Фенотип иммунокомпетентных клеток у онкологических больных при вакцинотерапии

Тип работы:
Диссертация
Предмет:
Медицинские науки


Узнать стоимость

Детальная информация о работе

Выдержка из работы

Актуальность темы.

П настоящее время, ведущая роль в килу кии и направленного противоопухолевого иммунного ответа отводится дендритным клеткам (Dendritic Cells). Эта популяция клеток является чрезвычайно интересной мишенью для терапевтических манипуляций иммунной системой, способной индуцировать специфический противоопухолевый иммунный ответ. Экспериментальные и клинические исследования вакцин на основе дендритных клеток активно проводятся во всех ведущих онкологических центрах мира.

В Г У Российский онкологический научный центр им. Н Н, Блохнна РАМН в рамках протокола первой фазы клинических исследований так же проводится изучение вакцины на основе дендритных клеток. Аутологкчнная вакцина представляет собой, зрелые DC с фенотипом CDS3'CD80"CD54'CDfi6*HLA-Dr нагруженные опухолевыми антигенами in vitro. Дендритные клетки культивируют из моноцитов периферической крови онкологического больного в присутствии соответствующих ростовых факторов.

На сегодняшний день, спектр проводимых иммунологических исследований при вакцинотерапии направлен на изучение популяции антиген специфических цитотоксическнх лимфоцитов цнтокнн продуцирующей способности лимфоцитов. Однако увеличение опухоль специфических CTL не всегда коррелирует с клиническим Течением заболевания. В связи с этим, актуальным является применение анализа субпопуляцнонной структуры нммунокомпстентных клеток с использованием метола проточной цнтофлуориметрии. Особый интерес представляет изучение субпопуляций эффекторных лимфоцитов и их функционального состояния, а так же исследование роли регуляторных клеток у онколог"ческих больных в процессе вакцинотерапии.

Цель работы:

Выявить иммунологические маркеры эффективности проводимой вакцинотерапии аутологичными дендритными клетками и факторы неблагоприятного прогноза у онкологических больных с диагнозом меланома и рак ночки.

Задачи исследования:

1. Оценить изменения фенотипа основных популяций лимфоцитов онкологических больных в процессе вакцннотерапин

2. Выявить субпопуляции иммунокомпетектных клеток, активация которых указывает на эффективность используемой вакцинотерапии.

3. Оценить функциональную активность клеток эффекторного звена у онкологических больных в процессе вакцинотерапии.

А- Оценить субпопуляинн регуяяторных лимфоцитов у онкологических больных в процессе вакцинотерапии.

Няучнаи новизна:

Получены данные, указывающие на то, что уровень экспрессии перфорина в эффекториых лимфоцитах является маркером нх интотоксической состоятельности.

Выявлены еубпопуляционные различия эффекториых клеток у онколе J H чес к нх больных при вакцинотерапии. Показано, что у больных при эффективном лечении, а периферической крови наблюдались CD8JCD16 Perforin* и CD16*CDg Perforin* популяции лимфоцитов, и менее 3% CD J 6* CD8'Perforin* клеток. У прогрессирующих больных было аыяалепо уменьшение CDS’CD 16 Perforin" или CDI6"CD8Terforin* субпопуляцнй и увеличение количества CDt6'CD8* лимфоцитов, экспрессируюших перфорин.

Обнаружено увеличение количества регул яторных лимфоцитов с фенотипом CD4'Granzymc В* у онкологических больных на фоне нро1рессировання заболевания.

Выявлены различия фенотипа лимфоцитов периферической крови больных с диагнозом меланома н рак почки при п регрессировании основного заболевания. Популяция СОЗ’СОв* лимфоцитов выявлялась у больных с заболеванием почки- Bee COS" лимфоциты больных мелакомой были CD3 пюнпгвгшмн.

Hay1ч по- npitKi и ческа и 1 на чнмость:

Выявленные специфические маркеры активации иммунной системы в процессе вакцинотерапии являются критериям& raquo- мониторинга эффективности проводимой -терапии.

Адаптирован метод криоконсервацни мононукл сэров для последующею иммунологического исследования.

ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

В настоящее время, наряду с традиционными подходами лечения злокачественных новообразований, большое внимание уделяется разработке новых методов биотерапин, в том числе вакцинотерапии, Несмотря на то, что сам термин — & laquo-вакцина»- не совсем корректно использовать в онкологии, так как классически считается, что вакцинацию проводят для предотвращения заболевания, а не для лечения уже существующей болезни, он вошел в научную терминологию и характеризует определенное направление в иммунотерапии опухолей. Главной задачей вакцинотерапии в онкологии, отличающей ее от других биотерапевтических подходов, является генерация специфического иммунного ответа на вводимые компоненты, которые в той или иной степени представляют собою опухолевые антигены. Таким образом, принято считать, что противоопухолевая вакцинотерапия представляет собой ряд б йоте р an е вти чес ких подходов, в основе которых находится презентация опухолевых антигенов Т лимфоцитам с последующим развитием специфического противоопухолевого иммунного ответа (Danson S. and Е. origan P., 2006).

Механизмы нарушения функционирования клеток иммунной системы у онкологических больных,

Выживание опухолевых клеток в организме человека может быть обусловлено различными механизмами, в том числе и н результате изменений в иммунной системе. Среди иммунологических механизмов можно выделить две основные группы — это дисфункция Г лимфоцитов и нарушение нормального созревания дендритных клеток (DC),

Т клеточная дисфункция.

Нарушение функционирования Т клеточного звена иммунитета может включить н себя СЯеДУЮШИб варианты: отсутствие антигене пецифического Т клеточного ответа, генерализованная дисфункция и апогттотическое уменьшение численности Т лимфоцитов.

Отсутствие антиген специфического Г клеточного ответа происходи? в результате нарушения путей передачи клеточных сигналов и функционирования лимфоцитов вплоть до Т клеточной анергии. Показано, что уже на ранних стадиях опухолевой прогрессии у животных наблюдается изменение продукции IFN-y и пролиферации Т лимфоцитов, а ответ на специфическую и иеспецифнческую стимуляцию (Stavclcy-O'Carroll К., 1998) — Исследования функционального статуса опухоль специфических Т клеток больных меланомой также выявили нарушения продукции цнтокинов (Lee Р.Р., 1999).

Генерализованная дисфункпнз — угнетение эффекторного ответа за счет превалирования Th 2'™ типа. И у жилетных, и у человека при злокачественных процессах показано, что микроокружение опухоли переключает баланс Т хелперных клеток, приводя к преобладанию Th-2 ответа. Исследования внутриклеточного уровня иитокинов лимфоцитов больных почечно-клеточным раком выявила, что на фоне прогресснроициня заболевания происходит переключение синтеза цнтокинов с ТЫ типа — [FN' TKF-a на Th2 тип — LL-4, IL-10 (Oiashi Т., 2001) Хотя факторы, определяющие развитие ответа Th2 типа у онкологических больных еше мало научены, на модели животных показано возможное участие TGF-P и IL-10 в этом процессе (Shash, А II and Lee С., 2000), Следует отметить, что 1L-10 играет важную роль в индукции Т клеточной анергии, угнетая CD28 путь костнмуляцнн (Akdis С.А. and Blaser К., 2001),

Уменьшение пула Т лимфоцитов за счет агюптоза. Показано, что у онкологических больных наблюдается спонтанный апоптоз малых субпопуляпнй Т лимфоцитов периферической крови (Saito Т, 2000). а так же увеличение чувствительности активированных Т клеток периферической крови к индуцированной гибели (Uzzo FLG. t 999). Механизмы наблюдаемой клеточной гибели Т лимфоцитов при опухолевой прогрессии остаются мало изученными. Однако Fas/FasL опосредованный путь, по-внлнмому. играет важную роль в удалении активированных опухоль реактивных Т лимфоцитов (Sharma К. 2000). Показано, что опухолевые клетки могут экспресснровать на своей поверхности FasL и способны индуцировать апоптоз Fas-почнтнвных Т лимфоцитов (Whiteside ТХ. and Rabinowich Н-. 1998).

