Экспериментальногистологические аспекты исследования донорского материала, консервированногов условиях вакуума

Тип работы:
Реферат
Предмет:
Медицина


Узнать стоимость

Детальная информация о работе

Выдержка из работы

Канюков В.Н., Стадников А. А., Трубина
О.М., Подопригора Р. Н., Казеннов А. Н. Оренбургский филиал ФГУ «МНТК „Микрохирургия глаза“ им. акад.
С. Н. Федорова Росмедтехнологии»
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГИСТОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ДОНОРСКОГО МАТЕРИАЛА, КОНСЕРВИРОВАННОГО В УСЛОВИЯХ ВАКУУМА
Представлены результаты экспериментально-гистологического исследования донорского материала и алгоритм технологии консервации донорских тканей. Обосновано использование консервированных трансплантатов в условиях вакуума для целей пластической офтальмохирургии.
Актуальность
Ухудшение экологической, криминальной и социальной обстановки в последние годы привело к увеличению врожденной и приобретенной патологии органа зрения у детей. К тому же технический прогресс, компьютеризация ведут к неуклонному росту зрительных нагрузок, в связи с чем увеличивается число лиц с миопией. Причинами инвалидности у детей являются осложненная миопия, атрофия зрительного нерва, последствия травм глаза, врожденное недоразвитие глаз, кератоконус, кератоглобус и др. (Е.А. Каспарова, 2003- З.Д. Беркен-Хаева, 2006- В. Г. Ермолаев, В. Н. Алексеев, В. Ю. Тегза, А. В. Ермолаев, 2008). Для реабилитации данной категории больных требуется проведение склероукрепляющих и реваскуляризирующих операций, послойных, сквозных кератопластик и др. (Н.Н. Пивоваров, Э. Ф. Приставко, Ю. К. Ширшиков, 1976- Т. П. Малышева, 1985- Э. С. Аветисов, 1999- О. И. Кашура, 2008). Для этих целей требуется наличие достаточного количества пластического материала.
Потребности в трансплантационном материале выполняют созданные Глазные банки. С целью длительного сохранения донорского материала его подвергают предварительной консервации. Наличие множества методик консервации и постоянные исследования в этой сфере свидетельствуют о том, что существующие методы не достаточно отвечают всем требованиям.
Широкое применение вакуума в медицине при лечении ряда заболеваний: инфаркта миокарда, остеохондроза, артрита (А.М. Жиб-риль, 1990), бронхиальной астмы, хронических риносинуситов (С.К. Жуков, 1998), в терапии раневых процессов (Ю.А. Давыдов, 1975- Г. Н. Пономаренко, 2000) и т. д. дало нам основание применить данный фактор в консервации тканей.
В Оренбургском филиале «МНТК „Микрохирургия глаза“ имени академика С. Н. Федорова Росмедтехнологии» предложен альтернативный способ консервации донорских тканей — вакуумная консервация при гипотермии (В.Н. Канюков, 2005).
Цель
Обосновать технологию консервации донорских тканей в условиях вакуума для пластической офтальмохирургии на основании результатов экспериментально-гистологических исследований.
Материал и методы
С целью изучения гистологической структуры донорских тканей, консервированных в условиях вакуума, нами исследованы материалы роговицы, аорты, твердой оболочки головного мозга. Для проведения работы было использовано 24 роговицы, 8 фрагментов аорты и 8 фрагментов твердой оболочки головного мозга. Роговица была подвергнута консервации в сроки 3, 7 и 14 суток, а аорта и твердая оболочка головного мозга в сроки 3, 7, 14 и 30 суток. Затем, в указанные сроки материал дегидратировали в этаноле возрастающей крепости (50°-100° С) и заливали в парафин-целлоидин. Гистологические срезы, толщиной 5−6 мкм, после депара-финирования окрашивали гематоксилином Майера и эозином, перйодатом К и реактивом ШИФФА (контроль с амилазой), пикрофук-сином по Ван — Гизону, а также альциановым синим (рН-7,8) по Стидмену.
Метод консервации, который мы предлагаем, относится к разделу физических. Преимуществами его являются: понижение давления воздуха, отсутствие активной составляющей воздуха — кислорода, что замедляет окислительные процессы, а это, в свою очередь, ведет к уменьшению энергетических затрат в тканях.
Упоминаний о применении вакуума для консервации донорских тканей в офтальмохирургии в литературе нет.
