Изучение влияния комбинированного орального контрацептива «Ярина» на функциональную активность гликопротеина-Р

Тип работы:
Реферат
Предмет:
Медицина


Узнать стоимость

Детальная информация о работе

Выдержка из работы

ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
© Котлярова А. А., Якушева Е. Н., 2014 УДК 615. 256. 3
ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ КОМБИНИРОВАННОГО ОРАЛЬНОГО КОНТРАЦЕПТИВА «ЯРИНА» НА ФУНКЦИОНАЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ
ГЛИКОПРОТЕИНА-Р
А. А. Котлярова, Е. Н. Якушева Рязанский государственный медицинский университет им. акад. И. П. Павлова, г. Рязань
В исследовании на кроликах изучено влияние комбинированного орального контрацептива «Ярина» на функциональную активность эффлюксного белка-транспортера гликопротеина-Р (Pgp). Активность Pgp оценивали методом анализа фармакокинетики маркерного субстрата фексофенадина. Установлено, что введение препарата «Ярина» в течение 14 и 21 дня приводит к ингибированию функциональной активности Рgp.
Ключевые слова: гликопротеин-Р, ABCB1 белок, этинилэстрадиол, дроспиренон, фексофенадин, фармакокинетика.
По данным многочисленных исследований нежелательные лекарственные реакции (НЛР) являются распространенным явлением в клинической практике [2, 3] Традиционно в группу высокого риска по лекарственным взаимодействиям относятся лица пожилого и старческого возраста, нередко применяющие большое число препаратов из-за наличия различных заболеваний. В западной литературе обсуждается проблема НЛР среди лиц молодого возраста. Результаты исследования свидетельствуют о преобладании НЛР среди женщин, относительно мужчин, и эта разница особенно очевидна в возрасте от 15 до 44 лет. Отмеченное явление может быть обусловлено гендер-ными различиями в функционировании системы биотрансформации и транспортеров лекарственных средств. Ключевая роль в данном процессе связана с половыми гормонами [4, 15, 18]. Помимо действия естественных гормонов, особенно актуально учитывать эффекты экзогенных гормональных препаратов, например, оральных гормональных контрацептивов, которые занимают важное место в про-
филактике возникновения нежелательной беременности, а также в лечении гинекологических, дерматологических и эндокринных заболеваний. В России, которая традиционно считается страной с выраженной гормонофобией — по данным официальной статистики, их применяют от 8 до 13% женщин репродуктивного возраста [1, 7]. Гормональные контрацептивы, чаще всего, применяются на протяжении нескольких месяцев, а иногда и лет. В период их приема нередко возникает необходимость фармакотерапии остро возникающих или хронических заболеваний. Это, несомненно, влечет за собой риск возникновения межлекарственных взаимодействий и может быть одной из причин изменения эффективности проводимой терапии и проявления нежелательных лекарственных реакций.
Гликопротеин-Р (Рgp) или АВСВ1 белок представляет собой эффлюксный АТФ-зависимый белок-транспортер, участвующий в переносе субстратов из клетки, а также препятствующий их всасыванию в кишечнике [21]. Рgp локализован на мембранах энтероцитов, гепатоцитов, эпите-
лиоцитов почечных канальцев и коры надпочечников, эндотелиоцитов гистоге-матических барьеров. Известно, что многие гормональные вещества, например половые стероиды, глюкокортикоиды, тиреоидные гормоны способны модулировать функциональную активность и экспрессию Pgp [5, 10, 12, 13]. Однако влияние комбинированных оральных контрацептивов на белок-транспортер изучено недостаточно.
Цель работы — изучить влияние комбинированного орального контрацептива «Ярина» на функциональную активность Pgp в эксперименте.
