Распределение тромбогенных аллельных полиморфизмов у детей с острым гломерулонефритом

Тип работы:
Реферат
Предмет:
Медицина


Узнать стоимость

Детальная информация о работе

Выдержка из работы

УДК 616. 611−002−053. 2:616. 94−002. 7:615. 273. 53−08(043. 3)
РАСПРЕДЕЛЕНИЕ ТРОМБОГЕННЫХ АЛЛЕЛЬНЫХ ПОЛИМОРФИЗМОВ У ДЕТЕЙ С ОСТРЫМ ГЛОМЕРУЛОНЕФРИТОМ
Махова Е. Г., Выходцева Г. И.
ГБОУ ВПО «Алтайский государственный медицинский университет» Минздрава России (656 038, г. Барнаул,
пр. Ленина 40), е-mail: mahovaeg@mail. ru_
Проведен анализ распространённости генетических полиморфизмов тромбофилии у детей с острыми гломерулонефритами с нефритическим синдромом и нефротическим синдромом. Показана значимость присутствия отдельных полиморфизмов в популяции для развития острого гломерулонефрита. Исследование установило, что при остром гломерулонефрите с нефротическим синдромом гетерозиготный полиморфный вариант 677 СТ гена MTHFR выявлялся чаще, чем в группе контроля. Гетерозиготный полиморфизм 66 АG гена MTRR чаще встречается у пациентов с нефротическим и нефритическим синдромом чем в контрольной группе. Проведенное исследование установило, что у детей с острым гломерулонефритом частота минорного варианта Т 677 гена MTHFR встречается чаще, чем у здоровых детей. Определена высокая частота носительства гетерозиготных генотипов 677 СТ гена MTHFR и 66 AG гена MTRR в группе детей с гломерулонефритом, и наличие данных вариантов генов является предиктором неблагоприятного исхода заболевания. Ключевые слова: педиатрия, гломерулонефрит, тромбогенные полиморфизмы
OCCURRENCE OF TROMBOGENNY ALLELIC POLYMORPHISMS AT CHILDREN WITH SHARP GLOMERULONEFRIT
Makhova E.G., Vykhodtseva G.I.
GBOU VPO & quot-Altai State Medical University& quot- of the Russian Ministry of Health (656 038, Barnaul, Lenin Ave. 40) email: mahovaeg@mail. ru_
The analysis of prevalence of polymorphisms of hereditary thrombophilia at children with an acute glomerulonephritis with a nephritic syndrome and a nephrotic syndrome is carried out. The importance of presence of separate polymorphisms at population for development of an acute glomerulonephritis is shown. Research established that, at an acute glomerulonephritis with a nephrotic syndrome the heterozygotic polymorphic option of 677 ST of a gene of MTHFR was taped more often than in group of control. A heterozygotic polymorphism 66 AG genes of MTRR meets at patients with a nephrotic and nephritic syndrome than in control group more often. The conducted research established that at children the frequency of minor option T 677 of a gene of MTHFR meets an acute glomerulonephritis more often than at healthy children. High frequency of a carriage of heterozygotic genotypes of 677 ST of a gene of MTHFR and 66 AG genes of MTRR in group of children with a glomerulonephritis is determined, and existence of these options of genes is a disease
failure predictor. _
Keywords: the pediatrics, glomerulonefrit, trombogenny polymorphisms
В последние годы неуклонно возрастает интерес к изучению различных форм сосудистой патологии почек. По современным представлениям, нарушения в системе гемостаза по значимости мало уступают иммунному патологическому процессу в развитии нефритов. От характера и выраженности локальной и системной внутрисосудистой гиперкоагуляции, во многом зависят активность нефрита и скорость прогрессирования нефросклероза [1,2,4,5,6]. Тромбоз у детей с генетически обусловленными тромбофилиями в большинстве случаев возникает при воздействии дополнительных факторов риска. Но и пациенты с гетерозиготными формами мутации нуждаются в профилактической анитромботической терапии. К настоящему времени сложилось представление о тромбозе у
детей как о мультифакторной патологии, что определяет его значение в качестве мультидисциплинарной проблемы, привлекающей внимание специалистов различного профиля [3,7]. Наиболее значимым среди наследственных механизмов, повышающих риск тромбозов, является наличие тромбогенных полиморфизмов [9]. Среди последних выделяют мутации G1691A в гене V фактора свертывания (Лейденская мутация), мутация G20210A в гене протромбина, мутацию С677Т в гене метилентетрагидрофолатредуктазы (MTHFR). К настоящему времени выявлено более ста мутаций. Как правило, для возникновения тромбоза необходима не только генетическая предрасположенность — носительство тромбогенных аллельных полиморфизмов, но и наличие пусковых факторов, к которым относят катетеризацию сосудов, генерализованные инфекции и многое другое, в том числе воспалительный процесс при нефропатиях [8,10]. В настоящее время доказана связь тромбофилии и тромбоза вен, но имеются лишь единичные данные касающиеся связи наследственной тромбофилии и поражения почек [3,7,8,9].
