Разработка и исследование гидрофильных гелей с фитиновой кислотой и ксимедоном для лечения ожоговых ран в эксперименте на крысах

Тип работы:
Реферат
Предмет:
Медицина


Узнать стоимость

Детальная информация о работе

Выдержка из работы

УДК 615. 017:616. 001. 57−001. 17
РАЗРАБОТКА И ИССЛЕДОВАНИЕ ГИДРОФИЛЬНЫХ ГЕЛЕЙ С ФИТИНОВОЙ КИСЛОТОЙ И КСИМЕДОНОМ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ОЖОГОВЫХ РАН В ЭКСПЕРИМЕНТЕ НА КРЫСАХ
Н.Б. Мельникова1, М.В. Сидорова1, Д.С. Малыгина1, А.К. Мартусевич2,
С.П. Перетягин2, Л.Н. Нистратова1, О.А. Медведева1, А.Е. Большакова1,
1ГБОУ ВПО «Нижегородская государственная медицинская академия»,
2ФГБУ «Нижегородский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии»
Мельникова Нина Борисовна — e-mail: chem-pharm@yandex. ru
Методами ИК- и |3С- ЯМР-спектроскопии и потенциометрического титрования изучено образование комплексов мио-инозитол гексакисфосфата (фитиновой кислоты) и 1-(р-оксиэтил)-4,6-диметил-1,2-дигидро-2-оксипиримидина (ксимедона) в водной среде.
Разработан состав гидрофильного геля, содержащего комплексы ксимедона фитатов, на основе натрия гиалуроната. Гель проявляет высокую осмотическую активность и может быть рекомендован для лечения ожогов.
Эффективность ранозаживляющего действия разработанных гелей доказана в эксперименте на
крысах при моделировании термического ожога и, вероятно, обусловлена высокими антиоксидантными свойствами фитиновой кислоты.
Ключевые слова: противоожоговые гели, фитиновая кислота, ксимедон, фитаты, антиоксидантная активность.
The formation of complexes of myo-inositol hexakisphosphate (phytic acid) with 1-(p-hydroxyethyl)-4,6-
dimethyl-1,2-dihydro-2-hydroxypyrimidine (xymedone) in aqueous medium has been studied by IR- and 13C-NMR spectroscopy and potentiometric titration.
Hydrophilic gel containing complexes of xymedone phytates and sodium hyaluronate as the base has been developed. The gel has high osmotic activity and may be recommended for burn treatment.
Wound healing activity of new gel has been proved in the experiments by rats in modeling thermal burn and it is probably due to the high antioxidant properties of phytic acid.
Key words: burn gels, phytic acid, xymedon, phytates, antioxidant activity.
Введение
Основными требованиями, предъявляемыми к лекарственным средствам при лечении гнойных и ожоговых ран мягких тканей, являются их высокая антиоксидантная, репарантная, противовоспалительная, антибактериальная активность при минимальной токсичности и гипоаллергенности.
Одной из перспективных отечественных фармацевтических субстанций, отвечающих этому комплексу требований, является ксимедон (1-(р-оксиэтил)-4,6-диметил-1,2-дигидро-2-оксипиримидин) [1−3].
Ранее в работе В. В. Бесчастного и др. была показана эффективность лечения гнойных ран ксимедоном в форме мазей, причем улучшение репарантных свойств препаратов объяснялось высокими антиоксидантными свойствами ксимедона по отношению к процессам перекисного окисления липидов (ПОЛ) [4]. Кроме того, ксимедон, являясь регулятором активного транспорта кальция в клетке, тканевого дыхания и накопления циклического аденозинмоно-фосфата, способствует усилению энергетических процессов. В гидрофильных гелях в присутствии янтарной кислоты, стимулирующей энергетический обмен и повышающей микроциркуляцию в органах и тканях, наблюдалось усиление противовоспалительных и репарантных свойств ксимедона при заживлении ожоговых ран [5].
Следовало ожидать более сильного влияния ксимедона на энергетический обмен в ранах под действием природно-
го антиоксиданта — фитиновой кислоты (мио-инозитол гексакисфосфата), имеющей шесть фосфатных групп.
Основным объяснением антиоксидантного действия фитиновой кислоты является способность ингибировать ксантиноксидазу — фермент, содержащий прочно связанное железо, не координированное с ядром гема [6, 7]. Авторами работы [6] на гомогенате кишечника крыс установлено, что образование мочевой кислоты из ксантина и генерация супероксида (О^-) существенно тормозятся под действием фитиновой кислоты. Кроме того, антиоксидант-ный эффект фитиновой кислоты усиливается за счёт активирования супероксиддисмутазы, способствующей переходу ксантиноксидазы в неинициирующую ПОЛ ксантин-дегидрогеназу.