Материалы и методы
Работа выполнена на 10 половозрелых кроликах-самках породы Шиншилла, массой от 4500 до 5100 г., находящихся в состоянии течки. Препарат «Ярина» (0,03 мг этинилэстрадиола и 3,0 мг дроспире-нона- производитель: «BAYER SCHERING PHARMA AG», Германия) вводили животным per os в дозах 6,5 мкг/кг массы этинилэстрадиола и 650 мкг/кг массы дроспиренона 1 раз в сутки в 12 часов дня. За сутки до начала эксперимента, через 14 и 21 день введения препарата у кроликов определяли функциональную активность Pgp по фармако-кинетике его маркерного субстрата — фек-софенадина. Фексофенадин (Препарат «Телфаст» 180 мг- производитель: Aventis Pharma, Италия) вводили животным пе-рорально с помощью металлического зонда в дозе 67,5 мг/кг массы [11]. Через 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 12 и 24 часа от момента введения препарата из ушной вены кроликов забирали кровь в объеме 5 мл. Для получения плазмы крови пробы центрифугировали при 3000 об/мин в течение 10 минут и хранили до анализа при температуре -290С. Фексофенадин не подвергается метаболизму и его фармакокинетика зависит исключительно от функционирования Pgp, который препятствует его всасыванию в кишечнике и способствует выведению с желчью (90%) и мочой (10%) [17]. Таким образом, по концентрации фексофенадина в крови можно судить о функционировании Pgp, который
обеспечивает его более быстрое или медленное выведение, а также препятствует всасыванию в кишечнике.
Содержание фексофенадина в плазме крови определяли методом ВЭЖХ в изократическом режиме на хроматографе Stayer («Аквилон», Россия) и колонке Ultrasphere 4,6×250 мм (Beckman Coulter, США) с термостатированием при 45 °C. Анализ выполняли при длине волны 220 нм и скорости подвижной фазы 1 мл/мин. Экстракцию и хроматографирование маркерного субстрата осуществляли по методу Раменской Г. В. с соавт. [6] в модификации [9]. Количественное определение фексофенадина выполняли по методу абсолютной калибровки по высоте пиков, с использованием стандарта фексофенадина (Strasbourg cedex).
Расчет концентрации фексофенади-на осуществляли с помощью программы «Мультихром». Фармакокинетические параметры [максимальную концентрацию (Cmax, нг/мл), период полувыведения (Т½, ч), площадь под фармакокинетической кривой концентрация-время (AUC0_t нг*ч/мл- AUC0_M, нг*ч/мл), среднее время удерживания (MRT24, ч- MRT, ч), константу элиминации (Kei, 1/ч), общий клиренс (Cl, л/ч) объем распределения (Vd, л)] рассчитывали модельно-независимым методом с использованием программы Kinetica 5.0. Коэффициент абсорбции (Cmax/AUC0. 24) вычисляли с помощью офисного пакета «Excel 2010».
Статистическая обработка полученных данных осуществлялась с использованием программы Statistica 8.0. Характер распределения данных оценивали по критерию Шапиро-Уилка. Наличие статистически достоверных межгрупповых различий определяли по критерию Ньюмена-Кейлса после проведения дисперсионного анализа повторных измерений (тест ANOVA — для показателей, имеющих нормальное распределение, критерий Фридмана — для показателей, имеющих распределение отличное от нормального).
Полученные данные представлены в виде среднего арифметического значения и стандартной ошибки средней арифметиче-
скои в случае нормального распределения признака или в виде медианы, верхнего и нижнего квартиля — при распределении данных отличном от нормального.
Результаты и их обсуждение Изучение функциональной активности Р^ на уровне целостного организма проводили по анализу фармакокинетики его маркерного субстрата — фексофенади-на. Высокие концентрации фексофенади-на в плазме крови кроликов и его медленное выведение из организма свидетельствуют о низкой функциональной активности Р^, а низкое содержание фексофе-
надина в плазме крови и его быстрое выведение — о высокой функциональной активности белка-транспортера.
У интактных животных были получены фармакокинетические параметры фексо-фенадина, представленные в таблице 1.
14-дневное и 21-дневное перораль-ное введение кроликам-самкам препарата «Ярина» в дозе этинилэстрадиола 6,5 мкг/кг и дроспиренона 650 мкг/кг массы приводило к статистически значимому изменению фармакокинетических параметров маркерного субстрата Pgp — фек-софенадина (табл. 1).