Цель исследования: установить распределение тромбогенных аллельных полиморфизмов у детей с острым гломерулонефритом.
Материал и методы исследования
В качестве материала для проведения молекулярно-генетического исследования на носительство полиморфных вариантов генов системы гемостаза и генов фолатного цикла использованы образцы ДНК 31 пациента (22 мальчиков и 9 девочек) в возрасте 2−15 лет, находящихся на стационарном лечении в Алтайской краевой клинической детской больницы г. Барнаула с диагнозом острый гломерулонефрит с нефротическим и нефритическим синдромами.
Определение аллельных вариантов генов осуществлялось в лаборатории молекулярной генетики Алтайского краевого диагностического центра (г. Барнаул). В основе анализа лежал метод полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (Real-Time PCR) с использованием конкурирующих TagMan зондов. Проведено генетическое исследование шести протромботических полиморфных маркёров генов-кандидатов: фактора II протромбина (G20210A) — фактора F Лейден (Arg506Gln) — фактора VII свертывания крови (Arg353Gln) — фактора XIII свертывания крови (Val134Leu) — фибриногена G (-455)A- ингибитора активатора плазминогена PAI-1 4G (-675)5G и четырех полиморфных вариантов генов, ассоциированных с нарушениями фолатного цикла:
метилентетрагидрофолатредуктазы — (MTHFR Ala223Val, С677Т, rs1801133 и MTHFR Е429А, А1298С, rs1801131), В12-зависимой метионин-синтазы — (MTR Asp919Gly, A2756G, rs1805087) и метионин-синтазы редуктазы — (MTRR Ile22Met, A66G, rs1801394).
Для суждения о нормальном распределении в популяции генотипов генов системы гемостаза и генов фолатного цикла обследовано 115 здоровых детей (контрольная группа) со сходными демографическими характеристиками.
Статистическая обработка результатов исследования проводилась с помощью пакета программ & quot-STATIstica for Windows 5. 0"- (STATSoft). Для проверки гипотезы о нормальном распределении использовали критерий Шапиро-Уилка. Попарное сравнение частот аллелей и генотипических групп в разных популяциях проводили с помощью двустороннего точного критерия Фишера (ТКФ) и критерия Пирсона. Соответствие распределения генотипических частот равновесию Харди-Вайнберга проверяли посредством критерия х2, используя при этом онлайн калькулятор (http: //www. oege. org/software/hardy-weiberg. shtml). Различия сравниваемых величин считали статистически значимыми при p& lt-0,05.
Результаты исследования и их обсуждение
Гены-кандидаты предрасположенности к повышенному тромбообразованию в дебюте острого гломерулонефрита (ОГН) были исследованы у 22 (71,0%) мальчиков и 9 (29,0%) девочек, при этом отмечено достоверно значимое преобладание мальчиков (р=0,002) по отношению к девочкам при данной патологии.
В исследованной выборке детей с ОГН не было обнаружено гетерозиготных и гомозиготных (минорных аллелей) полиморфных вариантов гена FII G20210A и гена FV G1691A свертывающей системы крови, что не позволило включить данные генотипы в статистическую обработку и провести соответствующие расчеты.
В ходе исследования пациентов с острым гломерулонефритом были рассчитаны частоты аллелей изученных полиморфных вариантов генов системы гемостаза и фолатного цикла (табл. 1). При сравнении распределения частоты аллелей генов факторов свертывания крови у больных гломерулонефритом и контрольной группы, статистически значимых различий выявить не удалось (р& gt-0,05). Однако, результаты генотипирования генов фолатного цикла показали, что частота минорного аллеля Т 677 гена MTHFR у больных с острым гломерулонефритом статистически значимо больше, чем в группе контроля (р=0,026). По данным исследования M. Fodinger и соавт. [98], установлено, что носительство мутантного аллеля Т 677 гена MTHFR у больных с гломерулонефритом сопряжено с высоким темпом утраты функционирующих нефронов и повышением риска развития почечной недостаточности.