Нарушение лнффсреицнровки денлрнтнык клеток.

Неспособность Г лимфоцитов распознать и уничтожить опухолевые клетки является важным фактором ускользания опухоли от иммунологического надзора. Для индукции эффективного противоопухолевого иммунного ответа необходимы антнген-презентирующне клеткн. Дендритные клетки являются наиболее мощными антнген-преэентируюшнмн клетками, контролирующими иммунный ответ посредством взаимодействия с лимфоцитами н представляют собою гетерогенную популяцию клеток костномозгового происхождения (Banchercau J. and Steinman R.M., 199S).

Дендритные клетки способны активировать иммунный ответ против антигена, представленного в комплексе с коетнмулируюшимн молекулами. В тоже время они являются важными медиаторами периферической иммунной толерантности и обеспечивают иммунный гомеостаз. Эти две противоречивые функции дендритных клеток зависят от степени их зрелости клеток (Wallet М. А-. 2005- Hugucs S., 2004- Espinoza-Delgado I., 2002). Ранее было показано, что функциональная активность DC в организме онкологических больных значительно снижена, и одной из причин этого является неспособность дифференднровки DC в зрелые формы (Almand В. ,

2000. 2001) — Это может быть обусловлено как факторами, секрета руемыми самой опухолью (1Ы0, TGF-{J) (Gabrilovich 0″ 1998, 1999- Sieinbrink К& bdquo- 1999), так и факторами, вырабатываемыми организмом (например, глюкокортиконды) в ответ на присутствие опухоли, которая в свою очередь является хроническим стрессорньш фактором (Rea D. T 2000).

Таким образом, у онкологических больных наблюдается угнетен не созревания дендритных клеток и, ках следствие, — нарушение антигенной презентации и стимуляции эффективного противоопухолевого иммунного ответа- преобладание секреции цитокннов ТЪ2 типа- повышенная чувствительность активированных Т лимфоцитов периферической крови к индуцированной гибели.

Клиническое применение вакцин на основе дендритных клеток.

В последнее время в бнотераннн опухолей активно используются вакцины на основе дендритных клеток. Эти мощные антиген-преэснтирующие клетки играют центральную роль в развитии иммунного ответа и поэтому являются идеальной основой для противоопухолевых вакцин (Ribas А., 2003) — Хотя виды дендритных вакцин различаются по типу клеток предшественников, способу культивирования клеток и нагружаемым антигенам, общим для всех является схема создания вакцины — созревание дендритных клеток и нагрузка опухолевым антигеном происходят вне организма пациента.

Исследования De Vries ММ. с соавт. {2003), посвященные изучению способности зрелых н незрелых DC, нагруженных белком, ассоциированным с мсланомой (gplOO), индуцировать первичный нитотоксический Т лнмфоцнтарныЙ ответ in vivo показали, что у всех пациентов, вакцинируемых зрелыми дендритными клетками, была выявлена пролонгированная пролиферация Т клеток и гуморальный ответ. С другой стороны, >' большинства больных вакцинируемых незрелыми DC было зарегистрировано полное отсутствие иммунного ответа. Показано, что II иммунизация незрелыми дендритными клетками угнетает CD8+T клеточный антиген специфический ответ и стимулирует продукцию 1L-I0 Т клетками (Dhodapkar M.V., 2001 — Jonuleit Н., 2000).

Подобное исследование проводили Jounuleit Н. с соавт. (2001), в котором одному и тому же испытуемому вводили зрелые и незрелые дендритные клетки, натруженные разными антигенами. При этом подавление иммунного ответа наблюдали на тот антиген, которым были нагружены незрелые дендритные клетки, тогда как на антиген, которым были нагружены зрелые ДК, развивался иммунный ответ. Таким образом, эффективная противоопухолевая вакиина на основе зрелых ДК приводит к увеличению и популяции CD4* лимфоцитов, секретирующих IFN-у, к CDS' цнтотокснческого Т клеточного ответа. (Holt P, G, and Stumbles P.A., 2000),

К настоящему времени завершены многочисленные исследования, представляющие собой I н/нли It фазу клинических испытаний вакцин на основе аутологнчных дендритных клеток. Вакцины применялись при различных онкологических заболеваниях- у больных с поздними стадиями меяаиомы (Branchereaii J., 2005- Salcedo М, 2005- Dillman R., 2005- Trefzer lf. t 2004- Vilella R, 2004- Slingluff CLX, 2003), гепатоцелюлярной карциномы (Lee W. C" 2005), злокачественной глиомы (Yamanaka R., 2005- Kikuchi Т. 2005- Yu J. S" 2004- Yamanaka R., 2003), колорсктапьного рака (Morse M.A., 2005- Liu KJ., 2004), немелкоклеточного рака легкого (Isliikawa Л., 2005- Morse М.Л., 2005), нейробластомы (Caruso D.A., 2005), рака почки (Partdha H.S., 2005. Gitlim B, J" 2003- Su Z., 2003- Marten A. 2003- Oosierwijk-Wakka J.C., 2003), рака предстательной железы (Pandha H.S., 2005- Lee D-. 2004- Barou В., 2004), рака молочной железы (S%*ane I. M, 2004), рака шейки матки (Santin A.D., 2003), при множественной миеломе (Reichardi V-L-, 2003), клеточной лимфоме (Maier Г, 2004) н некоторых других злокачественных нвообраэовзн ил х

Меланома кожи является одним из самых агрессивных онкологических заболеваний с неблагоприятным прогнозом (Демидов Л.В., 1999), Даже при 12 радикальном иссечении опухоли при IIB-C н Ш стадиях заболевания до 80% больных погибают от последующего прогрсссирования в течение 3 лет (Молол D., 1999), Поэтому основное внимание онкологов сегодня привлечено к возможности использования в лечении мсланомы биологических подходов (Houghton A.N., 2001). Такой выбор обусловлен несколькими причинами, Во-первых, описаны случаи спонтанного регресса опухоли, т. е. показана принципиальная возможность организма развить противоопухолевый иммунитет. Во-вторых, на сегодняшний день охарактеризовано наибольшее количество опухоль-ассоцинраванных антигенов меланомы (Kirkin A.F., 2002). что упрощает регистрацию иммунного ответа пациента на проводимую вакцинотерапию (Whilesidc Т., 2003).

Weber с еоант. (1999) инкубировали аугологнчные DCs больных дкесемнннрованной мслаиомой с опухолевыми антигенами меланомы, содержащими эпитолы gplOO и т проз и пазы. Далее, инкубированные DCs вводились внутривенно 15 больным. Полная регрессия опухоли отмечена у I больного, частичная регрессия ~ у I больного. Еще у 2 больных зафиксирована стабилизация болезни, Исследователи планируют проведение 2 фазы клинических испытаний DCs вакцинотерапии.