Таблица 1
Основные фармакокинетические параметры фексофенадина при введении препарата «Ярина» (М±т — при нормальном распределении признаков- медиана, нижний и верхний квартиль — при распределении признака отличном от нормального)
Изучаемые параметры Исходные значения n=10 «Ярина» 14 дней n=10 «Ярина» 21 день n=10
Cmax, нг/мл 414,50 (224,60−454,66) 708,55* (529,01−1133,42) 711,66* (660,88−775,91)
Tmax, ч 4 (3−5) 4 (3−4) 4 (4−4)
Т½, Ч 4,67 (4,23- 9,02) 14,21* (12,33- 17,76) 13,07 (11,46- 14,86)
AUC0−24, нг*ч/ мл 2470,17±375,22 9132,73±1332,25* 10 532,06±1556,02*
AUC0-co, нг*ч/ мл 3248,12 (1595,31−3520,56) 11 199,4* (8956,55−19 594,5) 13 763,7* (10 042,7−17 671,7)
Cmax / AUCo-24 0,18 (0,11- 0,19) 0,09 (0,08- 0,1) 0,08 (0,07- 0,1)
Cmax / AUCo-ю 0,16 (0,11- 0,18) 0,06 (0,05- 0,07) 0,06 (0,05- 0,06)
MRT24, Ч 8,22 (6,95- 9,45) 10,66* (10,05- 11,21) 10,44* (10,34- 11,18)
MRT, ч 10,53 (6,98- 12,78) 21,52* (19,04- 25,81) 20,87* (18,17- 22,61)
Cl, л/ч 94,21 (73,61- 162,8) 24,11* (15,31- 29,62) 20,05* (16,98- 25,91)
Vd, л 1291,52±163,95 511,31±54,78* 427,81±44,54*
Kel, 1/ч 0,13±0,025 0,05±0,008* 0,05±0,007*
Примечание: * - р& lt-0,05 — достоверные различия со значениями у интактных животных (исходные зна-чения)-п — количество животных в серии.
Введение кроликам комбинированного орального контрацептива «Ярина» в течение 14 дней приводило к достоверному (p& lt-0,05) повышению Cmax фексофенадина на 70,9%, AUC0−24 на 269,7%, AUC0-M на 244,8%, Т½ на 204,3%, MRT24 на 29,7%, MRT на 104,4%, снижению Cl
на 74,4%, Vd на 60,4% и Ке1 на 61,5% по сравнению с исходными показателями.
Применение контрацептивного препарата в течение 21 дня также сопровождалось достоверным (р& lt-0,05) и по ряду показателей более выраженным изменением изучаемых фармакокинетических
показателей: наблюдалось повышение Cmax фексофенадина на 71,7%, Т½ на 179,9%, AUC0−24 на 326,4%, AUC0_M на 323,7%, MRT24 на 27%, MRT на 98,2%, снижение Cl на 78,7%, Vd на 66,9% и Kel на 61,5% в сравнении с данными интакт-ных животных.
В проведенном исследовании изучено влияние орального контрацептива «Ярина» на функциональную активность Pgp. Достоверное повышение значений Cmax, AUC0−24, AUC0_M, Tm, MRT24 и MRT и снижение Cl, Vd и Kel фексофенадина характеризуют замедленное выведение маркерного субстрата из организма животного и могут являться доказательством ингибирующего влияния комбинации этинилэстрадиола и дроспиренона на функциональную активность Pgp в печени и почках — органах, обеспечивающих выведение фексофенадина.
По современным представлениям в печеночном поглощении этинилэстрадио-ла участвуют три транспортера (OATP1B1, OATP2B1 и NTCP), а его экскрецию в желчь осуществляет, вероятно, транспортер BCRP, а не Pgp [22]. В своих исследованиях, Kim W.Y. с коллегами изучали влияние на модуляцию Pgp различных стероидных гормонов, в том числе и эти-нилэстрадиола. Исследование проводилось на культуре клеток карциномы ободочной кишки человека — LS180. Результаты показали, что этинилэстрадиол повышает уровень белка-транспортера Pgp в 3 раза по сравнению с контролем. По мнению авторов, необходимы дальнейшие исследования в условиях целостного организма [16].