Можно полагать, что гидрофильные гели ксимедона, содержащие дополнительно фитиновую кислоту, будут проявлять более высокие репарантные свойства за счет антиоксидантного действия фитиновой кислоты.
Целью работы является исследование и разработка нового состава гидрофильного геля, содержащего ксиме-дон и фитиновую кислоту, изучение его антиоксидантных свойств и репарантного действия в процессе заживления ран в эксперименте на крысах.
Проблемой приготовления гидрофильных гелей, содержащих фитиновую кислоту, является крайне низкое значение рН растворов (рН 1,9−2,3) в терапевтических концентрациях фитиновой кислоты, тогда как рекомендуемый рН
IVh
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
гелей должен быть близок к нейтральному. С другой стороны, нежелательно вводить фитиновую кислоту в виде ее
солей с металлами. В связи с вышеизложенным одной из задач работы явился выбор компонента, корректирующего рН геля и не ухудшающего антиоксидантных свойств.
В настоящей работе в качестве регулятора рН был выбран легко растворимый в воде трис-оксиметил-аминометан (трисамин), 3,66% водный раствор которого изоосмотичен плазме крови, обладает буферными свойствами, проникая через клеточные мембраны, и может устранять внутриклеточный ацидоз [8].
Материал и методы
Материалы и реактивы. Фитиновая кислота Inositol hexaphosphoric acid, 50% aqueous solution («ACROS ORGANICS», Бельгия) — ксимедон (НПП ФГУП «Кристалл», г. Дзержинск Нижегородской области) — трис-(оксиметил)-аминометан Tris (hydroxymethyl) аminomethane («Ч», ТУ 6−09−4292−76) — натрия гиалуронат (порошок из стекловидного тела быка, 99,8%, 1,63 MDa, CPN Spol.s.r. o, The Czech Republic- «Sigma») — метилпарабен (метил-4-гидроксибензоат, & gt-99,0% (GC), Ueno Fine Chemicals Industry, «Sigma-Aldrich», Индия) — спирт этиловый (медицинский, 95%, ООО «Гиппократ», г. Самара) — изопропанол (ХЧ ГОСТ 9805–84) — вода очищенная с удельным сопротивлением менее 0,2 |См (установка «Elix-З», Millipore, Франция).
Оборудование. УФ-спектрофотометр Specord S100 Bioline (Analytic Jena, Германия) — рН-метр «рН-150М» фирмы РУП (Гомельский завод измерительных приборов, Россия) — спектры ЯМР 13С регистрируют на ЯМР-спектрометре Agilent DD2 400 (Agilent Technologies, США) в D2O на рабочей частоте 101 МГц- ИК-спектрофотометр с преобразователем Фурье IRprestige-21 (Shimadzu, Япония).
Потенциометрическое титрование 0,076 М раствора фитиновой кислоты (20 мл, n=1,19 ммоль) проводили 0,830 М раствором трисамина. Титровали медленно при перемешивании магнитной мешалкой, останавливая процесс на 3 минуты после добавления каждой порции титран-та до установления равновесия.
Исследования антиоксидантных свойств фитиновой кислоты и ее смесей с трисамином и ксимедоном проводились на цельной крови, полученной путём декапитации головы крысы, в соответствии с нормативными документами [9, 10].
Уровень малонового диальдегида (МДА) в плазме крови определяли с помощью тест-набора (ЗАО «АГАТ»).
Хемилюминесцентный анализ проб, индуцированных по реакции Фентона, на общую антиоксидантную активность проводили на приборе БХЛ-06 (Россия). Фиксировали величины: Imax (mV), характеризующий максимальную вспышку хемилюминесценции- S (mV) — суммарная хеми-люминесценция за 30 с- tg2a, показывающий скорость нормализации процессов свободно-радикального окисления- Imax/S — фактор антиоксидантной активности.
Осмотическая активность была определена методом диализа [11] с использованием целлофановой мембраны.
