Количественная нагрузка вируса папилломы человека 16 типа и прогнозирование эффективности лечения рака шейки матки

Тип работы:
Реферат
Предмет:
Медицина


Узнать стоимость

Детальная информация о работе

Выдержка из работы

Количественная нагрузка вируса папилломы человека 16 типа и прогнозирование эффективности лечения рака шейки матки
Киселева В. И., Крикунова Л. И., Любина Л. В., Мкртчян Л. С., Безяева Г. П. ,
Панарина Л. В., Скугарев С. А., Куевда Д. А. 1, Трофимова О. В. 1, Саенко А. С.
ФГБУ МРНЦ Минздравсоцразвития России, Обнинск-
1 ФГУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора России, Москва
В соскобах из цервикального канала и биоптатах опухоли 64 больных раком шейки матки (с гистологически верифицированным первичным вирусом папилломы человека 16 типа) до начала лечения методом ПЦР в режиме реального времени исследованы: количественная нагрузка, физический статус вируса и экспрессия вирусного онкогена Е7. В группе пациентов с интегрированной ДНК ВПЧ показано, что чем выше степень интеграции вируса, тем ниже его количественная нагрузка, выше экспрессия вирусного онкогена Е7 и ниже частота безре-цидивной выживаемости больных. В группе с эписомальной ДНК ВПЧ не наблюдалось корреляции вирусной нагрузки ни с экспрессией Е7 (R=-0,36, p=0,34, n=9), ни с выживаемостью больных. Предполагается, что вирусная нагрузка в опухолях с интегрированной ДНК ВПЧ 16 может косвенным образом отражать тяжесть прогноза заболевания раком шейки матки.
Ключевые слова: рак шейки матки, вирус папилломы человека, количественная нагрузка, интеграция, экспрессия, прогноз.
В настоящее время этиологическая роль вируса папилломы человека (ВПЧ) высокого канцерогенного риска (ВКР) в канцерогенезе рака шейки матки (РШМ) убедительно доказана. В ряде работ показано, что персистенция вируса с высокой нагрузкой может способствовать быстрой прогрессии цитологически нормальных клеток шейки матки в диспластически измененные и далее — в опухолевые [2, 4, 8, 9, 14, 16]. Роль количественной нагрузки ВПЧ ВКР в прогнозе течения уже состоявшегося РШМ до сих пор окончательно не определена. По данным одних авторов, чем выше вирусная нагрузка, тем лучше клинический исход заболевания [5, 13]. По другим данным, вирусная нагрузка не имеет никакого значения для прогноза, значимой является только экспрессия вируса [3]. Задачей настоящего исследования явилось изучение возможной связи между количеством копий ДНК ВПЧ 16 и экспрессией вирусного онкогена Е7 у больных РШМ и значения вирусной нагрузки для прогноза данного заболевания.
Материалы и методы
Исследуемую группу составили 64 больные с гистологически верифицированным первичным ВПЧ 16-положительным раком шейки матки. Степень распространенности опухолевого процесса оценивали в ходе комплексного обследования с использованием ультразвукового метода исследования (УЗИ) с допплеровским картированием, компьютерной томографии (КТ) и магнитно-резонансной томографии (МРТ). Основным методом лечения являлась сочетанная лучевая терапия. У больных с местно-распространенными формами заболевания проводилось химиолучевое лечение, которое предусматривало проведение сочетанной лучевой терапии на
Киселева В.И.* - в.н.с., к.б.н.- Крикунова Л. И. — зав. отделением, д.м.н., проф.- Любина Л. В. — в.н.с., к.м.н.- Мкртчян Л. С. — с.н.с., к.м.н.- Безяева Г. П. — н.с.- Панарина Л. В. — н.с.- Скугарев С. А. — врач-онколог- Саенко А. С. — зам. директора по научн. работе, д.м.н., проф. ФГБУ МРНЦ Минздравсоцразвития России. Куевда Д. А. — зам. заведующего отд. по научн. работе- Трофимова О. В. — научн. сотр. ФГУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора России.
'Контакты: 249 036, Калужская обл., Обнинск, ул. Королева, 4. Тел.: (48 439) 9−72−77- e-mail: vaivki@mrrc. obninsk. ru.
фоне 3-х циклов нормодозной полихимиотерапии препаратами платины и фторурацила. Эффективность терапии оценивали по степени регрессии опухоли спустя 3 месяца после окончания курса лечения.
Наличие ДНК ВПЧ исследовали до начала лечения в соскобах эпителиальных клеток из цервикального канала и наружной поверхности шейки матки (ШМ), а также в соответствующих биоптатах опухоли. Выделение ДНК проводили сорбентным методом с применением наборов «ДНК-сорб В» — для соскобов и «ДНК-сорб С» — для биоптатов (ФГУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора России — ФГУН ЦНИИЭ). Анализ количественной нагрузки, физического статуса ДНК ВПЧ 16 и экспрессии вирусного онкогена Е7 проводили методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени на «iCycler iQ» («BioRad», Германия) и «Rotor Gene» («Corbett Research», Австралия). В одной пробирке амплифицировали участки генов Е2 и Е7 вируса и гена р-глобина. Степень интеграции оценивали по соотношению количества Е7/Е2 (Е7 интегрируется, Е2 не интегрируется в геном) с помощью разработанного нами алгоритма с учетом стандартного отклонения и коэффициента вариации. Вирусную нагрузку определяли по количеству копий Е7 гена на 105 клеток. Уровень экспрессии вирусного онкогена Е7 оценивали по количеству мРНК транскриптов после обработки образцов ДНК-азой, с учетом остаточной ДНК, не подвергшейся деградации. В качестве контроля сохранности РНК одновременно проводили амплификацию участков мРНК гена домашнего хозяйства GapdH. Полученные значения РНК ВПЧ 16 нормализовали на 105 клеток.