Почечно-клеточный рак — злокачественное заболевание, резистентное к стандартной химиотерапии, поэтому в настоящее время применение вакцин, способных запускать специфический противоопухолевый иммунный ответ у этих больных, в том числе и вакцин на основе трелых дендритных клеток, является перспективной областью исследования (Имятников Е.Н., 2005- Носов Д. А., 2005). Так Holtl L. et al (1999) показали развитие специфического противоопухолевого иммунного ответа у 12 пациентов после введения дендритных клеток, нагруженных опухолевым лизатом и иммунногенным белком (keyhole-limpet hemocyanm). В другом исследовании (Мапеп А., 2002) 15'™ пациентам вводили дендритные клетки, нагруженные опухолевым лизатом в лимфоузлы или соседние ткани под контролем ультразвука. В результате у одного пациента наблюдался частичный отдам и у 7 была достигнута стабилизация процесса- ГЗТ наблюдалась у небольшого количества больных. В исследовании Holtl L. с соавт, (2002) 27 пациентов с метастатическим раком почек были вакцинированы дендритными клетками, нагруженными опухолевым лнзэтом аутологнчной опухоли или аллогенным лнззтом линии клеток карциномы почки, У двух больных наблюдался полный ответ и у одного частичная регрессия заболевания. Еще в одном исследовании (Avigan 2004) 23 онкологическим пациентам с диагнозами днссемннировзнный рэк молочной железы (10) и днееемннированный рак почки (13) вводили дендритные и опухолевые клетки, и так же в небольшой группе больных наблюдался иммунный ответ и частичная регрессия основного заболевания,

Таким образом, приведенные выше данные показывают, что на сегодняшний лень, для создания противоопухолевых вакцин на основе DC принято использовать зрелые дендритные клетки.

Иммуномониторинг.

Использование методов терапии, направленных на стимуляцию специфического иммунного ответа, требует адекватного моинторингз-Поскольку при вакцинотерапии опухолей важным является развитие специфического противоопухолевого иммунного ответа, все исследования иммунной системы в процессе вакцинотерапии сводятся, как правило, к анализу популяции специфических цнтотоксичсскнх Т лимфоцитов.

На сегодняшний день существует два основных иммунологических метода оценки развития антиген-специфического Т клеточного огвета — это определение способности Т клеток пролифернровать в ответ на антиген и выявление способности Т лимфоцитов убивать меченные опухолевые клетки Следует отметить, что для оценки интотокснческой функции СП. существует несколько методических приемов исследования. Первый и самый (4 древний использование радиоактивной метки (5|Сг и 'Н-thymidine). В его ослопе анализ высвобождении из разрушенных клеток-мишеней радиоактивных молекул- Второй — колориметрический. Он основан на анализе живых клеток-мишеней, способных к гидролизу солей тетразолиума (МТТ), кристаллы которого окрашиваются, а голубой цвет. И третий -цитофлуорнметрнческий, который подразумевает использование метода Проточной цитофлуорметрии для количественного анализа живых И мертвых клеток. Так использование пропиднума йоднда (PI) позволяет выявлять популяции клеток с фрагментированной ДИК. Несмотря ив различие этих методов, общим для всех является предварительное культивирование лимфоцитов периферической крови больного и культуры опухолевых клеток-мишеней (Окало F., 2005- Fleischer К., 2004).

Следующим по значимости иммунологическим исследованием является анализ цнтокнн-пролуинруюшей способности лимфоцитов. Здесь наиболее применимы два метода — EI-ISPOT и метод проточной цитофлуоримстрии. EI. TSPOT представляет собой коммерческие тест-системы с помощью которых можно подсчитывать единичные клетки, сскреткруюшие определенный цитокнн, например — IFN-y, для оценки клеточного отпета (Whiteside Т., 2003), Использование проточной цитофлуоримстрии позволяет определять уровень секрении цнтокинов в различных субпопуляцнях клеток.

Несмотря на то, что исследование иммунной системы на сегодняшний день не возможно без проточной цитофлуоримстрии, детальный анализ основных еубпопуляцнй лимфоцитов при нммунномокнторингс вакцинотерапии практически не используется. Исследование фенотипа лимфоцитов, как правило, сводится к анализу экспрессии CD3, CD4, CD8, CD 16 антигенов и некоторых активационных маркеров (CD25. CD95 и др). Хотя в последнее время и появилось много работ, посвященных исследованию различных популяций лимфоцитов онкологических больных. коррелирующих с прогнозом, нммуномониторннг при вакцинотерапии, а основном ограничивается оценкой функциональной активности CTL.

Характеристика основных популяций лимфоцитов периферической крови

Все клетки организма человека имеют на своей поверхности белковые молекулы, называемые также поверхностными рецепторами (антигенами) илн кластерами дифференцнровкн (CD). Большинство этих антигенов охарактеризовано и пронумеровано. На последнем восьмом международном рабочем совещании было систематизировано 339 кластеров днфференпнровки

Т лимфоциты.

Понуляиня зрелых Т лимфоцитов составляет от 70% до 80% от всех лимфоцитов периферической крови здоровых доноров. Главной структурой поверхности Т лимфоцитов, от которой зависят дифференцировка и выполнение функций, является рецептор для антигенов — TCR. Еше одной важной молекулой Т лимфоцитов выявляется CD3 антиген. Он состоит нз 5 полнпептнлных цепей (у, 6, е,? и Г|), коаалентно связанных с Т клеточным рецептором (TCR), Популяция & quot-Г лимфоцитов гетерогенна — примерно 2/3 CD3* клеток репрессируют на своей поверхности СЕМ антиген н 1/3 — CD8 антиген. Таким образом, в периферической крови выявляется от 28% до 58% лимфоцитов с фенотипом CD3*CD4″ м от 19% до 48% CD3 «CD8» клеток. При этом примерно 5% клеток несут одновременно маркеры CD4 н CD8 -CD3~CD4'CD8 Следует отметить, что CD4 антиген ассоциирован с комплексом CD3/TCR, является корецептором молекул МНС II класса, a CDS антиген — для МНС I класса. Существует так же субпопуляцня CD3+ Т лимфоцитов, лишенная экспрессии как CD4, так CDS антигена. Показано, что CD3*CD4 CDS Tft| или Double-Negative (DN) T лимфоциты обладают рсгуляторными свойствами (Young К, and Zhang!, 2002). Было установлено, что они способны защищать трансплантат от иммунной системы хозяина, угнетая CD8+ и CD4* клетки, премированные против аллоаитигенов, но в отличие от CD4"CD25* Т, ч клеток, которые угнетают противоопухолевый иммунный ответ, DN Т лимфоциты наоборот, усиливают противоопухолевый иммунный ответ. Эта субпопуляция клеток сскрстирует IFN-y и обладает способностью убивать клетки мишени через Fas/FasL взаимодействие (Young К J, 2003),

Еще одним важным показателем является нммунарегуляторный индекс (ИРИ) — соотношение количества С ЕМ& quot- и CDS' лимфоцитов (CD4+/CD8+). В норме его значение колеблется от 1,2 да 2,4. Увеличение ИРИчасто наблюдается при аутоиммунных патологиях. Снижение индекса характеризуется обратным соотношением популяций и нередко наблюдается у онкологических больных (Кадагидзс З.Г., 1988),