Экспериментальные исследования на животных проводили в соответствии с нормативными документами [10, 12] на 10 самцах крыс линии «Вистар» массой (M±s) 200±2,6 г на моделях термической травмы кожи Шб степени (7% от общей поверхности тела). Моделирование ожога кожи Шб
степени осуществляли путем нанесения на депилирован-ную кожу поясничного отдела крыс дозированных ожогов площадью 235 мм² (3*78,5 мм2) с температурой ожоговой поверхности около 300 °C и с длительностью соприкосновения с кожей 1 сек. Перед проведением данной процедуры использовали нембуталовый наркоз в дозе 35−40 мг/кг. При моделировании ожоговой раны регистрировали общее состояние животных и скорость заживления раневой поверхности.
Исследовали эффективность действия гелей (доза 10 мг/ см2) на основе фитиновой кислоты при его наружном применении в течение 10 дней в сравнении с гелем ксимедона. В первой группе (нетравмированной интактной) гель не наносился, во второй группе осуществляли термический ожог без лечения (контроль), в третьей группе лечение проводили гелем ксимедона, в четвертой группе — гелем фитиновой кислоты, в пятой группе — комбинированным гелем ксимедона и фитиновой кислоты.
Статистическая обработка результатов была выполнена с помощью программы Statistica 7.0 (р& lt-0,05).
Результаты и их обсуждение
Влияние фитиновой кислоты на эффективность действия гидрофильных гелей было изучено на примере ранее изученных составов мягких лекарственных форм ксимедона в виде гелей и мазей [4, 5]. В качестве гелеобразователя был предложен натрия гиалуронат (Мг=1,63 MDa), роль стабилизаторов и консервантов выполняли метилпарабен и 95% этанол.
Концентрацию фитиновой кислоты варьировали от 2,5 до 6% при постоянной концентрации ксимедона (таблица 1). Эксперименты на животных проводили с комбинированным гелем ксимедона и фитиновой кислоты (состав 3), обеспечивающим максимальную осмотическую активность. Для изучения влияния фитиновой кислоты использовали гели состава 4, а в качестве эталона сравнения использовали гель ксимедона состава 5.
ТАБЛИЦА 1.
Составы и свойства исследуемых гелей
Фитиновая кислота, масс. % Ксимедон, масс. % Трисамин, масс. % Основа Сравнительная осмотическая активность, % (% поглощения воды за 45 часов)
2,5 10 5 натрия гиалуронат- этанол 95%- метилпарабен- вода очищенная до 100,0% 150
5 10 2 200
6 10 1 250
6 — 12 250
— 10 — 130
Концентрация трисамина в составах соответствовала величине, при которой значения рН были близки к физиологическим (рН 6,5). Нормализация рН среды, вероятно, происходит за счёт связывания подвижных протонов фитиновой кислоты основанием — трисамином. Потенциометрическое титрование 0,076 М раствора фитиновой кислоты 0,830 М раствором трисамина показало, что кривая титрования соответствует титрованию кислоты средней силы, такой как фосфорная, основанием средней силы (рис. 1, кривая 1), при этом наиболее вероятно
образование солевых комплексов по реакции с переносом
Аналогичный вид имеет кривая титрования фитиновой кислоты ксимедоном (рис. 1, кривая 2), а взаимодействие кислоты с основанием приводит к образованию протони-рованной формы ксимедона, так же, как и в случае с триса-мином.
Существование протонированных форм аминов было доказано с помощью 13С-ЯМР спектров катионоидной части комплексов фитатов трисамина и ксимедона после их осаждения из концентрированных растворов изопропанолом при низких температурах от -10°С до 0 °C (рис. 2, таблица 2).
РИС. 2.
13С-ЯМР спектры трисамина и трисамина фитата (D2O).
На 13С-ЯМР спектрах трисамина фитата наблюдалось смещение полосы С^Н2 трисамина с 63 м.д. в сторону более протонированной формы 64 м.д. (рис. 2). Сопоставление 13С-ЯМР спектров фитатов и исходных аминов показало, что наиболее существенные изменения наблюдаются у атомов углерода карбонильной группы: разница в химических сдвигах для трисамина фитата составила почти 5 м.д., а для ксимедона фитата 25 м.д. Наличие подобных изменений в спектрах фитатов свидетельствует о том, что в образующихся соединениях в роли катиона выступают протонированные формы аминов.
ТАБЛИЦА 2.