Таблица 1
Распределение частот аллелей генов системы гемостаза (тромбогенных полиморфизмов) и фолатного цикла у детей с острым гломерулонефритом
Локус Аллели Группа детей Группа контроля Р
с ОГН (%) (здоровые дети) (%)
FGB G 22 (78,6) 60 (78,9) 1,000
G (-455)A, А 6 (21,4) 16 (21,1) 1,000
FVII G 25 (89,3) 65 (90,3) 1,000
G10976A, А 3 (10,7) 7 (9,7) 1,000
FXIII G 20 (76,8) 79 (76,0) 1,000
G226A, А 8 (28,6) 25 (24,0) 0,764
РАМ 4G 5G 33 (53,2) 94 (40,9) 0,106
(-675^ 4G 29 (46,8) 136 (59,1) 0,379
МТШЯ С 39 (62,9) 171 (74,4) 0,344
С677Т Т 23 (37,1) 59 (25,6) 0,026
МТШЯ, А 18 (64,3) 73 (70,2) 0,780
А1298С С 10 (35,7) 31 (29,8) 0,541
МТЯ, А 22 (78,6) 73 (81,1) 1,000
A2756G G 6 (21,4) 17 (18,9) 0,762
МТЯЯ, А 16 (57,1) 44 (44,0) 1,000
A66G G 5 (42,9) 56 (56,0) & lt-0,001
Статистика: р — точный критерий Фишера (ТКФ) — в скобках — %.
Интересно, что частота минорного аллеля G 66 гена МТЯЯ определялась достоверно чаще в группе контроля (р& lt-0,001) по сравнению с больными ОГН. Выявленные изменения можно объяснить данными Л. А. Строзенко и соавт., что в популяции здоровых подростков г. Барнаула наблюдается высокий процент гомозиготного генотипа 66 GG (41,8%) и частоты аллеля G 66 гена МТЯЯ (56,9%), что дает основание предположить адаптивное преимущество полиморфизма А66G гена МТЯЯ в процессе эволюции или возможный «эффект основателя». По остальным частотам аллелей в исследованных полиморфных вариантах генов факторов свертывания крови и фолатного метаболизма статистически значимых различий не наблюдалось.
Распределение частот аллелей и генотипов в изученных генах факторов свертывания крови и генов фолатного метаболизма у детей проверено на соответствие равновесию Харди-Вайнберга (табл. 2).
Таблица 2
Распределение полиморфных вариантов генов факторов свертывания крови
и генов системы фолатного цикла у детей с ОГН
Локус Генотип N.0. % МБ. % Х2 Частота аллеля Но±8.Б. Не±Б.Б.
FGB G (-455)A (п=14) GG 64,3 61,7 0,321 р=0,571 G=0,79 А=0,21 Но=0,286± 0,121 Не=0,337±0,126
GA 28,6 33,7
АА 7,1 4,6
FVII G10976A (п=14) GG 78,6 79,7 0,202 р=0,653 G=0,89 А=0,11 Но=0,214±0,111 Не=0,191±0,105
GA 21,4 19,1
АА 0 1,2
FXIII GG 57,1 51,0 0,126 G=0,71 Но=0,286 ± 0,121
0226Л (п=14) 0Л 28,6 40,8 р=0,262 Л=0,29 Не=0,408 ± 0,131
ЛЛ 14,3 8,2
РЛ1−1 40 (-675)50 (п=31) 50/50 32,3 28,3 0,772 р-0,380 50=0,53 40=0,47 Но=0,419±0,089 Не=0,498±0,090
40/50 41,9 49,8
40/40 25,8 21,9
МТНЕЯ С677Т (п=31) СС 32,3 39,6 3,042 р=0,081 С=0,63 Т=0,37 Но=0,613±0,087 Не=0,467±0,090
СТ 61,3 46,7
ТТ 6,4 13,8
мтнт А1298С (п=14) АА 35,7 45,9 0,836 р=0,360 Л=0,64 С=0,36 Но=0,572±0,132 Не=0,495±0,134
АС 57,2 49,5
СС 7,1 12,8
МТЯ Л27 560 (п=14) ЛЛ 57,2 61,7 1,041 р=0,307 Л=0,79 0=0,21 Но=0,428±0,132 Не=0,337±0,126
Л0 42,8 33,7
00 0 4,6
МТЯЯ Л660 (п=14) ЛЛ 21,4 32,6 2,941 р=0,0864 Л=0,57 0=0,43 Но=0,715±0,121 Не=0,490±0,134
Л0 71,5 49,0
00 7,1 18,4
Примечание. N.0. — наблюдаемые частоты генотипов- Ы.Е. — ожидаемые частоты генотипов- критерий х2 оценка соответствия равновесию Харди-Вайнберга- число степеней свободы- Нв±Б.Е. и Не±Б.Е. -соответственно наблюдаемая и ожидаемая гетерозиготность с ошибкой.
