилам и нормативам (СанПиН 2.3.2. 1078−01) сальмонеллы не допускаются в 25 г продукта. Как и при классическом методе исследования, так и при быстрых методах выявления Salmonella пробы измельчаются и культивируются в одной из селективных сред, однако продукция, при изготовлении которой применяют тепловую обработку, перед посевом в селективную среду культивируется в
ВСЕ О МЯСЕ, 3−2006
забуференной пептонной воде. После 24−48 ч инкубации при температуре (37 ± 1) °С отбирают из селективной питательной среды 500 мл инактивированного нагреванием образца и вносят в первую лунку индивидуального пластикового стрипа. Данный метод определения сальмонелл не требует внесения в качестве антигена заведомо чистой культуры. Убедившись, что маркировка на наконечниках и стрипах совпадает, их помещают в анализатор. Все дальнейшие этапы анализа выполняются прибором автоматически. Образец перемешивается наконечником и антигены Salmonella, присутствующие в образце, связываются с антителами, нанесенными на внутреннюю поверхность наконечника. В лунках стрипа отмываются несвязанные компоненты, а на этапе определения — гидролиз субстрата до флуоресцирующего продукта (4-метил-умбелиферона), флуоресценция которого измеряется при 450 нм. На конечном этапе прибор автоматически анализирует полученные значения, сравнивает их с внутренними контрольными и интерпретирует результат как отрицательный или положительный. Результат выводится на принтер. Продолжительность анализа составляет около 45 мин.
Благодаря быстроте метода, результаты исследований пищевых продуктов на сальмонеллы могут быть выданы через 24−48 ч.
Несомненное достоинство методики — фермент-зависимый флюоресцентный анализ, обеспечивающий высокую чувствительность. Все реактивы, необходимые для анализа в нужном количестве, концентрации и молярности, находятся в герметически закрытых лунках стрипа. Нет необходимости приобретать дополнительные реактивы. Оригинальная конструкция анализатора исключает риск контаминации и упрощает его обслуживание.
Нами были исследованы на анализаторе miniVIDAS шесть культур микроорганизмов, по морфологическим признакам соответствующих бактериям рода Salmonella, из которых только четыре штамма дали положительный результат. С помощью реакции агглютинации была проведена типизация выделенных сальмонелл, в результате которой были идентифицированы: S. typhimurium, S^nteritidis, S. dublin и S. anatum.
Таким образом, в ходе работы с исследуемым материалом все положительные случаи выявления сальмонелл на автоматическом анализаторе miniVIDAS подтверждались классическими микробиологическими методами.
Представленный метод позволяет ускорить выявление возбудителя пищевой токсикоинфекции и в исследуемой продукции и, следовательно дает возможность приостановить или не допустить реализацию опасной для здоровья человека продукции. Метод может быть рекомендован для применения при ветеринарно-санитарной экспертизе.
35

ПоказатьСвернуть
Заполнить форму текущей работой