Данные 13С-ЯМР спектров ксимедона и ксимедона фитата (D2O)
н, с
^СН2СН2ОН
Группа -СН3 (6) -СН3 (5) N-042 (1) -СН2-ОН СН С=С (4) С=С (6) С=0 (2)
Кси 20,1 23,1 47,9 58,4 108,3 160,6 157,9 175,5
К^+ фитат 19,5 23,6 49,4 57,8 108,2 171,9 168,4 148,9
Образование протонированных форм как трисамина, так и ксимедона при взаимодействии с фитиновой кислотой было также доказано ИК-спектральными исследованиями твёрдых осадков исходных фитатов аминов. В ИК-спектрах фитатов аминов выявлены полосы валентных колебаний С-ОН спиртовой связи 1066 см-1 и С-О (эфирной) связи -1130−1030 см-1- появляются полосы, характерные для аниона фитиновой кислоты, отражающие колебания Р-О связи 889 см-1 со сдвигом Ду в продукте относительно исходной фитиновой кислоты [13], равным 2 см-1 и 9 см-1 для ксимедона и трисамина фитата соответственно. Колебания фос-форильной группы проявляются в виде полосы 1130 см-1, а также в области 1616 см-1, в отличие от валентных колебаний фитиновой кислоты 1643 см-1 (Ду = 27 см-1).
ТАБЛИЦА 3.
Степень выраженности показателей заживления ожоговой раны в ходе лечения гидрофильными гелями на основе фитиновой кислоты
Время лечения 3-и сутки 5-е сутки 6-е сутки 7-е сутки 10-е сутки
Группы струп эпит струп эпит струп эпит струп эпит струп эпит
Ксимедон (состав 5) ++++ + ++++ + +++ ++ +++ ++ + ++
Фитиновая кислота (состав 4) ++ + + + + - ++ ++
Комплекс фитиновой кислоты с ксимедоном (состав 3) +++ + ++ ++ ++ ++ ++ +++ +++
Примечание: струп — характеристики отторжения струпа, эпит -степень эпителизации в баллах.
На основании вышеизложенных данных можно предположить, что в водных растворах образуются ионные и Н-ассоциированные агрегаты, в которых катионоидная часть представлена протонированной формой. Подобные комплексы описаны для ксимедона и каликс[4]резорцина-ренов, которые способны образовывать ассоциаты типа «гость-хозяин» [14]. Наиболее вероятно, что в подобных
М
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
комплексах фитатов ксимедона и трисамина роль «хозяина» выполняет фитиновая кислота (рис. 3).
Исследование эффективности действия гидрофильных гелей с фитиновой кислотой в эксперименте на крысах показало, что наружное применение гелей на основе фитиновой кислоты при лечении ожоговой раны способствует быстрой эпителизации. В целом во всех группах животных на 10-й день лечения почти или полностью исчезли струпы, а раны эпителизовались (таблица 3).
Лечение гелем только с фитиновой кислотой (состав 4) хотя и вызывало отторжение струпных корок уже на третьи сутки, но регенерация тканей в ране не происходила. Использование гидрофильных гелей комплекса фитиновой кислоты с ксимедоном (состав 3) показывало наилучшее заживление раны, как по скорости отторжения струпа, так и по степени эпителизации.
Стимуляция репарантных процессов под действием предложенного нами состава гидрофильного геля, вероятно, обусловлена антиоксидантными свойствами образующегося комплекса, что подтверждается проведенными исследованиями процессов липопероксидации в этом же самом эксперименте. Установлено, что под действием геля с фитиновой кислотой (составы 4 и 5, группы 4 и 5), уро-
вень липопероксидации не превышает значения контроля, а общая антиоксидантная активность (АОА) возрастает (рис. 4).
Уровень малонового диальдегида в плазме крови (МДАпл) при воздействии гелей с фитиновой кислотой снижается. Наилучший результат получен при использовании комбинированных гелей, содержащих ксимедон и фитиновую кислоту, что отражает специфическое влияние комплекса — ксимедона фитата.
Заключение
Взаимодействие фосфорилированного мио-инозитола (фитиновой кислоты) и аминов — трисамина и ксимедона в водных растворах приводит к образованию ассоциатов -фитатов, в которых катионоидная часть представлена про-тонированной формой аминов, что подтверждено данными 13С-ЯМР и ИК-спектроскопии.
Нами разработан состав гидрофильного геля ксимедона и фитиновой кислоты, в котором структурообразователь -натрия гиалуронат, способен стабилизировать комплексные ассоциаты фитатов ксимедона и фитатов трисамина в водной среде. Предложенный состав показывает высокую осмотическую активность, что позволяет использовать этот гель на первой стадии раневого процесса.
н, с
+9
сн2
, сн.
9нз н2н2н
\. К'-СН,
К-С -с -о
тт
нзс N О.
СИ,
2 Нт
С'-С-п.