Обнаружено, что распределение частот генотипов генов факторов свертывания крови и генов фолатного метаболизма соответствует равновесию Харди-Вайнберга.
Как видно из таблицы 2, наблюдаемое распределение генотипов протромботических генов согласуется с ожидаемыми частотами распределения. Высокий уровень ожидаемой гетерозиготности по полиморфным вариантам генов факторов свертывания крови был определен нами для трех генов: 0(-455)Л гена ?0 В (0,337) — 0226Л гена ЕХШ (0,408) — 40(-675)50 гена РЛ1−1 (0,498). В том числе, выявлен высокий уровень теоретической гетерозиготности по полиморфизмам генов фолатного метаболизма (от 0,467 до 0,490).
Анализ частоты встречаемости тромбогенных аллельных полиморфизмов у пациентов с ОГН показал (табл. 3) отсутствие достоверно значимых различий в распределении генов системы гемостаза у больных и детей контрольной группы (р& gt-0,05). Однако, в группе детей с ОГН гетерозиготный вариант 677 СТ гена МТН? Я и гетерозиготный вариант 66 Л0 гена МТЯЯ достигали уровня статистической значимости (р=0,007) по сравнению с контрольной группой. Вместе с тем, гомозиготный вариант (мажорный аллель) 677 СС гена МТН? Я и гомозиготный вариант (минорный аллель) 66 00 гена МТЯЯ значимо чаще определялись в группе здоровых детей (р=0,015).
Таблица 3
Распределение частот генотипов генов системы гемостаза и генов фолатного цикла
у детей с ОГН
Группа детей с ОГН Группа контроля
Ген Генотип (%) (здоровые дети) р
(%)
(-455) ОО 9 (64,3) 23 (60,5) 1,000
FGB (-455) ОA 4 (28,6) 14 (36,8) 0,746
(-455) АА 1 (7,1) 1 (2,6) 1,000
п=14 п=38
10 976 ОО 11 (78,6) 29 (80,6) 1,000
FVII 10 976 ОA 3 (21,4) 7 (19,4) 1,000
10 976 АА 0 0 —
п=14 п=36
226 ОО 8 (51,7) 30 (57,7) 1,000
FXIII 226 ОA 4 (28,6) 19 (36,5) 0,755
226 АА 2 (14,3) 3 (5,8) 0,576
п=14 п=52
(-675) 5О5О 10 (32,3) 20 (17,4) 0,082
РАМ (-675) 4О5О 13 (41,9) 54 (47,0) 0,687
(-675) 4О4О 8 (25,8) 41 (35,6) 0,393
п=31 п=115
677 СС 10 (32,3) 66 (57,4) 0,015
МТ№Я 677 СТ 19 (61,3) 39 (33,9) 0,007
677 ТТ 2 (6,4) 10 (8,7) 0,743
п=31 п=115
1298 АА 5 (35,7) 24 (46,1) 0,555
МТ№Я 1298 АС 8 (57,2) 25 (48,1) 0,764
1298 СС 1 (7,1) 3 (5,8) 1,000
п=14 п=52
2756 АА 8 (57,2) 30 (66,7) 0,538
МТЯ 2756 AО 6 (42,8) 13 (28,9) 0,514
2756 ОО 0 2 (4,4) 1,000
п=14 п=45
66 АА 3 (21,4) 15 (30,0) 0,739
МТЯЯ 66 AО 10 (71,5) 14 (28,0) 0,005
66 ОО 1 (7,1) 21 (42,0) 0,023
п=14 п=50
Статистика: р — точный критерий Фишера (ТКФ) — в скобках — %
Большой интерес представляло изучение распределения тромбогенных аллельных полиморфизмов у детей ОГН с нефритическим и нефротическим синдромами. Исследование позволило установить, что при ОГН с нефротическим синдромом гетерозиготный полиморфный вариант 677 СТ гена MTHFR выявлялся достоверно чаще, чем в группе контроля (60,0% против 33,9% контрольной группы, (р& lt-0,05)). Напротив, гомозиготный вариант (частый аллель) 677 СС гена MTHFR с большей частотой определялся в группе контроля (57,4% против 35,0% детей с ОГН нефротическим синдромом, (р& lt-0,05)). Следует отметить, что при ОГН с нефритическим синдромом и у детей контрольной группы статистически значимой разницы в распределении гетерозиготного полиморфизма 677 СТ гена МТ^Я не обнаружено. Интересно, что гетерозиготный полиморфизм 66 АG гена МТЯЯ с достоверной частотой зафиксирован у пациентов с нефротическим и нефритическим синдромом по сравнению с контрольной группой (р& lt-0,05)). В распределении полиморфных вариантов генов системы гемостаза при ОГН с нефротическим синдромом достоверных различий с группой здоровых детей не было выявлено. Вместе с тем, показано, что
