Разработка методики стандартизации травы репешка обыкновенного Agrimonia eupatoria по флавоноидам

Тип работы:
Реферат
Предмет:
Биология


Узнать стоимость

Детальная информация о работе

Выдержка из работы

УДК 615. 074, 615. 072
РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ СТАНДАРТИЗАЦИИ ТРАВЫ РЕПЕШКА ОБЫКНОВЕННОГО дввмошд. шрдтовшпо флавоноидам
Надземная часть репешка обыкновенного используется в народной медицине при лечении многих заболеваний, в частности, заболеваний печени и желчного пузыря, что обусловлено наличием богатого комплекса биологически активных веществ, среди которых преобладают фенольные соединения, а именно флавоноиды. На основании этого в статье изложена методика оценки качества травы репешка обыкновенного Адгітопіа еираіотіа по флавоноидам.
Ключевые слова: трава репешка обыкновенного, флавоноиды, кверцетин, лютеолин-7-гликозид (цинарозид)
Трава репешка обыкновенного не является официнальным растительным сырьем, хотя широко применяется в нетрадиционной медицине [2]. Поэтому актуальным является изучение ее химического состава и разработка методик стандартизации данного вида сырья.
Оценку качества травы репешка обыкновенного предложено проводить по содержанию флавоноидов. Разработана методика количественного определения суммы флавоноидов методом УФ-спектрофотометрии в пересчете на кверцетин и лютеолин-7-гликозид (цинарозид).
Изучены условия извлечения флавоноидов из сырья этанолом 70% концентрации. Соотношение сырья и общего объема экстрагента 1: 100, время трехкратного извлечения на кипящей водяной бане 90 минут.
Для расчета суммы флавоноидов в пересчете на кверцетин оптическую плотность измеряли по собственному поглощению спиртового извлечения травы репешка обыкновенного после гидролиза при длине волны 370 нм. Расчет суммы флавоноидов проводили с использованием оптической плотности раствора стандартного образца кверцетина. Относительная ошибка предложенной методики 4,8%. Содержание флавоноидов в надземной части репешка обыкновенного составило 0,602%.
Для расчета суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид измеряли оптическую плотность окрашенного комплекса, образующегося при взаимодействии с 5% спиртовым раствором алюминия хлорида, при длине волны 400 нм. Расчет суммы флавоноидов проводили с использованием теоретического значения удельного показателя поглощения государственного стандартного образца лютеолина-7-гликозида (цинарозида). Относительная ошибка предложенной методики 2,6%. Содержание фла-воноидов в траве репешка обыкновенного составляет 2,84%.
Целью настоящего исследования является разработка методики количественного определения суммы флавоноидов в траве репешка обыкновенного с использованием УФ-спектрофотометрии.
Экспериментальная часть. В результате проведенных исследований нами было установлено, что максимум оптической плотности УФ-спектра собственного поглощения спиртового извлечения из травы репешка после гидролиза совпадает с максимумом оптической плотности УФ-спектра раствора государственного стандартного образца (ГСО) кверцетина при длине волны 370 нм (рис. 1).
В ходе эксперимента было установлено, что наиболее оптимальным экстрагентом, извлекающим наибольшее количество флавоноидов из травы репешка обыкновенного, является 70% этанол.
Ж. С. Лесовая Д.И. Писарев О. О. Новиков
Белгородский
государственный
университет
e-mail:
zhannalesovaya@yandex. ru
300 350 400 450
Рис. 1. УФ-спектры раствора ГСО кверцетина (1) и спиртового извлечения травы репешка обыкновенного после гидролиза (2)