н-
н
/
н3с-
, сн3
Н,
о.
/'-г
V0
от к,
Н-0, онно
уь V
т /Ч
н
Н'-О.
-N ІЇ
Н3С
сн,
Ч о-н^
нх& gt-
н, с
+
Ксимедона
фитат
Н3С
N^.0 -Н
°н ,
0.4 «& lt-Г
°Рчо-н-
сн3
'-'-Р^ун
, сн2
Н2С
о
Н2 +о
-п-'-С Ї н2с. к^м
Н3С
сн,
НОН2С

нон2с-с-ын3
НОН2С
НОН2С _о_р_о, нон2с-с-ж, он НОН2С
сн, он Н3К-С^СН2ОН
СНоОН
+ сн2он
HзN-С-СН2ОН СН2ОН
НОН2С
сн, он
НОН2С
Трисамина
фитат
РИС. 3.
Схема предположительных структур фитатов аминов в водном растворе.
А Б В
РИС. 4.
Интенсивность перекисного окисления липидов (а), общая антиоксидантная активность (б), уровень малонового диальдегида (в) в плазме крови крыс под действием гелей ксимедона (Кси), фитиновой кислоты (ФК) и ксимедона фитата (ФК + Кси) в процентах относительно контроля.
В эксперименте на крысах доказаны высокие репарант-ные свойства разработанных гелей при лечении ожоговых ран.
Исследованиями на плазме крови крыс доказано, что эффективность действия новых фармацевтических композиций обусловлена высоким значением общей антиокси-дантной активности фитиновой кислоты.
ЛИТЕРАТУРА
1. Измайлов С. Г., Измайлов Г. А., Аверьянов М. Ю., Резник В. С. Ксимедон в клинической практике. Н. Новгород: НГМА, 2001. 230 с.
Izmajlov S.G., Izmajlov G.A., Averjanov M. Ju., Reznik V.S. Ksimedon v klinicheskoj praktike. N. Novgorod: NGMA, 2001. 230 s.
2. Вихреев В. С., Матвиенко А. В. Клиническое применение препарата ксимедон в лечении ожоговой болезни / В. С. Вихреев, А. В. Матвиенко // Ксимедон / В. С. Вихреев, А. В. Матвиенко. Казань: изд-во ИОФХ им. А. Е. Арбузова КФАН СССР, 1986. С. 41−46.
Vihreev V.S., Matvienko A.V. Klinicheskoeprimeneniepreparata ksimedon v lechenii ozhogovoj bolezni /V.S. Vihreev, A.V. Matvienko // Ksimedon / V.S. Vihreev, A.V. Matvienko. Kazan'-: izd-vo IOFH im. A.E. Arbuzova KFAN SSSR, 1986. S. 41−46.
3. Погорельцев В. И., Терещенко В. Ю., Чиркин А. А. с соавт. Антиоксидантная активность ксимедона в комплексном лечении хирургических инфекций. Казанский медицинский журнал. 2005. Т. 86. № 4. С. 346−348.
Pogorel'-cev V.I., Tereshhenko V. Ju., Chirkin A.A. s soavt. Antioksidantnaja aktivnost'- ksimedona vkompleksnom lechenii hirurgicheskih infekcij. Kazanskij medicinskij zhurnal. 2005. T. 86. № 4. S. 346−348.
4. Бесчастнов В. В., Измайлов С. Г., Ботяков А. А., Жаринов А. Ю., Пантелеев Д. А., Мельникова Н. Б. Антиоксидантная активность пиримидиновых производных при местном лечении гнойных ран мягких тканей (в эксперименте). Современные технологии в медицине. 2011. № 3, С. 21−26.
Beschastnov V.V., Izmajlov S.G., Botjakov A.A., Zharinov A. Ju., Panteleev
D.A., Mel'-nikova N.B. Antioksidantnaja aktivnost'- pirimidinovyh proizvodnyh pri mestnom lechenii gnojnyh ran mjagkih tkanej (v jeksperimente). Sovremennye tehnologii v medicine. 2011. № 3, S. 21−26.
5. Соколов Р. А., Мельникова Н. Б., Яшнова О. К., Стручков А. А., Погодин И. Е. Возможности ИК-спектроскопии для контроля фармакокинетики ингредиентов гелевой композиции «Левоксим», содержащей ксимедон, при лечении ожоговых ран. // OZON O3 TERAPIA (Озон, активные формы кислорода и методы интенсивной терапии в медицине). 2009. № 3 (8). С. 168−171.