гомозиготный вариант (частый аллель) (-675) 5G/5G гена PAI-1 значимо чаще выявлен в группе пациентов с ОГН нефротическим синдромом (р& lt-0,05) по сравнению с контролем (40,0% против 17,4% контрольной группы, (р& lt-0,05)).
Заключение. Таким образом, проведенное исследование позволяет сделать вывод о том, что у детей с ОГН частота минорного аллеля Т 677 гена MTHFR встречается с большей частотой, чем среди здоровых лиц. Установлена высокая частота носительства гетерозиготных генотипов 677 СТ гена MTHFR и 66 AG гена MTRR в группе больных детей, вероятно, наличие данных полиморфных вариантов генов можно рассматривать в качестве предикторов неблагоприятного исхода заболевания. При этом выявлен высокий уровень ожидаемой гетерозиготности по полиморфным вариантам генов фолатного цикла.
Список литературы
1. Баркаган З. С., Момот А. П. Диагностики и контролируемая терапия нарушений гемостаза. — М.: «Ньюдиамед АО», 2001 — 296 с.
2. Игнатова М. С., Коровина Н. А. Диагностика и лечение нефропатий у детей: Руководство для врачей. — М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. — С. 91−142.
3. Козловская Н. Л., Боброва Л. А. Генетическая тромбофилия и почки. // Клиническая нефрология. — 2009. — №.3. — С. 23−32.
4. Мовчан Е. А., Тов Н. Л., Лоскутова С. Н., Чупрова А. В. Роль системы гемостаза в прогрессировании острого гломерулонефрита. Тер. арх. 2001- 6: 41−43.
5. Момот А. П. Принципы и алгоритмы клинико-лабораторной диагностики нарушений гемостаза. — М., 2005 — 104 с.
6. Папаян А. В., Савенкова Н. Д. Клиническая нефрология детского возраста: Руководство для врачей. — СПб.: СОТИС, 1997. — 718 с.
7. Подчерняееа К. С., Меграбян М. Ф. et al. Принципы антитромботической терапии у детей. // Лечащий врач. — 2006. — №.7. — С. 52−56.
8. Строзенко Л. А. Распределение генов фолатного цикла в популяции подростков г. Барнаула Алтайского края /Л.А. Строзенко, В. В. Гордеев, Ю. Ф. Лобанов, А. П. Момот, Е. Н. Воронина // Мать и Дитя в Кузбассе. — 2015. — № 1 (60). — С. 29−34.
9. Чугунова О. Л., Козловкая Н. Л., Шумихина А И., Гуревич А И. Проблема наследсвенной тромбофилии в практике детского нефролога. // Педиатрия. — 2012. — Т. 91, №. 6. — С. 34−40.
10. Fodinger, M. Mutation (677 С to T) in the methyltetrahydrofolate reductase gene aggravates hyperhomocysteinemia in hemodialysis patients / M. Fodinger, C. Mannhalter, G. Wolfl et al. // Kidney International. — 1997. — Vol. 52. — P. 517−523.
Рецензенты:
Лобанов Ю. Ф., д.м.н., профессор, заведующий кафедрой педиатрии № 2 Алтайского государственного медицинского университета Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Барнаул-
Клименов Л. Н., д.м.н., профессор кафедры педиатрии № 2 Алтайского государственного медицинского университета Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Барнаул.

ПоказатьСвернуть
Заполнить форму текущей работой