На поверхности всех Т лимфоцитов экспресснруется антиген CD45 -трансмсмбраннэя молекула, влияющая на функционирование ТС К, цитоллазматическнй домен которой oбJtaдaeт активностью тнрозннфосфатазы и так же участвует в запуске актнвацконных сигналов, Эта крупная молекула существует в нескольких нзоформах. отличающихся наличием или отсутствием трек внеклеточных доменов — А, В и С, Наибольший, но размерам вариант имеет все три домена и обозначается как CD45RA. Эта изоформа свойственна наивным 'Г лимфоцитам: субпопуляцня CD4*CF> 45RA' клеток составляет до 50% лимфоцитов периферической крови, a CD8"CD45RA* лимфоцитов — до 75%, При дифферениировке клеток происходит последовательное изменение нзоформ CD45 антигена вплоть до формирования инварианта CD45RO, свойственного клеткам памяти. Следует отметить, & laquo-по в процессе активации лимфоцит изначально приобретает молекулы CD45RO, и лишь потом теряет антиген CD45RA (Ярилнн А.А. 2004),

Полноценность передачи сигнала TCR обусловлена активностью молекулы корецептора CD28. Этот днеульфидоподобный гомодимеркый гликопротеин является молекулой клеточной адгезии (САМ) и функционирует как лиглнл для CD8G и СР86 антигенов, которые экспресснруются на поверхности АПК (В лимфоциты, макрофаги и дендритные клетки), CD28 антиген представлен на поверхности 60−80% Т лимфоцитов периферической крови, при этом 95% CD4″ лимфоцитов, 50% CD8' лимфоцитов и 5% незрелых тнмоцитов несут данный маркер на своей поверхности. У лиц пожилого возраста, а также у больных хроническими инфекционными заболеваниями наблюдается увеличение количества CD28 негативных лимфоцитов. Плотность CD28 антигенных детерминант на поверхности лимфоцитов увеличивается после их активзиии. Обе популяции Т лимфоцитов, и CD4*, и CD8″ по экспрессии этого антигена могут быть разделены на две функционально различные субпопуляции по цнтотоксн ческой н лнмфокин-продуцнрующей способности (Waianabe М., 2005).

CD4*CD28* субпопуляция лимфоцитов лишена цнтотоксической активности, опосредованной через TCR. Эти клетки продуцируют только незначительное количество цитокннов, тогда как CD4"CD28~ лимфоциты, наоборот, способны проявлять цитотокенчеекую (TCR-огюсредованную) активность и продуцируют IL-2, IFN-y и TNF> a/|3. Большинство С Ш лимфоцитов конститунтнвно экспресс ируют CD28 антиген, играющий ключевую роль в обеспечении костимуляторных сигналов для индукции клеточной активации и предупреждении анергии и апоптоза Т клеток. Популяция CD4″ лимфоцитов, лишенных экспрессии молекулы CD28, у здоровых доноров встречается крайне редко. Происхождение CD4*CD2& клеток остается Maito понятным. Тот факт, что эта популяция лимфоцитов выявляется у доноров, предполагает возможное развитие этих клеток кз CD4* предшественников или из CD4TD28T Т лимфоцитов, которые подверглись функциональным и фенотип нческим изменениям после IS активации. Показано, что у здоровых доноров CD28″ популяция CD4' лимфоцитов впоследствии восстанавливала поверхностную экспрессию этого антигена (Maricovic-PEese S-, 2001).

Субпопуляция CD8*CD28″ лимфоцитов обладает высокой способностью к пролиферации, а у CD8TD28 клеток пролифератнвные возможности ограничены и для них характерна высокая иитотоксическая активность. Fiorcntini S, с соавт, (2003) описали субпопуляцию лимфоцитов с фенотипом CP8"CD28*CDI lb", сочетающую в себе признаки наивных клеток (CD8+CD2S*CD1 lb") и клеток памяти (CD8'CD28"CD1 lb*), Подобно CD28 лимфоцитам, CDIIb*CD28* клетки также способны секретнровать IFN-y, перфорнн и проявлял, мощную интотокснческую активность. Помимо этого, они способны отвечать на хемотакснческие стимулы и преодолевать эндотелиальный барьер. В тоже время, CD8*CD28'CD1 lb' лимфоциты способны секретнровать IL-2 и иролнферировать под действием м итоге иных стимулов. Эта популяция может быть промежуточным звеном в процессе дифференцировкн CD8 лимфоцитов в CTL. Появление субпопуляцин CD8"CD28"CDI lb' клеток отмечено у больных вирусной инфекцией. При угасании заболевания количество данной субпопуляцин лимфоцитов уменьшается до нормальных значений (Торр M.S., 2003).

В лимфоциты.

Основной характеристикой В лимфоцитов является наличие на их поверхности рецепторов для распознавания антигенов — BCR, подобно TCR рецептору Т лимфоцитов. Сигнальной функцией обладает ряд дополнительных молекул, образующих корецентор. В его состав входят молекулы CD19, CD20, рецептор для комплемента CD21 и др. В периферической крови антиген CD 19, как и CD20, представлен преимущественно на поверхности 7−23% лимфоцитов (Сидорова Е.В.+ 2002- Baumgarth N. 2000).

NK клетки.

В периферическом пуле лимфоцитов присутствует фракция клеток, лишенная маркеров Т н В лимфоцитов, обозначаемая как NK. (натуральные или естественные киллерпые) клетки. Маркерами естественных киллеров являются CD56 — изоформа адгезивной молекулы N-CAM и CD 16 ннзкоаффинный рецептор IgG — Fc7RJ. ll. В периферической крови на долю NK клеток приходится от 10% до 15% общего числа лимфоцитов. Кроме того, на поверхности NK клеток определяются адгезивные молекулы, в том числе интегрнны и их рецепторы (Dosiou С. and Gtudicc L.C., 2005),

Активированные лимфоциты.

Распознавание лимфоцитами антигенных эпнтопов н обмен сигналами с другими клетками иммунной системы являются условиями проявления активации лимфоцитов — процесса, на котором базируются практически все иммунологические реакции, проявления иммунного ответа. Активация -многозначное понятие. Ее суть сводится к переходу клетки в состояние, с которым связаны выполнение функций и проявление специфической активности клетки. При классическом варианте активации лимфоцитов ее пусковым сигналом служит связывание рецепторов BCR с антигеном или TCR с комплексом антигенного пептида с молекулой МНС I или 1! типа. Другим важным фактором для запуска активации лимфоцитов являются дополнительные сигналы, исходящие от антигенпрезеннтирующнх клеток. Основную роль в случае контактной костимулянии Т лимфоцитов играет взаимодействие CD28 антигена Т клетки н молекул CD80/CD86 АПК, а при костимуляцни В лимфоцитов — взаимодействие CD40 антигена В клеток и молекулы CD154 (CD40L) на поверхности CD4* Т лимфоцита.

Существует понятие актнвацнониых антигенов — это продукты некоторых генов, связанных с активацией, которые появляются на поверхности лимфоцитов в различные се сроки (Ярилин А, А, 1999). Ниже приведена краткая характеристика основных маркеров активации.

HLA’Dr — антиген МНС II типа. Представляет собой трансмсмбранный глнкопротенн состоящий из двух субъсднниц, а и J} с молекулярной массой 36 н 27 kDa соответственно. Этот антиген репрессирован на поверхности В лимфоцитов, моноцитов, макрофагов, активированных Т лимфоцитов, активированных NK клеток и клеток-предшественников. Он также представлен на клетках тимнческого эпителия, В лимфоцит зависимой зоны селезенки н лимфоузлов. На поверхности CD3* лимфоцитов HLA-Dr антиген является маркером активированных клеток (Хаитов P.M. и Алексеев Л. П. 2002).

CD25 (Mr 55 kDa). Низкоаффинный рецептор а-цепн IL-2. Экспрессирован на поверхности субпопуляцнй лимфоцитов периферической крови. Плотность этого антигена на поверхности клеток увеличивается после активации. Молекула CD25 может быть представлена на поверхности различных субпопуляций Т лимфоцитов и NK клеток.

