Изменения в иммунокомпетентных органах морских свинок, иммунизированных липополи-сахаридом francisella tularensis

Тип работы:
Реферат
Предмет:
Медицина


Узнать стоимость

Детальная информация о работе

Выдержка из работы

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В БИОЛОГИИ И МЕДИЦИНЕ
УДК 579. 841. 95+616−092. 19
С. А. Витязева, Т. П. Старовойтова, В. И. Дубровина, A.C. Сорокоумова, В. В. Войткова,
В. Б. Николаев, С. А. Татарников, K.M. Корытов
изменения в иммунокомпетентных органах морских свинок, иммунизированных липополисахаридом francisella tularensis
ФКУЗ Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора, г. Иркутск
Проведены исследования по изучению влияния препаратов липополисахарида туляремийного микроба на морфологические изменения в иммунокомпетентных органах экспериментальных животных при подкожном введении с помощью методов обзорной микроскопии и морфометрии. Установлена слабовыраженная активизации В-зависимых и Т-зависимых зон в иммунокомпетентных органах. Пролиферация антигенпредставляющих клеток на ранних сроках исследования указывает на активизацию клеточного иммунитета. Патоморфологические изменения, вызванные введением липополисахарида, однотипны и носят доброкачественный характер.
Ключевые слова: липополисахарид туляремийного микроба, иммунокомпетентные органы, морфометрия, микроскопия
changes iN iMMuNoCoMpETENT GuiNEA piGs iMMuNiziNG wiTH francisella tularensis lipopolysaccharide
S.A. Vityazeva, T.P. Starovoytova, V.I. Dubrovina, A.S. Sorokoumova, V.V. Voitkova,
V.B. Nikolaev, S.A. Tatarnikov, K.M. Korytov
Irkutsk Antiplague Research Institute of Rospotrebnadzor, Irkutsk
Influence of Francisella tularensis lipopolysaccharide preparations on morphological changes in immunocompetent experimental animals was studied by subcutaneous introduction using survey microscopy and morphometric methods. Low expressed activation of B- and T-dependent bands in immunocompetent organs was determined. Proliferation of antigen-presented cells at early stages of investigation indicates the cell immunity activation. Pathomorphological alterations caused by lipopolysaccharide inoculation are homogeneous and benignant.
Key words: Francisella tularensis lipopolysaccharide, immunocompetent organ, morphometry, microscopy
Известно, что патоморфологические изменения при введении иммуногенного препарата должны носить доброкачественный характер, характеризующийся преимущественно развитием продуктивного воспаления. Недопустимыми являются экссудативные и некротические процессы [4, 8]. Оценка морфологических, микроскопических и морфофункциональных изменений дает возможность оценить безвредность и иммуногенность вводимых препаратов.
Одним из направлений в разработке препаратов нового поколения является использование таких иммуногенов, как липополисахарид (ЛПС), который не обладает летальной токсичностью для экспериментальных животных и способен активировать систему комплемента по классическому пути. ЛПС также отводят ведущую роль в формировании иммунного ответа как основного антигена F. Ш-larensis. Тем не менее, исследований, касающихся оценки действия ЛПС туляремийного микроба на морфофункциональные изменения в органах и тканях экспериментальных животных, на сегодняшний день сравнительно немного.
Цель работы: сравнительная оценка морфологических изменений в иммунокомпетентных органах морских свинок, иммунизированных ЛПС Francisella tularensis разных подвидов.
материалы и методы
Экспериментальной моделью в опыте служили 220 беспородных, но стандартных по условиям содержания и массе (180−200 г) морских свинок обоих полов. В качестве объекта исследования использовали ЛПС туляремийного микроба разных подвидов. Экстракцию ЛПС проводили твином (ЛПСт) [5] и водно-фенольным способом (ЛПСф) [2] из штаммов возбудителя туляремии — Francisella Ш-larensis subsp. holarctica 15 НИИЭГ, F. tularensis subsp. tularensis Schu, F. tularensis subsp. holarctica И-250, F. tularensis subsp. mediasiatica А-120, F. tularensis subsp. novicida 112, полученных из музея живых культур ФКУЗ Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора.
Эксперимент повторяли дважды. Животных разделили на пять опытных групп по 20 морских свинок,
которым ЛПС вводили подкожно (в правую заднюю лапку) в дозе 10 мкг/0,2 мл ЗФР: 1 группа — ЛПС F. tularensis subsp. holarctica 15 НИИЭГ, 2 группа — ЛПС F. tularensis subsp. novicida Utah 112, 3 — F. tularensis subsp. mediasiatica А-120, 4 — F. tularensis subsp. holarctica И-250, 5 — F. tularensis subsp. tularensis Schu. В первом эксперименте животным вводили ЛПСт, во втором — ЛПСф. Контролем служили 10 интактных морских свинок. Животных всех групп выводили из эксперимента на 3, 7, 14, 21-е сутки от момента иммунизации.
Для оценки иммуногенеза исследовали иммунокомпетентные органы (регионарные лимфатические узлы, селезенка, тимус). Материал фиксировали в 10% нейтральном формалине, обезвоживали в спиртах возрастающей концентрации, заливали в парафин. Тканевые срезы толщиной 6 мкм окрашивали гематоксилин-эозином [6], метиловым зеленым-пиронином [7], по Ван-Гизону [6].
В работе использовали методы обзорной микроскопии. Количественную оценку клеточного состава и объемных долей коркового и мозгового вещества лимфатического узла и тимуса, а также белой и красной пульпы селезенки проводили с использованием морфометрии (при увеличении окуляра — 7, объектив — 8, на площади квадрата сетки 360 000 мкм2, в 10 полях зрения) [1] и компьютерной программы «Motic Images Plus» (версия 2) в следующих структурных компонентах: лимфатический узел — герминативный центр (реактивный) и корона лимфатического фолликула- тимус — корковое и мозговое вещество- селезенка — периартериальная зона, реактивный центр, мантийная и краевая зоны лимфатического фолликула (100 измерений клеточных элементов в различных участках на 5 срезах при помощи 25-узловой сетки на условной единице площади гистологического среза, равной 2500 мкм2, с использованием масляной иммерсии при увеличении окуляра — 7, объектива — 90). Автоматический анализ изображения производили с помощью светового микроскопа «Zeiss» (Германия) с видеокамерой «Moticam 2000», разрешение 1392 X 1040 пикселей, объектив 100. Подсчитывали число следующих видов клеток с помощью программы «ВидеоТест — Морфология», версия 4 (Санкт-Петербург): бластные формы клеток, малые лимфоциты, средние лимфоциты, плазматические клетки, макрофаги, а также стромальные элементы. Критериями дифференцировки являлись: форма, размер и цвет клетки, ядерно-цитоплазматическое соотношение, плотность ядра.
Относительное содержание венозных сосудов, а также соединительной ткани и телец Гассаля определяли, подсчитывая их количество в узловых точках стереометрической сетки на стандартной площади среза — 14 400 мкм2.
Полученные в ходе экспериментальной работы материалы обработаны статистически стандартными параметрическими методами с использованием t-критерия Стьюдента и непараметрическим методом Манна-Уитни с применением стандартного пакета программ «Statistica», версия
6 ((c)StatSoft, Inc 19 842 001, ИПЧИ 3 141 592 653 589У). Средневыборочные характеристики (среднее арифметическое, m — ошибка среднего) вычисляли для каждой выборки. Достоверными считали результаты, если вероятность ошибки была меньше
0,05 (р & lt- 0,05)