В изученной нами литературе не было обнаружено информации о характере влияния дроспиренона на функциональную активность изучаемого белка-транспортера. Известно, что дроспиренон является производным спиронолактона обладающим гестагенным, антигонадо-тропным, антиандрогенным и антимине-ралокортикоидным эффектами [8]. Данные научной литературы о характере влияния спиронолактона на Р-gp противоречивы: по одним источникам спироналак-тон является субстратом и ингибитором
P-gp [19], по другим он повышает экспрессию P-gp в тонком кишечнике крыс [14], и клеточной линии гепатокарциномы человека HepG2 через прегнан X ядерный рецептор [20].
Таким образом, можно предположить, что ингибирующее влияние препарата «Ярина» на функциональную активность Pgp связано, видимо, с наличием в его составе гестогенного компонента дроспиренона. Концентрация гестагена в препарате в 100 раз выше, чем эстроген-ного компонента этинилэстрадиола, что определяет доминирование его эффекта на функциональную активность Pgp.
Выводы
Внутрижелудочное введение кроликам-самкам комбинированного орального контрацептива «Ярина» в дозах 6,5 мкг/кг массы этинилэстрадиола и 650 мкг/кг массы дроспиренона в течение 14 и 21 дней вызывает ингибирование функциональной активности белка-транспортера гликопро-теина-Р, что установленно по фармакокине-тике его маркерного субстрата — фексофенадина, и подтверждается достоверным повышением Cmax, AUCo-24, AUCO-m, T½ MRT24, MRT и снижением Cl, Vd и Kei.
Литература
1. Алесина И. Л. Современные тенденции гормональной контрацепции. /И.Л. Алесина // Фарматека. — 2011. — № 13. — С. 18−23.
2. Влияние индивидуальных особенностей пациентов на риск развития нежелательных лекарственных реакций / В. Г. Кукес [и др.] // Вестник Рос-здравнадзора. — 2011. — № 6. — С. 59−63.
3. Казаков А. С. Осложнения фармакотерапии, связанные с взаимодействием лекарственных средств / А. С. Казаков, В. К. Лепахин, А. В. Астахова // Рос. медико-биол. вестн. им. акад. И. П. Павлова. — 2013. — № 3. — С. 70−76.
4. Кукес В. Г. Клинико-фармакологичес-кие подходы к повышению качества доклинических и клинических исследований новых лекарственных средств / В. Г. Кукес // Ведомости научного центра экспертизы средств медицинского применения. — 2006. — № 1. — С. 7−10.
5. Метаболизм лекарственных средств. Научные основы персонализованной медицины: руководство для врачей / В. Г. Кукес [и др.]. — М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008. — 304 с.
6. Раменская Г. В. Разработка методики количественного определения маркера активности P-гликопротеина фексо-фенадина в плазме крови / Г. В. Раменская, Е. А. Скуридина, Л. М. Красных // Хим. -фармац. журн. — 2006. — Т. 40, № 12. — С. 47−50.
7. Репродуктивное здоровье населения России 2011: резюме отчета Федеральной службы государственной статистики (Росстата) Министерство здравоохранения РФ. — М., 2012. — 56 с.
8. Твердикова М. А. Дроспиренон -надежная контрацепция и неконтрацептивный эффект / М. А. Твердикова, А. А. Гависова // Русский медицинский журнал. — 2012. — Т. 20, № 1. — С. 1−5.
9. Черных И. В. Разработка методики определения концентрации фексофена-дина в плазме крови методом ВЭЖХ на хроматографе Stayer / И. В. Черных // Материалы межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых «Аспирантские чтения 2012». -Рязань, 2012. — С. 96−98.
10. Якушева Е. Н. Дозозависимое влияние тироксина на функциональную активность гликопротеина-Р в эксперименте / Е. Н. Якушева, А. В. Щулькин, А. С. Бирюкова // Биомедицина. — 2012. -№ 2. — С. 53−60.
11. Якушева Е. Н. Влияние финастерида на функциональную активность гли-копротеина-Р в эксперименте / Е. Н. Якушева, И. В. Черных // Рос. медико-биол. вестн. им. акад. И. П. Павлова. -2012. — № 4. — С. 46−50.