Популяция CD4*CD25' лимфоцитов периферической крови, так же называемая Т регуляторной (Tl?f), обладает способностью угнетать развитие клеточного иммунного ответа, Т, Г1 клетки обычно экспрсссируют CTLA-4, GITR и CD45RO антигены, Однако эти маркеры могут быть представлены и на других активированных лимфоцитах, и лишь сочетание CD4'CD25*FoxP3' позволяет визуализировать истинные Тге1 лимфоциты (Baecher-Allan С., 2001, 2004).

CD38 (Mr 45 kDa) — трансмембранный глнкопротенн. молекула адгезии, маркер плазматических клеток. Экспрессирован на тимоцнтах, преВ клетках, активированных Т лимфоцитах, моноцитах, NK клетках- плазматических клетках, секретирующих иммуноглобулины- костномозговых клетках-предшественниках эритрондного н миелоидного ряда, макрофагах, дендритных клетках н некоторых эпителиальных клетках. При активации CD38 антигена происходит мобилизация кальция, фосфорилированне тирозина, активация ядерных факторов и секреция цнтокинов (Sandoval-Montes С and Santos-Argumedo I,., 2005),

Молекула CD38 не обладает классической структурой рецептора, имея короткую внутриклеточную (интоплазматнческую) часть — N-кон ценой домен и длинную внеклеточную (экстрацелюлярную) часть — С-коицевой домен. Короткая цктоплаэматичсская часть CD38 антигена не позволяет ему самостоятельно передавать сигнал активации внутрь клетки. Тем не менее, этот маркер управляет передачей специфических сигналов в Т лимфоцитах. В лимфоцитах и NK клетках., используя для этого TCR (CD3), BCR и CD 16 антиген (Deaglio S., 2002. НагаЫш T. J, 2003),

CD9S или Fas/APO-l (Mr 48 kDa), является представителем TNF/NGF семейства. Экспресснрован на поверхности некоторых нормальных Т и В лимфоцитов, NK клеток и моноцитов. Он преимущественно выявляется на поверхности CD45RCr Т лимфоцитов памяти и у/5 Т лимфоцитов, Поверхностная экспрессия этого антигена может увеличиваться при некоторых аутоиммунных заболеваниях и вирусных инфекциях, включая СПИД. Связывание внеклеточной части рецептора с Fas-L приводит к изменению внутриклеточного домена н 1рансдукцнн сигналов клеточной смерти (Arens R., 2005).

Первоначально выявленный как фактор активации апоптоза лимфоцитов и опухолевых клеток, CD95 антиген регулирует и жизнь, и смерть различных типов клеток иммунной системы, т.к. Fas сигнальные пути вовлечены так же в костнмуляиию и пролиферацию Т лимфоцитов (Siegel R.M., 2000), В зрелых Т лнмфоинтвх посредством Fas/FasL механизма осуществляется элиминация избыточного количества эффекторных лимфоцитов, образовавшихся в ходе иммунного ответа как часть негативного обратного механизма, этот путь был назван проприоцндальней регуляцией (Leonardo М& bdquo- 1999).

Субпопуляции эффекторных лимфоцитов.

Популяция эффекгорных лимфоцитов гстсрогснна и содержит как Т лимфоциты, так н МК клетки. Известно, что основной функцией кнллерных клеток является выявление и удаление клеток собственного организма, имеющих отклонения от нормы (опухолевые, вирус инфицированные и тл,). В отличие от зффекторных Т-лнмфоцнтов, NK-клеткн опосредуют цнтотокснческие реакции без предварительной сенсибилизации.

Под термином цнтотокснческий Т лимфоцит (CTL) принято понимать CDS' эффекторные клетки, хотя CD4* лимфоциты так же способны проявлять шгтогоксическую активность (Hegde N.R., 2005). Для всех СП-характерно отсутствие экспрессии CD28 антигена. Так у больных с аутоиммунными заболеваниями (ревматоидный артрит, множественный склероз и др.) было выявлено появление CD4*CD28~ клеток, способных продуцировать IFN-y и обладающих интотоксической активностью (Namekama Т., 2000). Описывают также резистентность этой популяции к аполтозу, благодаря наличию у них экспрессии Вс|-2 (Schirmer М, 1998).

Известно, что CD8'CD28 лимфоциты экспрессируют ц-иеггь JJi ннтерфина — CDllb антиген, (3- ннтергрины опосредуют адгезию лимфоцитов на энд отел"шльних клетках и последующий выход клеток из сосудистого русла, а также обеспечивают хоминг клеток в очаг воспаления. Более того, экспрессия CDllb антигена на поверхности CDS' лимфоцитов связана с их цнтотоксической способностью. Функциональная днфференцнровка CD8' клеток в зрелые эффекторные лимфоциты характеризуется исчезновением CD28 антигена на поверхности клеток и появлением CDllb молекул. В периферической крови до 30% клеток экспресс и руют CDllb антиген, включая большинство NK клеток и 23 субпопуляции Т лимфоцитов. Он также присутствует на поверхности зрелых нейтрофилов и моноцитов, В периферической крови от 5% до 50% CDS' лимфоцитов экспрессируют CD J lb антиген (ChrisTcnscn J.E., 2001),

Показано, что гетерогенными являются не только популяции цитотоксичеекнх клеток, но и механизмы цитолиза, используемые ими. Более того, одни и те же эффекторные лимфоциты способны использовать несколько рагтнчных механизмов, В настоящее время известно несколько систем реализации цнштоксической функции лимфоцитами. Одним из основных путей является экзоцнтоз лнтнческих гранул — перфорина и гранзимов (Smyth MJ" 1999),

Иерфорин (Mr 70 kDa). Белок, содержащийся в цитолитических гранулах эффекторных лимфоцитов, который способен проникать в мембрану клетки-мн шенн, н в результате полимеризации образовывать мембраноатакукнций комплекс, вызывая осмотический & quot-взрыв"- н лизис клетки. Полимеризация перфорина происходит только в присутствии ионов кальция, Через полнмеризованные транспортные макроноры в клетки проникают гранзнмы, содержащие протсазы. которые являются одним из важных проапоптотических факторов (Spancr D., 1998).

Известно, что уровень экспрессии перфорина зависит от возраста. Так у детей до 5 лет 30% лимфоцитов содержат перфорин — это преимущественно CD4'перфорин& quot- и CD8'перфорин' популяции клеток, У людей в возрасте 20−30 лет популяция перфорин& quot- клеток составляет 10−20%, а у лиц старше 70 диагностируется только 7% перфорнн-познтнвных лимфоцитов, причем две трети их них составляют CD1&* клетки н одну треть CD8' Т-лимфоциты, тогда как на долю CD4″ перфорин& quot- лимфоцитов приходится менее 1% (Marian! Е., 1998), Кроме того, Rukavina 1>, с соавт, (1998) указывают на различия экспрессии перфорина у мужчин и женщин. Так у мужчин наблюдается более высокое процентное содержание перфорин’CD 16″ клеток. В то время как у женщин одновременно с низким количеством перфорин’CD 16' лимфоцитов отмечается более высокая интенсивность экспрессы и нерфорнна в NK клетках, то есть степень насыщенности клеток гранулами перфорнна.

Гринзммы семейство сериновых протез?, локализованных в специальных гранулах эффекториых лимфоцитов, В настоящее время выделяют грант мы Л, В, К. С и М.