Вакуумная система изготовлена фирмой Zepter в Menfe Jndustria, Sp. A (Италия), основана на современных высоких промышленных технологиях. Это уникальная, всемирно известная система нашла широкое применение в пищевой промышленности для подготовки, хранения и быстрого здорового приготовления любого вида продуктов. При сроке хранения от 10 дней до года в продуктах сохраняются все питательные вещества (белки, минеральные вещества и т. д.), сохраняется их внешний вид и органолептические свойства.
Это дало основание полагать, что в условиях вакуума возможна длительная сохранность и донорских тканей, что обеспечивается предотвращением размножения бактерий и замедлением процессов аутолиза и перекис-ного окисления липидов цитологических структур.
Система представляет собой вакуумный насос для откачивания воздуха и контейнера для хранения материала. Эргономичная форма насоса удобна в обращении, он имеет легко переносимую удобную подставку. Контейнер представляет собой стеклянную емкость, он снабжен специальной сеткой, изготовленной из эластомера. Сетка выполняет не только функцию подставки для размещения емкостей с донорскими тканями, но и служит для отделения влаги из тканей. Максимальное разряжение, которое можно получить при использовании данной системы 0,5 атм (низкий вакуум). Герметичность емкости контейнера обеспечивается клапаном в центре крышки и силиконовой прокладкой, проходящей по ее краю. Крышка универсальна, изготовлена из ударопрочного нетоксичного поликарбоната LEXAN. Она имеет календарное кольцо для установки даты ва-куумирования.
Емкость практична, безопасна, удобна в обращении, легка, устойчива к нагреванию и холоду, легко моется. Ее можно стерилизовать, она не взаимодействует с химическими веществами.
Лаборатория Глазного банка Оренбургского филиала ФГУ «МНТК „Микрохирургия глаза“ им. акад. С. Н. Федорова Росмедтехнологии» оснащена несколькими видами
вакуумных систем. Системы отличаются моделями контейнеров. Они разные по своей емкости и основанию. Имеются варианты контейнеров с квадратной основой, с прямоугольной и круглой.
Используемые модели контейнеров зависят от вида консервированной ткани.
Емкости контейнеров не только практичны, но и имеют привлекательный дизайн, что способствует оптимальному процессу работы.
Способ консервации донорского материала в вакууме осуществляли в следующей последовательности:
1. Донорский материал (трансплантат) укладывали на дно стерильного бюкса, который устанавливали на сетку, расположенную на дне пластмассового контейнера с крышкой с силиконовой прокладкой. В центре крышки имеется отверстие с клапаном, к которому присоединяется вакуумный насос.
2. Откачивали воздух из контейнера до 0,5 атм.
3. Отсоединяли контейнер от насоса и помещали его в бытовой холодильник, где поддерживали температуру порядка (+)20- (+)40С.
Получена приоритетная справка «Способ консервации донорских тканей в офтальмохирургии» (В.Н. Канюков, 2006 г.).
Развитие новых технологий в пластической офтальмохирургии тесно связано с изучением особенностей пролиферации и цитодифферен-цировок трансплантируемых объектов. Для успешной трансплантации ведущим является сохранение фибриллоархитектоники в трансплантатах.
Результаты и обсуждение
Результаты гистологических исследований роговицы, подверженных экспозиции в вакууме в течение 3-х суток не показали существенных структурных изменений ее эпителиальных и соединительнотканных элементов. Передний эпителий, собственное вещество роговицы, передняя и задняя пограничные мембраны, а также эндотелий сохранили типичную структурную организацию. Через 7 суток консервации определены признаки дискомплексации десцеметовой мембраны (оболочки) роговицы, что проявилось в ее разрыхлении и локальной складчатости. Это сочеталось с эрозивными изменениями клеток «заднего» эпителия. Боуменова мембрана при этом была не повреждена на всем протяжении.
Через 14 суток указанные явления деструкции десцеметовой оболочки нарастали. К ним добавились процессы некробиоза и лизиса многослойного плоского неороговевающего эпителия и боуменовой мембраны. Было установлено, что оптимальным сроком консервации роговицы следует считать 3 суток.