Sokolov R.A., Mel'-nikova N.B., Jashnova O.K., Struchkov A.A., Pogodin I.E. Vozmozhnosti IK-spektroskopii dlja kontrolja farmakokinetiki ingredientov gelevoj kompozicii «Levoksim», soderzhashhej ksimedon, pri lechenii ozhogovyh ran. //OZON O3 TERAPIA (Ozon, aktivnye formy kisloroda imetody intensivnoj terapii v medicine). 2009. № 3 (8). S. 168−171.
6. Muraoka S., Miura T. Inhibition of xanthine oxidase by phytic acid and its antioxidative action. Life Sciences. 2004. № 74. P. 1691−1700.
7. Мецлер Д. Е. Биохимия. Химические реакции в живой клетке. В 3-х т. Т. 2 / Д. Мецлер- пер. с англ. под ред. А. Е. Браунштейна, Л. М. Гинодмана,
Е. С. Северина. М.: Мир, 1980. 609 с.
Mecler D.E. Biohimija. Himicheskie reakcii v zhivoj kletke. V 3-h t. T 2 / D. Mecler- per. s angl. pod red. A.E. Braunshtejna, L.M. Ginodmana, E.S. Severina. M.: Mir, 1980. 609 s.
8. Машковский М. Д. Лекарственные средства 16-е изд., перераб., испр. и доп. М.: Новая волна, 2012. 1216 с.
Mashkovskij M.D. Lekarstvennye sredstva 16-e izd., pererab., ispr. i dop. M.: Novaja volna, 2012. — 1216 s.
9. ГОСТ Р ИСО 10 993−2-2009. Изделия медицинские. Оценка биологического действия медицинских изделий. Часть 2. Требования к обращению с животными. Введ. 2010−07−01. М.: Стандартинформ, 2009. 16 с.
GOST R ISO 10 993−2-2009. Izdelija medicinskie. Ocenka biologicheskogo dejstvija medicinskih izdelij. Chast'- 2. Trebovanija k obrashheniju s zhivotnymi. Vved. 2010−07−01. M.: Standartinform, 2009. 16 s.
10. Хабриев Р. У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М.: Медицина, 2005. 832 с.
Habriev R.U. Rukovodstvo po jeksperimental'-nomu (doklinicheskomu) izucheniju novyh farmakologicheskih veshhestv. M.: Medicina, 2005. 832 s.
11. Государственная Фармакопея Российской Федерации XII. М.: Издательство «Научный центр экспертизы средств медицинского применения». 2008. Ч. 1. 704 с.
Gosudarstvennaja Farmakopeja Rossijskoj Federacii XII. M.: Izdatel'-stvo «Nauchnyj centr jekspertizy sredstv medicinskogo primenenija». 2008. Ch. 1. 704 s.
12. Об утверждении правил лабораторной практики: приказ
Минздравсоцразвития Р Ф от 23. 08. 2010 № 708н // РГ — Федеральный выпуск. 2010. № 5319. С. 44−47.
Ob utverzhdenii pravil laboratornoj praktiki: prikaz Minzdravsocrazvitija RF ot 23. 08. 2010 № 708n//RG- Federal'-nyj vypusk. 2010. № 5319. S. 44−47.
13. Carli L.D., Schnitzler E., lonashiro M., Szpoganiczc B., Rosso N.D. Equilibrium, thermoanalytical and spectroscopic studies to characterize phytic acid complexes with Mn (ll) and Co (ll). J. Braz. Chem. Soc. 2009. Vol. 20. № 8. P. 1515−1522.
14. Морозова Ю. Э. Формирование ионных ассоциатов из разнозаряженных каликс[4]резорцинареновых молекул хозяев в присутствии молекул гостей / Ю. Э. Морозова, Я. В. Шалаева, Н. А. Макарова, В. В. Сякаев, Э. Х. Казакова, А. И. Коновалов // Известия Академии наук. Серия химическая. 2009. № 1. С. 1−6.
Morozova Ju. Je. Formirovanie ionnyh associatov iz raznozarjazhennyh kaliks[4]rezorcinarenovyh molekul hozjaev v prisutstvii molekul gostej / Ju. Je. Morozova, Ja.V. Shalaeva, N.A. Makarova, V.V. Sjakaev, Je.H. Kazakova, A.I. Konovalov// Izvestija Aka-demii nauk. Serija himicheskaja. 2009. № 1. S. 1−6.

ПоказатьСвернуть
Заполнить форму текущей работой