Гранзимы, А и К обладают грипсиноподобной активностью и образуются на основе остатков аргенина и лизина. Более изученным является гранзим А, который участвует в каспазо независимом цитолизе клеток мишеней. & quot-Это связано с его способностью быстро разрывать молекулу ДНК без олигонуклеосомной фрагментации- накопление гранзнма, А сннергически усиливает фрагметлцню ДНК, которая индуцируется i ранзимом В (Zhang D, 2001).

Внутриклеточным суббстратом для Граизима В является один из представителей семейства цистенновых протеаз — СРР32+ который расщепляется и активируется гранзимом В в процессе цитолиза с участием СП. in vivo и in vitro. Грананм В играет важную роль в индукции алогттоза в клетках-мишенях непосредственно или путем активации клеточных каспаз (Atkinson ЕА, 1998- Bade В., 2005). Установлено, что CDS' цитотокснческие лимфоциты и NK клетки содержат одновременно и перфорин и грВНЗИМ В (Grossman. WJ. T 2003). В настоящий момент имеются работы, демонстрирующие, что СЕМ клетки тоже способны содержать эти цктолнтические гранулы, но нк назначение до сих пор не ясно (Аррау V., 2002). Показано, что связывание стрептококкового М белка е CD46 антигеном на поверхности CD4' Т, ч клеток приводит к увеличению экспрессии гранзнма В, обеспечивающего регуляцию иммунного ответа (Price J.D. 2005).

Наличие OBSiOHiiaJd отмечено в небольшой популяции Т лимфоцитов периферической крови человека. Основываясь на данных о том, что уровень гранзнма М не всегда коррелирует с лити ческой активностью, предполагается, что его экспрессия, а & quot-Г лимфоцитах, CD3 'CD56″ Т клетках и

NK клетках играет важную роль в реакциях врожденного иммунного ответа (SayersTJ., 2001).

Гранит С участвует в каслазонезавнеимом пути клеточной смерти и вызывает быстрое повреждение ядре, его уплотнение с последующим коллапсом. Однако если на первых этапах основной мишенью для гранзнма С является ядро, то последующие события приводят к повреждению митохондрий- Это отличает йпоптш вызванный гранэнмом С от классического апоптоза, обусловленного гранзнмом В (Johnson Н., 2002).

Сегодня хорошо известно, что помимо перфоркн-гранзим опосредованной индукции гибели клеток мишеней существует и Fas/FasI- -CD95/CD95L pcueirropwo-зависимый механизм (Ma J, 2003), а так же TNF/TNFR (Orlinick J R. and Chao M.V., 1998). TRAIL/TRAIL-Rs (Doroihee G., 2002) и TRAIL-2/TRAIL-DR (Eggcrt A, 2002) системы

Субпопуляции рогуя игорных лимфоцитов.

Иммунная система обеспечивает зашнту организма от множества патогенов и аутоагрсссии. Развитие эффективного иммунного ответа сопровождается выработкой провоспалитсльных цнтокинов, антител н активацией киллерных клеток, которые способны с одной стороны успешно элиминировать микроорганизмы, вируеннфниированные и опухолевые клетки, а с другой — повреждать и уничтожать нормальные клетки организма, Таким образом, любой иммунный ответ нуждается в грамотной регуляции. В настоящее время много внимания уделяется исследованию рогуляторных клеток. Это гетерогенная популяция, в которой можно выделить CD4' и CDS' сублопуляцни лимфоцитов, а также NK Т клетки. (Jiang Н. and Chess L. 2004).

Популяции CD4"C"25T Trtr

CD4"CD25* клетки — это уникальная субпопуляцня Т лимфоцитов, которая играет важную роль в обеспечении иммунологического гомеостаза и защите организма от аутоиммунных заболеваний (Dicckmarm D., 2001). Помимо CD4 и CD25 антигенов Т1С1 клетки репрессируют CD45RO 8 исследованиях in vitro они плохо пролнферируют и сегрегируют ингнбирующне цитокнны IL-10 и TGF-p (Shevach Е М,. 2001), CD4TD25* Тч клетки также способны угнетать пролиферацию CD4"CD25 и CD8* лимфоцитов (Piccinllo С. A. and Shevach Е. М. 2001).

Способность T, t- лимфоцитов защищать организм от аутоиммунной агрессии может так же уменьшать интенсивность иммунного ответа против опухоли (Shimi/u J., 1999). Так прн иммунологическом исследовании больных нсмс/iкоклеточиым раком легких и раком яичинков было выявлено большое количество CD4'CD25* лимфоцитов, инфильтрирующих опухоль (Woo Е-V., 2001). Это может частично объяснять недостаточный клинический ответ прн вакцинотерапии рака на фоне увеличения популяции опухоль специфических CTL (Rosenberg S.A., 2001).

Тге (клетки с фенотипом CD4*CD25*FoxP3″. способные угнетать как пролиферацию так и эффекторную функцию иммунных клеток, были выявлены в лимфатических узлах больных меланомой (Viguicr М., 2004). В одной нз последних работ Ahmad/atleh М. and Rosenberg S.A. (2006) показано, что У больных диссемннированной меланомой и раком почки на фоне лечения IL-2 наблюдалось увеличение популяции COCCD251″ лимфоцитов периферической кровн, эксирсссируюшнх РохРЗ антиген.

Liyanage U.K. с созвт, (2002) показали, что количество CD4"CD25″ Т, ч лимфоцитов в периферической кровн больных раком молочной железы и раком поджелудочной железы выше, чем у здоровых доноров. Эта популяция клеток также инфильтрировала опухоль и регионарные лимфоузлы. Сскретнруемыс Т1с< цитокнны (IL-I0 н TGF-J3) предотвращали активацию н пролиферацию CD4'CD25~ н CD8' лимфоцитов.

Различают два типа CD4*CD25″ Т^, — натуральные (пТЯ1) тимнческого происхождения и активированные или индуцированные в периферии (iT,^ нз CD4'CD2S" лимфоцитов. Помимо CD25 антигена пТ^, репрессируют 27

CTLA-4, GlTR и FokP3 белки, хотя ни один из них не является отличительным маркером. Для активации этой популяции клеток не нужны косткмулнрующие молекулы, им достаточно активации TC’R (Chauopadhyay S" 2005- Jonutcil Н-, 2004- Takahashi Т., 2000).

Несмотря на то, что в последнее время много внимания уделяется изучению популяции CD4'CD25* клеток, механизм нх действия мало изучен. Показано, что iTlt|f лимфоциты действуют преимущественно через секрецию цнтокннов — IL-10 и TGF-|J (Levings М.К., 2002). Однако помимо действия через растворимые факторы CD4TD25″ Т^, способны действовать через контакт-зависимый механизм (Thronton A.M., 2004- Suri-Payer E., 2001).

Известно, что большинство! ЧК клеток и CTL секретируют Гран зим В -молекулу (Lord S. J" 2003), которая в основном отвечает за индукцию апоптоза в клетках-мишенях. Недавно было показано, что человеческие CD4* клетки также способны синтезировать гранэим В (Leeuwen Е.М.М., 2004). Более того, исследования Grossman W. J, с соавт. (2005) продемонстрировали, что гранзим В увеличивается в активированных Т клетках человека с фенотипом Тг1. Исследования контакт-зависимого механизма супрессии CD4"CD25' Т, проводимые Gondek D.C. с соавт. (2005) установили, что в течение активации TltT клетки быстро увеличивают содержание грамзимл В, тогда как уровень гранзима, А и перфорина в них остается низким

Популяция CDS*CD28~CDlib*" Trei лимфоцитов.