Анализ гистопрепаратов показал, что оптимальным режимом консервации для аорты является 14−30 суток. В эти сроки аорта (ее средняя оболочка) имеет сохранный эластический каркас, без признаков разволокнений, разрыхлений и деструкции. Гладкие мышечные клетки с пикноморфными ядрами и узким ободком цитоплазмы единичны. Аморфный матрикс, расположенный между эластическими мембранами содержит амилазоустойчивые гликопротеины и сульфатированные фракции гликозами-ногликанов. В более ранние сроки консервации гистоструктура эластического каркаса и гистохимический состав аорты аналогичны. Однако между мембранами располагается значительное число гладких миоцитов. Они имеют крупные ядра с деконденсированным хроматином, большой ободок базофильной цитоплазмы, что свидетельствует об их цитофизиологической сохранности, а, следовательно, и о высокой им-муногенности.
Твердая оболочка головного мозга имеет оптимальную гистоструктуру в сроки 7−10 дней консервации. В эти сроки она состоит из плотной волокнистой соединительной ткани, с сохранением преимущественно эластических волокон. Основная масса пучков соединительнотканных волокон ориентирована продольно, меньшая часть -косопоперечно. Клеточные элементы (типа фиброцитов) единичны. В аморфном межклеточном веществе идентифицированы гликопротеины и гликозаминогли-каны, количество которых визуально начинает значительно снижаться через 10 суток консервации. Следует особенно подчеркнуть, что через 14 и особенно 30 суток консервации в твердой оболочке головного мозга происходят процессы дискомплексации волокнистых структур, а углеводные биополимеры не определяются. Это в свою очередь приводит к разрыхлению пучков соединительнотканных волокон, их микроповреждениям, разволокнени-ям с формированием значительных дефектов стромы.
Заключение
Результаты проведенных нами исследований показали, что предложенный нами альтернативный способ консервации донорских тканей в вакууме обеспечивает их длительную сохранность. Отсутствие дестабилизирующих расстройств в консервированных тканях рассматриваются как критерии оценки доказательства возможности использования подобных аллотрансплантатов для целей офтальмохирургии.
Консервация донорских тканей в условиях вакуума при гипотермии — проста, экономична и позволит иметь достаточный запас трансплантационного материала.
Список использованной литературы:
1. Аветисов Э. С. Близорукость. М.: Медицина, 1999. — 286 с.
2. Малышева Т. П. Эффективность аллосклеропластики заднего полюса глаза при быстро прогрессирующей миопии у детей и подростков. Автореф. дис… канд. мед. наук // М. — 1985. — 184 с.
3. Пивоваров Н. Н., Приставко Э. Ф., Ширшиков Ю. К. Простой метод хирургической профилактики прогрессирования близорукости // Материалы 1-й Всесоюз. конф. по вопросам детск. Офтальмол. — М., 1976. — С. 141−146.
4. Жибриль А. М. Вакуумфонофорез соединений лития в комплексном лечении больных ревматоидным артритом // Одес. НИИ курортологии и мед. реабилитации. -Одесса, 1990. — С. 16.
5. Жуков С. К. Лечение хронических риносинуситов у больных бронхиальной астмой методом вакуумного дренажа синус — катетером «Ямик» // Яросл. обл. клинич. больница. — СПб., 1998. — С. 21.
6. Давыдов Ю. А. с соавт. Вакуум — терапия ран и раневой процесс. — М.: Медицина, 1999. — 140 с.
7. Пономаренко Г. Н. Вибровакуумтерапия. Сб. статей науч. -прак. общ-ва врачей-косметологов С. -Петербурга. -СПб., 2000. — Вып. 1. — С. 83−86.
8. Ермолаев В. Г., Алексеев В. Н., Тегза В. Ю, Ермолаев А. В. Структура первичной глазной инвалидности у детей с офтальмопатологией // VII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «Федоровские чтения»: Сборник научных статей. — М., 2008. — С. 30−31.
9. Кашура О. И. Детское отделение в структуре Хабаровского филиала ФГУ МНТК «Микрохирургия глаза»: итоги и перспективы // Юбилейная научно-практическая конференция «Новые технологии в диагностике и лечении заболеваний органа зрения»: Сборник научных статей. — Хабаровск, 2008. — С. 70−77.
10. Каспарова Е. А. Ранняя диагностика, лазерное и хирургическое лечение кератоконуса Автореф. дис. док. мед. наук. — М., 2003. — 44 с.
11. Беркен-Хаева З.Д. Медико-социальный анализ офтальмопатологии у детей Республики Ингушетии // Проблемы офтальмологии. — 2006. — № 2. — С. 30−31.

ПоказатьСвернуть
Заполнить форму текущей работой