Статистика по статье
  • 13
    читатели
  • 11
    скачивания
  • 0
    в избранном
  • 0
    соц. сети

Ключевые слова
  • ЛИПОПОЛИСАХАРИД ТУЛЯРЕМИЙНОГО МИКРОБА,
  • ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫЕ ОРГАНЫ,
  • МОРФОМЕТРИЯ,
  • МИКРОСКОПИЯ,
  • FRANCISELLA TULARENSIS LIPOPOLYSACCHARIDE,
  • IMMUNOCOMPETENT ORGAN,
  • MORPHOMETRY,
  • MICROSCOPY

Аннотация
научной статьи
по медицине и здравоохранению, автор научной работы & mdash- Витязева Светлана Александровна, Старовойтова Татьяна Пантелеевна, Дубровина Валентина Ивановна, Сорокоумова А. С., Войткова В. В., Николаев Валерий Борисович, Татарников С. А., Корытов Константин Михайлович

Проведены исследования по изучению влияния препаратов липополисахарида туляремийного микроба на морфологические изменения в иммунокомпетентных органах экспериментальных животных при подкожном введении с помощью методов обзорной микроскопии и морфометрии. Установлена слабовыраженная активизации В-зависимых и Т-зависимых зон в иммунокомпетентных органах. Пролиферация антигенпредставляющих клеток на ранних сроках исследования указывает на активизацию клеточного иммунитета. Патоморфологические изменения, вызванные введением липополисахарида, однотипны и носят доброкачественный характер.

ПоказатьСвернуть
Заполнить форму текущей работой