Для CD8″ популяции TIfI клеток характерно отсутствие экспрессии молекул CD28 (Liu Z., 1998- Colovai АЛ. 2001) Исследование этих клеток в различных системах показало, что онн обладают рядом ингнбирующнх эффектов: угнетение пролиферации CD4″ Т лимфоцитов, стимулированных аллогеннымн клетками- угнетение рецепторов, связанных преимущественно с активацией клеток (рецепторы IL-2 и трансфернна) — подавление экспрессии костнмулнрующих молекул АПК, что препятствует их оптимальному взаимодействию с CD41 Т лимфоцитами и др.

Популяция CD8* лимфоцитов, лишенная экспрессии CD2S (и CD fib) антигена способна угнетать иммунный ответ путем прямого взаимодействия с дендритными клетками (Chang. С.С., 2002). Считается, что CD8* Т,^ сгимулнруют ингибирующие Ig подобные транскрипционные рецепторы (1LT3 и ILT4) на поверхности DC. Совместное культивирование DC и CDITCD28″ клеток приводило к уменьшению способности АПК индуцировать Т клеточный иммунный ответ, так как предотвращало появление достаточного, для активации CD4″ лимфоцитов, количества костнмулнрующих молекул на поверхности дендритных клеток. Исследования Najafian N. с соавт. (2003) in vitro показали, что CD8*CD28″ клетки, а не CD8"CD28' лимфоциты способны угнетать синтез IFN-y в CD4* лимфоцитах. Однако нх супрессорное действие требует межклеточного контакта и зависит от присутствия АПК. Так на мьниннон модели было показано, что в отсутствии DC CD8*CD28' Тяр! клетки не способны угнетать синтез FFN’Y в CD4″ лимфоцитах.

Популяции NK Т лимфоцитов.

Натуральные киллерные Т лимфоциты представляют собой гетерогенную популяцию и наряд)' с экспрессией рецептора естественных киллеров имеют инвариантную цепь Т клеточного рецептора (Va24JaQT). В настоящее время стало известно, что существуют клоны NK Т лимфоциты, экспрессирующне CD4 или CDS антигены (Wilson М. Т, 2002, Saikh К. У, 2002).

Одна из особенностей популяции NK Т клеток заключается в нх способности распознавать гликолнпндные и фосфолнпндныс антигены, с которыми они связываются благодаря молекулам МНС I типа CD Id (Bnnkiewicz R.R. and Sriram V., 2002). Экспрессия CD Id антигена позволяет

29 этой субпопуляции лимфоцитов проявлять интотоксическую активность против опухолевых клеток. Наличие на мембране последних гликолиннда а-GalCer (а-galactosyl ccramidcj делает их мишенью для CD Id рестркктнрованных NK Т клеток (Kawano Т., 1999- Carnaud С., t999). Большинство CDld' NK Т лимфоцитов имеет CD4' или CD4 CDS' фенотип и обладает способностью уничтожать различные опухолевые клетки как ш vhro, так и in vivo (Ebcrl G, 1999),

Несмотря на убедительность фактов о роли NK Т лимфоцитов в элиминации опухолевых клеток, этот механизм не во всех случаях является основным, даже при условии активации NK Т клеток a~GalCcr Показано, что даже активированные NK Т лимфоциты не проявляют цнтотоксической активности против некоторых опухолей, а, напротив, защищают злокачественные клетки (Smyth Ш& bdquo- 2002-а, 2002−6).

Novak J. с соавт. {2005) показали, что добавленный в культуру а-галактосерик усиливает ннгнбируюшнй эффект NK Т лимфоцитов на Т клеточную пролиферацию и продукцию цнтокинов, которая, а условиях отсутствия о-галактосернна оставалась на фоновом уровне. При этом авторы замечают, что популяция NK Т клеток способна угнетать дифференцнровку т лимфоцитов в отсутствии секреции цнтокинов IL-4, IL-10, IL-13 и TGF-j}.

NK Т клетки — мошны? регуляторные Т лимфоциты, способные прелотврашать развитие аутоиммунных заболеваний (Mars L.T., 2004). Секретнруемый NK Т лимфоцитами IL-4 способен переключать иммунный ответ с Th! на Th2 типа fSingh А.К., 2001). Следует отметить, что NK Т предупреждают деструкцию собственной ткани, включая опухолевую ткань, путем угнетения Th I типа ответа (Smyth M.J. and Godfrey D.I., 2000). Блока-& raquo- CDS ответа на опухолевые клетки зависит от секреции IL-13 NK Т клетками и от продукции TGF-P гранул о цнтамн (ТегаЬе М., 2003). Еще одним проявлением регуляторной функции NK Т лимфоцитов является их способность включаться в защиту от чрезмерной стимуляции различными антигенами путем цитолиза антигеи-прсэснтнрующнх клеток, в частности 30 дендритных клеток (NrJtoJ А., 2000), Показано, что при стрессе увеличивается количество и NK и NK Т лимфоцитов, однако его супрессируюшее влияние проявляется только в отношении NK клеток, что свидетельствует о том, что в отаст на стресс NK и NK Т лимфоциты включают различные механизмы (Оуа Н., 2000). Так Miyaji С., с соавт. (2002) при исследовании этих субпопуляций в печени показали, что в основном цитотоксичность NK клеток обусловлена перфорином, a NK Т — FasL,

Таким образом, исследования последних лет убедительно демонстрируют, что разработка современных подходов вакцинотерапии злокачественных новообразований является актуальным направлением в онкологии. По этому на сегодняшний день важным является разработка адекватного нммуномониюрннга проводимой вакцинотерапии — поиск иммунологических маркеров эффективности проводимой терапии и факторов неблагоприятного прогноза.

ЧАСТЬ П. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Выводы

1. Уровень экспрессии перфорина в NK клетках коррелирует с нх цитотоксической активностью. Количество перфорина в популяциях эффекторных лимфоцитов с фенотипом CD8+CD)6 CDI6'CD8 и CDI6*CDB* является маркером нх цмтотоксического потенциала.

2. На фоне вакцинотерапии у больных в стадии стабилизации заболевания и у пациентов без признаков заболевания перфорин экспресс ируют как CD8"CD16 так CD16'CD8~ субпопуляцни лимфоцитов. У пациентов с прогрессировал нем основною заболевания зафиксировано уменьшение количества перфорнн-содержащих CD8*CD16~ н/или CDI6*CD8 лимфоцитов.

3. У онкологических больных в процессе вакцинотерапии выявляется популяция клеток с фенотипом CDI6'CB8 составляющая от 3% до 26% лимфоцитов периферической крови. Увеличение этой популяции свыше 10% характерно для больных с прогрессированнем основного заболевания.

4. Увеличение популяции регуляторных Т лимфоцитов с фенотипом CnM’GrartiEyme В& quot- (> 10%) в процессе вакцинотерапии обнаружено у онкологических больных с диагнозом меланома и рак почки с прогресснрованнем основного заболевания,

5. У больных с диагнозом меланома характерно увеличение популяции регуляторных Т лимфоцитов с фенотипом CD8*CDl lb CD28 (> 10%) при прогресс ированин основного заболевания на фоне проводимой вакцинотерапии.

6. У больных с диагнозом рак почки при прогрессировал ин основного заболевания на фоне вакцинотерапии было выявлено: а. появление популяции CD3~CD8+ лимфоцитов- h уменьшение популяции CD50″ лимфоцитов, 142

Заключение

Использование иммунотерапии невозможна без мониторинга иммунологических показателей. Данное исследование было посвящено поиску иммунофенотипнчсских маркеров эффективности проводимой вакцинотерапии. В ходе исследования были выявлены субпопуляини, увеличение или уменьшение которых коррелировало с прогресеированием основного заболевания, а гак же субпопуляции, свидетельствующие об эффективности вакцинотерапии. Сводные данные представлены в таблице № 6.