Методика получения спиртового извлечения из травы репешка обыкновенного (метод экстракции с использованием этанола 70% концентрации). Точную навеску травы репешка, измельченного до размера частиц 1−3 мм, около 1,0 г поместили в колбу со шлифом вместимостью 150 мл, прибавили 30 мл 70% этанола, колбу присоединили к обратному холодильнику и нагревали на водяной бане в течение 30 минут. Затем колбу охладили под струей воды до комнатной температуры и содержимое колбы профильтровали через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл. Экстракцию повторили еще дважды указанным выше способом. Извлечения профильтровали через тот же фильтр в ту же мерную колбу. Объем фильтрата довели до метки 96% спиртом. Полноту извлечения флавоноидов из сырья подтвердили отрицательной цианидиновой пробой.
Методика количественного определения суммы флавоноидов в траве репешка обыкновенного в пересчете на кверцитин. 10 мл полученного спиртового извлечения из сырья репешка обыкновенного упарили на водяной бане, остаток высушили в сушильном шкафу при 110 °C в течение 15 минут, затем растворили в 10 мл 10% серной кислоты. Гидролиз вели в колбе, подсоединенной к обратному холодильнику, при нагревании на кипящей водяной бане в течение 2 часов. В данных условиях происходит гидролиз только 3-О-гликозидов, 7-О-гликозиды, как более устойчивые, гидролизу подвергаются в более жестких условиях. Затем колбу охладили до комнатной температуры и содержимое ее профильтровали через бумажный фильтр. Осадок, оставшийся на фильтре, промыли водой очищенной и растворили в 100 мл горячего 96% этанола.
На спектрофотометре СФ56 измерили оптическую плотность полученного раствора в диапазоне длин волн 300−450 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на кверцетин вели по формуле 1:
Х=Ах х Сст х W х 100% / Аст х Сх х Уа, (1)
где Ах — оптическая плотность исследуемого раствора-
Сст — концентрация раствора стандартного образца кверцетина-
W — разведение, мл-
Аст — оптическая плотность раствора стандартного образца кверцетина-
Сх — концентрация исследуемого раствора-
Уа — объем аликвоты, мл.
Результаты статистической обработки данных параллельных измерений показали, что содержание флавоноидов в траве репешка обыкновенного в пересчете на
кверцитин составляет 0,602%, ошибка единичного определения при доверительной вероятности 98% составляет 4,8% (табл. 1).
Таблица 1
Результаты количественного определения суммы флавоноидов в траве репешка обыкновенного в пересчете на кверцетин
X (%) (X — X,)2 Метрологические характеристики
0,571 0,961 X = 0,602% ?(Х — X)2 = 0,2 571 " ??(Ж-X,)2 0,9 257 х п (п -1) ЛX = 8Х ¦ = 0,29 067 в = 4,8%
0,598 0,16
0,621 0,361
0,609 0,49
0,582 0,0004
0,630 0,784
Х=0,602 ?=0,2 571
Методика количественного определения суммы флавоноидов в траве репешка обыкновенного в пересчете на лютеолин-7-гликозид (цинарозид).
При взаимодействии спиртового извлечения из травы репешка обыкновенного со спиртовым раствором алюминия хлорида наблюдается образование окрашенного комплекса, который вызывает батохромный сдвиг длинноволновой полосы поглощения и при этом дает основной максимум поглощения при длине волны 400 нм (рис. 2).
— л 1.0 —
0.8 —
0.6 —
0.4 —
0.2 —
0.0 —
_ Длина волны, ни
---1---1--1--1---1−1---1---1--1--------------1−1-1−1-1-г
380 400 420 440
Рис. 2. УФ-спектр комплекса спиртового извлечения из травы репешка обыкновенного с 5% спиртовым раствором алюминия хлорида
Аналогичный максимум поглощения отмечен для комплекса ГСО лютеолин-7-гликозида (цинарозида).
