Изменения микроструктуры печени после частичной гепатэктомии у крыс

Тип работы:
Реферат
Предмет:
Медицина


Узнать стоимость

Детальная информация о работе

Выдержка из работы

Сборник трудов Института Фундаментальной медицины и биологии Казанского (Приволжского)
федерального университета
101
Изменения микроструктуры печени после частичной гепатэктомии у крыс
И. М. Газизов 12, М. С. Калигин 21, Д. И. Андреева 12, Т. С. Йылмаз 1,
А. А. Гумерова 2, А. П. Киясов 2
1 Казанский государственный медицинский университет, Казань
2 Казанский (Приволжский) федеральный университет, Казань
Changes of liver microstructure after partial hepatectomy in rats
I.M. Gazizov12, M.S. Kaligin 12, D.I. Andreeva 12, T.S. Yilmaz1, A.A. Gumerova 2, A.P. Kiassov2
1 Kazan State Medical University, Kazan
2 Kazan Federal University, Kazan
Высокая способность печени млекопитающих к регенерации является одним из излюбленных примеров «регенеративной медицины». При этом репарация печени не может рассматриваться как обычный процесс гипертрофии органа, а должен иметь определенные закономерные этапы. Знание этих этапов необходимо для правильной интерпретации данных в ходе терапии пациентов с патологией печени, в том числе при клеточной терапии. Однако исследования изменений микроструктуры печени в ходе репаративной регенерации крайне малочисленны. Данная работа проведена с целью оценки этих изменений в ходе репаративного процесса после частичной гепатэктомии у крыс. В ходе эксперимента через 1, 2, 3, 5, 7 сут. после операции оценивали размеры печеночных долек, измеряя межпортальные расстояния, анализировали пролиферацию клеток, участие в регенерации перисинусоидальных клеток, желчных протоков, афферентных и эфферентных сосудов печени, исследуя экспрессию специфических маркеров различных клеточных типов методами иммуногистохимии. Результаты исследования показали, после частичной гепатэктомии изменение микроструктуры печени осуществляется в два этапа: 1) гиперплазия печеночных долек путем пролиферации клеток печени до четвертых суток и 2) деление печеночных долек за счет ветвления желчных протоков, ветвей печеночной артерии, воротной вены и центральных вен с четвертых до седьмых суток.
Ключевые слова: микроструктура печени, регенерация, печеночная долька, частичная гепатэктомия.
В течение трехсотлетнего периода изучения печени сложились многочисленные концепции, объясняющие ее структурную организацию. Предположения о наличии в печени структурных единиц впервые были высказаны в работах И. Вепфера (1664) и М. Мальпиги (1666), в 1833 г. F. Kiernan описал классическую печеночную дольку [1], в 1906 г. F. Mall охарактеризовал портальную дольку [2], в 1954 г. A. Rappaport описал печеночный ацинус [3], а в 1970 г. E. Bloch была предложена динамичная функциональная единица печени [4]. Все эти концепции довольно «искусственны», но, тем не менее, они позволяют лучше понять сложно устроенный, многофункциональный орган. При этом микроструктура печени — динамична, и, безусловно, меняется в ходе развития и регенерации печени.
Классической моделью изучения регенерации печени является модель частичной гепатэктомии (ЧГ). Она была предложена и выполнена на кры-
e-mail: ilnazaziz@mail. ru
Ability of mammalian liver to regenerate is one of the favorite examples of & quot-regenerative medicine& quot-. At the same time liver regeneration can not be viewed as a simple hypertrophy, it must have some appropriate steps. Understanding of these processes is crucial for correct interpretation of liver therapy results, especially after cellular therapy. But, unfortunately, original and first-hand data regarding changes in liver microstructure during regeneration is relatively scarce. This work was dedicated to study changes of liver microstructure during liver regeneration after partial hepatectomy in rats. We analyzed proliferative processes, perisinusoidal cells involvement, sizes of classical hepatic lobules, participation of bile ducts, branches of afferent and efferent hepatic vessels in liver regeneration on 1, 2, 3, 5, 7 postoperative days. Our results have shown that liver microstructure during regeneration after partial hepatectomy undergoes two stages: hypertrophy of hepatic lobules by proliferation of liver cells until 4th day and division of hepatic lobules by branching of bile ducts, hepatic artery, portal and central veins from 4th until 7th postoperative day.
Key words: liver microstructure, regeneration, liver lobule, partial hepatectomy.
сах в 1931 г. G.M. Higgins и R.M. Anderson и позволила установить, что оставшиеся доли восстанавливают массу печени в течение 1−2 нед. [5]. В дальнейшем при изучении регенерации на модели ЧГ были описаны кинетика пролиферативного ответа различных клеточных типов [6], последовательность и уровень вовлечения факторов роста, факторов транскрипции, генов, роль гормонов [7], внеклеточного матрикса [8]. Однако, несмотря на длительное и детальное изучение регенерации печени после ЧГ, вопрос об изменении морфофункциональных единиц печени до сих пор остается практически неизученным.
Целью нашей работы стала оценка морфологических изменений классической печеночной дольки в ходе репаративной регенерации. Для изучения размеров печеночных долек мы применяли морфометрический метод, для изучения элементов портального тракта — иммуногистохимическое исследование
Клеточная трансплантология и тканевая инженерия Том VIII, № 3, 2013
102
Сборник трудов Института Фундаментальной медицины и биологии Казанского (Приволжского)
федерального университета
с помощью моноклональных антител к различным клеточным типам печени.
Материал и методы
Исследование проводили на белых беспородных крысах-самцах, находящихся на стандартном пищевом рационе вивария центральной научно-исследовательской лаборатории Казанского ГМУ со свободным доступом к воде. Операция Ч Г (67%) печени проводилась в условиях операционной под эфирным наркозом по методике, описанной ранее [9]. Удаленные во время операции доли печени взвешивали, фотографировали и использовали в качестве контроля. Эксплантацию органов производили через 1, 2, 3, 5 и 7 сут. после операции, материал помещали в 10% нейтральный формалин на 0,2 М фосфатном буфере (рН = 7,4) на 24 ч для фиксации, после чего изготавливали гистологические препараты по стандартной методике.
Срезы печени окрашивали иммуногистохимически с коммерческими антителами к ядерному антигену пролиферирующих клеток (PCNA, клон PC10, DAKO, 1: 100), десмину (клон D33, DAKO, 1: 30), а-гладкомышечному актину (a-SMA, клон 1A4, DAKO, 1: 50), цитокератину 19 (клон ВА17, DAKO, 1: 50). Иммуногистохимическая реакция была проведена стрептавидин-биотиновым методом при помощи визуализационной системы LSAB фирмы DAKO (Дания).
Морфометрические исследования проводили при помощи морфометрической окулярной сетки при увеличении х400 на микроскопе Leica DM 1000 (Германия). Классическая печеночная долька может быть представлена в виде правильного шестиугольника, в центре которого располагается центральная вена, а по углам — портальные тракты. Площадь правильного шестиугольника вычислялась по формуле:
S = 3 х l2 xV3/2,
где S — площадь шестиугольника, l — длина одной из сторон шестиугольника. Таким образом, для вычисления площади печеночных долек мы подставили значения межпортальных (порто-портальных) расстояний в формулу вычисления площади правильного шестиугольника.
Статистический анализ проводили при помощи графического пакета Microsoft Excel.
Результаты и обсуждение
Макроскопическое исследование показало, что восстановление массы оставшихся после ЧГ долей печени до исходного веса органа (7−10 г) завершалось к восьмым суткам после операции. При рутинном морфологическом исследовании через сутки после ЧГ мы наблюдали расширение синусоидных капилляров, которое исчезало к четвертым суткам, и стеатоз гепатоцитов, который через 1 сут. после операции можно было охарактеризовать как мелкокапельный, через 3 — крупнокапельный, через 5 — среднекапельный, через 7 — мелкокапельный в единичных гепатоцитах.
Результаты исследования экспрессии PCNA показали, что через сутки после операции происходило нарастание числа делящихся гепатоцитов (табл. 1), максимум их пролиферативной активности приходился на 2 сут. (рис. 1A). В последующем экспрессия PCNA в гепатоцитах уменьшалась, а через 7 сут. была сравнима с контрольными образцами. Среди делящихся гепатоцитов мы обнаружили также PCNA-позитивные синусоидные клетки печени и хо-лангиоциты, пик пролиферации которых наблюдали на 3−5 сут. после операции.
Морфометрическое исследование показало, что межпортальные расстояния увеличивались со вторых суток после операции, до