Статистический анализ результатов проводили в соответствии с критериями Фишера и Спирмана.
Результаты и обсуждение
Из 64 больных интегрированная форма ДНК ВПЧ 16 обнаружена у 21 пациентки (31,8%), из них в 10 случаях обнаружена 100% интеграция и в 11 — частичная. У 45 пациенток (68,2%) ДНК ВПЧ 16 выявлена в эписомальной форме. Эта группа объединяет больных как с чисто эпи-сомальной ДНК вируса, так и с очень низкой степенью ее интеграции, которая находится за пределами чувствительности метода оценки физического статуса ВПЧ. По клинико-морфологическим характеристикам опухоли с интегрированной и эписомальной ДНК ВПЧ распределяются примерно в одинаковых пропорциях (таблица 1).
Таблица 1
Клинико-морфологические характеристики опухолей
Характеристики опухолей и стадия Физический статус ДНК ВПЧ 16
заболевания Интегрированная форма Эписомальная форма
Морфология РШМ n = 21 n = 43
Ороговевающий + in situ 5 (23,8%) 8 (18,6%)
Неороговевающий 16 (76,2%) 33 (76,7%)
Аденокарцинома — 2 (4,7%)
Стадия заболевания
0 — 2 (4,7%)
I 5 (23,8%) 7 (16,2%)
II 7 (33,3%) 16 (37,2%)
III 7 (33,3%) 16 (37,2%)
IV 2 (9,5%) 2 (4,7%)
Исследуемые опухоли по критерию вирусной нагрузки распределились следующим образом: высокая (количество копий ДНК ВПЧ на 100 тыс. клеток равно или выше 5 1д) — 39 случаев, низкая — (1д копий ДНК ВПЧ/100 тыс. клеток & lt- 5) — 25 случаев. Информация о состоянии больных спустя 2 и 3 года после курса терапии получена в 61 и 50% случаев соответственно. Анализ отдаленных результатов показал выраженную тенденцию более высокой частоты рецидивов заболевания и смертности в группе с условно низким содержанием вируса (таблица 2). Когда аналогичный анализ провели раздельно по группам с интегрированной ДНК вируса (степень интеграции от 25 до 100%) и эписомальной, оказалось, что в 1-ой группе частота безрецидив-ной выживаемости больных обратно коррелирует с вирусной нагрузкой (р=0,03 и р=0,05 спустя 2 и 3 года после лечения) и со степенью интеграции вируса в клетку (р=0,09 и р=0,02 соответственно). Кроме того, в этой группе выявлена четкая обратная корреляция вирусной нагрузки со степенью интеграции ДНК вируса (Я=-0,73- р=0,001- п=16), прямая корреляция степени интеграции ДНК с экспрессией вирусного гена Е7 (Я=0,7- р=0,02- п=9) и тенденция обратной корреляции вирусной нагрузки с экспрессией гена Е7 (Я=-0,6- р=0,07- п=10). Т. е., чем выше степень интеграции вируса, тем ниже его количественная нагрузка и тем выше экспрессия вирусного онкогена Е7 и хуже прогноз РШМ. Важно отметить, что выявленные корреляции не зависят от морфологических характеристик и стадий опухолей. В группе с эписомальной ДНК ВПЧ 16 не наблюдалось ни прямой, ни обратной корреляции вирусной нагрузки ни с экспрессией Е7 (Я=-0,36, р=0,34, п=9), ни с выживаемостью больных.
Таблица 2
Сравнение отдаленных результатов лечения больных РШМ с ВПЧ 16 в зависимости от количественной нагрузки и физического статуса вируса
Физический статус и 1д копий Е7 ВПЧ 16 на 105 клеток 2 года после лечения 3 го да после лечения
ремиссия прогрессирование + умерли Р ремиссия прогрессирование + умерли Р
Интегрированная + эписомальная формы & gt-5 & lt-5 19 (82,6%) 4 (17,4%) 0,07 9 (56,3%) 7 (43,7%) 13 (76,5%) 7 (50,0%) 4 (23,5%) 0,12 7 (50,0%)
Интеграция (25−100%) & gt-5 & lt-5 5 (100%) 0 (00,0%) 0,03 3 (33,3%) 6 (66,7%) 4 (100%) 0 (00,0%) 0,05 3 (33,3%) 6 (66,7%)
Интеграция 25−80% 80−100% 6 (100%) 0 (0,0%) 0,009 2 (25,0%) 6 (75,0%) 5 (100%) 0 (0,0%) 0,02 2 (25,0%) 6 (75,0%)
Эписомальная форма & gt-5 & lt-5 14 (77,8%) 4 (21,2%) 0,56 6 (85,7%) 4 (14,3%) 4 ю 0,)) %% 00 о & lt-5 & lt-5 (3 (2 41)) %% о (6 (8 94
Таким образом, в соответствии с полученными результатами можно полагать, что ответ РШМ на противоопухолевую терапию, по-видимому, непосредственно не связан с количественной нагрузкой ВПЧ 16, на исход заболевания, скорее всего, влияет физический статус вируса.
Известно, что высокая степень интеграции обусловливает повышенную стабильность вирусных транскриптов [6], усиливает экспрессию вирусных онкогенов Е6/Е7 [13] и может служить фактором плохого прогноза эффективности лечения РШМ [7, 10−12, 15]. Причиной выявленной статистически значимой обратной корреляции выживаемости больных с вирусной нагрузкой в группе с интегрированной ДНК ВПЧ, возможно, является утрата вирусом способности к репродукции в процессе интеграции его в клетку [1]. Тем не менее, выявленные корреляции позволяют считать, что вирусная нагрузка в опухолях с интегрированной ДНК ВПЧ 16 может косвенным образом отражать тяжесть прогноза заболевания.
Обнаруженные в литературе противоречивые сведения относительно роли количественной нагрузки ВПЧ ВКР в прогнозе эффективности противоопухолевой терапии и исхода заболевания РШМ, возможно, связаны с тем, что, как правило, анализ проводился в группах, объединяющих опухоли, ассоциированные