12. Якушева Е. Н. Влияние орального гормонального контрацептива «Жанин» на функциональную активность гли-копротеина-Р / Е. Н. Якушева, А. А. Котлярова, А. А. Никифоров // Рос. медико-биол. вестн. им. акад. И. П. Павлова. — 2013. — № 4. — С. 65−70.
13. In vitro and ex vivo evidence for modulation of P-glycoprotein activity by progestins / M. Frohlich [et al.] // Biochem Pharmacol. -2004. — Vol. 68, № 12. — P. 2409−2416.
14. Induction of rat intestinal P-glycoprotein by spironolactone and its effect on absorption of orally administered digoxin / C.I. Ghanem [et al.] // J. Pharmacol. Exp. Ther.
— 2010. — Vol. 318, № 3. — P. 1146−1152.
15. Kando J.C. Gender as a risk factor for adverse events to medications / J.C. Kando, K.A. Yonkers, J.O. Cole // Drugs. -1995. — Vol. 50. — P. 1−6.
16. Kim W.Y. P-glycoprotein (P-gp/MDR1)-mediated efflux of sex-steroid hormones and modulation of P-gp expression in vitro / W.Y. Kim, L.Z. Benet // Pharm Res. — 2004. — Vol. 21, № 7. — P. 12 841 293.
17. Molimard M. Comparison of pharmacoki-netics and metabolism of desloratadine, fexofenadine, levocetirizine and mizolas-tine in humans / M. Molimard, B. Diquet, M.S. Benedetti // Fund. & amp- Clin. Pharmacol.
— 2004. — Vol. 18, № 4. — P. 399−411.
18. Muaed J. A. Factors affecting the development of adverse drug reactions (Review article) / J. A. Muaed //Saudi Pharmaceutical Journal. — 2014. — Vol. 22, № 2. — P. 83−94.
19. Polymorphisms in human MDR1 (P-glycoprotein): recent advances and clinical relevance / C. Marzolini [et al.] // Clin Pharmacol Ther. — 2004. — Vol. 75, № 1. — P. 13−33.
20. Pregnane X receptor mediates the induction of P-glycoprotein by spironolactone in HepG2 cells / J.P. Rigalli [et al. ]// Toxicology. — 2011 -Vol. 285, № 1. -P. 18−24.
21. Schinkel A.H. The physiological function of drug-transporting P-glycoproteins/ A.H. Schinkel // Cancer Biology. — 1997.
— № 8. — P. 161−170.
22. Transporter Studies with the 3-O-Sulfate Conjugate of 17 — Ethinylestradiol: Assessment of Human Liver Drug Transporters / H. Yong-Hae [et al.] // Drug metabolism and disposition. — 2010. -Vol. 38, № 7. — P. 1072−1082.
ORAL HORMONAL CONTRACEPTIVE & quot-YARINA"- INFLUENCE ON P-GLYCOPROTEIN FUNCTIONAL ACTIVITY
A.A. Kotljarova, E.N. Yakusheva
In the research on rabbits influence of combined oral contraceptive & quot-Yarina"- on the functional activity of the protein efflux transporter P-glycoprotein (Pgp) was studied. Pgp activity was assessed by pharmacokinetic analysis of marker substrate fexofenadine. It was found that administration of the drug & quot-Yarina"- for 14 and 21 days resulting in inhibition of Pgp functional activity.
Keywords: P-glycoprotein, ABCB1 protein, ethinylestradiol, drospirenone, fexofenadine, pharma-cokinetics.
Котлярова А. А. — аспирант кафедры фармакологии с курсом фармации ФДПО ГБОУ ВПО РязГМУ Минздрава России.
E-mail: KAA. RZ@yandex. ru.
Якушева Е. Н. — д-р мед. наук, доц., зав. кафедрой фармакологии с курсом фармации ФДПО ГБОУ ВПО РязГМУ Минздрава России. E-mail: e. yakusheva@rzgmu. ru.

ПоказатьСвернуть
Заполнить форму текущей работой