Статистика по статье
  • 42
    читатели
  • 24
    скачивания
  • 0
    в избранном
  • 0
    соц. сети

Ключевые слова
  • МИКРОСТРУКТУРА ПЕЧЕНИ,
  • РЕГЕНЕРАЦИЯ,
  • ПЕЧЕНОЧНАЯ ДОЛЬКА,
  • ЧАСТИЧНАЯ ГЕПАТЭКТОМИЯ,
  • LIVER MICROSTRUCTURE,
  • REGENERATION,
  • LIVER LOBULE,
  • PARTIAL HEPATECTOMY

Аннотация
научной статьи
по медицине и здравоохранению, автор научной работы & mdash- Газизов И. М., Калигин М. С., Андреева Д. И., Йылмаз Т. С., Гумерова А. А., Киясов А. П.

Высокая способность печени млекопитающих к регенерации является одним из излюбленных примеров «регенеративной медицины». При этом репарация печени не может рассматриваться как обычный процесс гипертрофии органа, а должен иметь определенные закономерные этапы. Знание этих этапов необходимо для правильной интерпретации данных в ходе терапии пациентов с патологией печени, в том числе при клеточной терапии. Однако исследования изменений микроструктуры печени в ходе репаративной регенерации крайне малочисленны. Данная работа проведена с целью оценки этих изменений в ходе репаративного процесса после частичной гепатэктомии у крыс. В ходе эксперимента через 1, 2, 3, 5, 7 сут. после операции оценивали размеры печеночных долек, измеряя межпортальные расстояния, анализировали пролиферацию клеток, участие в регенерации перисинусоидальных клеток, желчных протоков, афферентных и эфферентных сосудов печени, исследуя экспрессию специфических маркеров различных клеточных типов методами иммуногистохимии. Результаты исследования показали, после частичной гепатэктомии изменение микроструктуры печени осуществляется в два этапа: 1) гиперплазия печеночных долек путем пролиферации клеток печени до четвертых суток и 2) деление печеночных долек за счет ветвления желчных протоков, ветвей печеночной артерии, воротной вены и центральных вен с четвертых до седьмых суток.

ПоказатьСвернуть
Заполнить форму текущей работой