Статистика по статье
  • 826
    читатели
  • 47
    скачивания
  • 0
    в избранном
  • 0
    соц. сети

Ключевые слова
  • рак шейки матки,
  • вирус папилломы человека,
  • количественная нагрузка,
  • ИНТЕГРАЦИЯ,
  • экспрессия,
  • прогноз,
  • Cervical cancer,
  • Human papilloma virus,
  • quantitative load,
  • Integration,
  • expression,
  • Prognosis

Аннотация
научной статьи
по медицине и здравоохранению, автор научной работы & mdash- Киселева В. И., Крикунова Л. И., Любина Л. В., Мкртчян Л. С., Безяева Г. П., Панарина Л. В., Скугарев С. А., Куевда Д. А., Трофимова О. В., Саенко А. С.

В соскобах из цервикального канала и биоптатах опухоли 64 больных раком шейки матки (с гистологически верифицированным первичным вирусом папилломы человека 16 типа) до начала лечения методом ПЦР в режиме реального времени исследованы: количественная нагрузка, физический статус вируса и экспрессия вирусного онкогена Е7. В группе пациентов с интегрированной ДНК ВПЧ показано, что чем выше степень интеграции вируса, тем ниже его количественная нагрузка, выше экспрессия вирусного онкогена Е7 и ниже частота безрецидивной выживаемости больных. В группе с эписомальной ДНК ВПЧ не наблюдалось корреляции вирусной нагрузки ни с экспрессией Е7 (R=-0,36, p=0,34, n=9), ни с выживаемостью больных. Предполагается, что вирусная нагрузка в опухолях с интегрированной ДНК ВПЧ 16 может косвенным образом отражать тяжесть прогноза заболевания раком шейки матки.

ПоказатьСвернуть
Заполнить форму текущей работой