Таким образом, для определения количества флавоноидов в пересчете на цинарозид 5 мл спиртового извлечения травы репешка поместили в колбу на 25 мл, прибавили 5 мл 5% спиртового раствора алюминия хлорида и 2−3 капли разведенной соляной кислоты. Объем смеси довели до метки 96% спиртом этиловым. Время прохождения комплексообразующей реакции в защищенном от света месте 45 минут.
Для приготовления раствора сравнения в колбу вместимостью 25 мл поместили 5 мл спиртового извлечения травы репешка, 2−3 капли разведенной соляной кислоты и довели объем до метки 96% этанолом.
С целью пересчета содержания суммы флавоноидов на цинарозид изучены комплексы раствора ГСО цинарозида с алюминия хлоридом, удельный показатель которых при аналитической длине волны (400 нм) составляет 145,0±2,3. На этом основании в формулу расчета включено теоретическое значение Е1%1см = 145 [1].
Расчет вели по формуле 2:
X=Ax x W x W2 / El%lсм x m x Va, (2)
где Ах — оптическая плотность исследуемого раствора-
W, W2 — разведения, мл-
Е1%1см — удельный показатель поглощения стандартного раствора цинарозида-
m — масса навески исследуемого сырья, г-
Va — объем аликвоты, мл.
Статистическая обработка данных параллельных измерений показала, что сумма флавоноидов в траве репешка обыкновенного в пересчете на лютеолин-7-гликозид составила в среднем 2,84%. Ошибка единичного измерения равна 2,6% (табл. 2).
Таблица 2
Результаты количественного определения суммы флавоноидов в траве репешка обыкновенного в пересчете на лютеолин-7-гликозид
Xi (%) (X-Xi)2 Метрологические характеристики
2,81 0,0009
2,79 0,0025 Х=2,84%
2,91 0,0049 ?=0,0166
2,89 0,0025 S= 0,23 523
2,77 0,0049 ДХ= 0,73 862
2,87 0,0009 е = 2,60%
Х=2,84 ?=0,0166
Выводы. 1. Проанализированы методы экстракции травы репешка обыкновенного. В качестве наиболее оптимального метода для данного вида сырья выбран метод экстракции с использованием этанола 70% концентрации.
2. Предложена методика дифференциального количественного определения 7-О-гликозидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид (относительная ошибка определения при доверительной вероятности 98% составляет 2,6%) и 3-О-гликозидов в пересчете на кверцетин (относительная ошибка определения при доверительной вероятности 98% составляет 4,8%) после кислотного гидролиза, что позволяет наиболее полно определить содержание флавоноидов в сырье. Общая сумма флавоноидов по результатам данной методики составила 3,442%±0,1%.
Работа выполнена в рамках реализации ФЦП «Научные и научнопедагогические кадры инновационной России» на 2009−2013 гг., государственный контракт №П425 от 12. 05. 2010 г.
Литература
1. Андреева, В. Ю. Разработка методики количественного определения флавоноидов в манжетке обыкновенной Alchemilla Vulgaris L.S.L. / В. Ю. Андреева, Г. И. Калинкина // Химия растительного сырья. — 2000. — № 1. — С. 85−88.
2. Дикорастущие полезные растения России / Отв. ред. А. Л. Буданцев, Е. Е. Лесиовская. -СПб.: Изд-во СПХФА, 2001. — 663 с.
DEVELOPMENT OF METHODS OF STANDARDIZATION OF HERB OF AGRIMONIA EUPATORIA BY FLAVONOIDS
Aboveground part Agrimonia eupatoria is commonly used in folk medicine for treating many diseases, particularly diseases of the liver and gallbladder, which is caused by a rich complex of biologically active substances, among which are dominated by phenolic compounds, namely flavonoids. On this basis, the article sets out the methodology quality assessment herbs Agrimonia eupatoria of flavonoids.
Key words: herb of Agrimonia eupatoria, flavonoids, quercetin, luteolin-7-glucoside (cinarosid)
Zh. S. Lesovaya D. I. Pisarev O. O. Novikov
Belgorod State University e-mail:
zhannalesovaya@yandex. ru

ПоказатьСвернуть
Заполнить форму текущей работой