ПоказатьСвернуть

Содержание

Список сокращений. .-. ««--.

Введение. ,&bdquo-.,. »-.

Часть I.

Обзор литературы.,. ,&bdquo-.,.,.

Механизмы нарушения нормального функционирования клеток иммунной системы у онкологических больных.,. ,&bdquo-

Клиническое применение вакцин на основе дендритных клеток.

Иммуномониторинг.

Характеристика основных субпонуляцнй лнмфоцмюв периферической крови.к. «.

Часть II. Собственные исследования

Глава I. Материалы н иетолы исследования

Глава 2. Результаты собственных исследований

2.1 Иммунофенотнп лимфоцитов доноров. «-. «-.

2.2 Иммуиофенотнп лимфоцитов больных с диагнозом мсланома,.

2.2.1 Исследование нммунофенотнпа лимфоцитов больных мсланомой без клинических признаков заболевайия.

2.2.2 Исследование нммунофенотнпа лимфоцитов больных меланомой с распространенной стадией заболевания.

2.3 Иммунофенотин лимфоцитов больных С диагнозом рак почки. «-.

Список литературы

1. Ван ден Ээртвег А.Д.М., Шепер р, Д. Пннедо Г. М. Специфическая иммунотерапия в онкологии: вызов следующему тысячелентию // Санкт-Петербург, 1999 — Материалы третьей ежегодной Российской онкологической конференции, — 29ноября-1 декабря.

2. Головнзнн M B Вмешательство раковых клеток в процессы созревания и селекции Т-лимфоцктов как фактор опухолевой гтрогрсссни // Иммунология. -2001.6. -С. 4−10,

3. Имятинков Е. Н. Эпидемиология и биология опухолей почки// Практическая онкология- 2005. — Т, 6. — №. 3. — С. 173−140,

4. Кадагндзе З Т., Городнлова В, В. н Куницына Т. А. Учебно-методическое пособие по клинической онкоиммунологии// Саратов, 1988. — С. 3−25.

5. Кадвгндзе З. Г., Черткова А, И. и Славнна Е. Г Иммунорегуляторные CD25+CD4* клеткн И Биотерапевтический Журнал. 2005. — №. 2. — С. 13−21

6. Носов Д. А. Клинические проявления, диагностика к сталирован не рака паренхимы почки // Практическая онкология. 2005. — Т. 6. — №. 3. — С. 148 155.

7. Офицеров В. И Лечебные вакцины И Вектор-Брест 2000. -№- 3 ()7). — С, 3−5.

8. Хантов P.M. к Алексеев Л. П. Система генов HLA и регуляция иммунного ответа // Аллерг. астма и клин, иммунология. 2002. — 8. — С, 7−16-П. Ярилин А, А. Основы иммунологии It Москва. — Медицина — 1999. — С. 289 310.

9. Appay V. Zaunders JJ" Papagno et al, Characterization of CD4 (+) CFLs ex vivo //J. Immunol, 2002. — Vol. 168. — P. 5954−5958,

10. Arcns R., Baars P.A., Jar M, et al Cutting Edge: CD95 maintains effector T cell homeostasis in chronic immune activation// J. of Immunol. 2005, — Vot. 174. — P 5915−5920,

11. Atkinson Б.А., Вшу M., Derroon A.J., el al. Cytotoxic T lymphociie-assisied suicide. Caspase 3 activation is primarily the result of the direct action of granzyme В // J. Biol. Chem, 1998 — Vol. 273- - N. 33. — P 21 261 -2 1 266.

12. Avjgan D, Dendritic cell-tumor fusion vaccines for renal cell carcinoma И Clin. Cancer Research. 2004. — VoL 10. — N. 15. — P. 6347−6352,

13. Bade В., Boettcher H E. Lohrmann 1, et a. Differential expression of the granzymes А, К and M and perforin in human peripheral blood lymphocytes H International Immunology. 2005. — Vol, 17, — N. II — P. 1419−1428.

14. Baecher-Allan С, Brown J.A., Freeman GJ. and НаПег D A. CP4TCD25hB'' regulatory cells in human peripheral blood // J. Immunol. 2001. — Vol. 167. — P 1245−1253.

15. Baeeher-Allan C." Vjglietta V and Haflcr D A. Human CD4+CD25r regulatory T cells/(Semin. Immunol. 2004. — Vol. 16. — P, 89−98,

16. Banehereau J. and Steinman K M, Dendritic celts and the control of immunity // Nature. 1998. — Vol. 392. -P. 245−257.

17. Baumgarth N. Л two-phase model of B-celts activation // Immunol. Rev. 2000--Vol. 176. -P. 171−180.

18. Bergcr A. Science commentary" Thl and Th2 responses: what are they? // BMJ. -2000 -Vol. 321. -P. 424.

19. Brutkiewicz R.R. and Sriram V. Natural killer T NKT cells and their role in antitumor immunity U Crit. Rev. Oncol. Hematol. 2002 — Vol. 41. — N. 3. — P, 287−298.

20. Camaud C,. Lee D, Donnards O. et al. Cutting edge: Cross-talk between cells of the innate immune system: NKT-cells rapidly activate NK cells 1/ J. Immunol. -1999. Vol. 163. — P 4647−4650.

21. Chang C. C, Tolerizalion of dendritic cells by T (S) cells: the crucial role of inhibitory receptors JLT3 and ILT4 H Nat. Immunol. 2002. — Vol. 3. — P. 237 243.

22. Danson S. and l. origan P. Melanoma vaccines the should work // Annals of Oncol. — 2006. — Vol, 17. -p. 539−541.

23. De Vries I, J.M. Lestertiuis W, J" Scharenborg N.M. et all Maturation of Dendritic Cells Is a Prerequisite for Inducing Immune Responses En Advanced Melanoma Patients //Clinical Cancer Research. 2003, — Vol. 9. — N. I. — P. 509|-5100.

24. Deaglio S" Zubiaur M., Gregormi A, et al. Human CD38 and CD 16 arc functionally dependent and physieaUy associated in natural killer cells// Blood -2002. Vol. 99. — P. 2490−2498.

25. Dhodapkar M.V., R.M. Steinman J., Krasovsky C. et al. Antigcn-spceillc inhibition of effector T cell function in humans after injection of immature dendritic cells tl J, Exp. Med 2001. — Vol. 193 — P. 233−238,

26. Dieckmann. D,(Plottner H., Berchtold S., et at. Ex vivo isolation and characterization of CD4'CD25' T cells with regulatory properties from human blood // J. Exp Med. 2001. — Vol. 193. ~ P. 1303−1313.

27. Dunne J., Lynch S., O’Farrelly C. et al. Selective expansion and partial activation of human NK cells and NK receptor-positive T-cetls by IL-2 and IL-15 // J Immunol. -2001. -Vol. 167. -N- 6 P. 3129−3138.

28. Eberl G. Tissue-specific segregation of CD Id-dependent and CD Id-independent NK T eel Is // J. Immunol 1999, — Vol 162. — P 6410−6419.

29. Eggert A-. Grower M.A., ZuZak TJ. ct aL Expression of APO-3L m primitive neuroectodermal tumorous of the central and peripheral nervous system U Eur. J. Cancer. 2002. — Vol. 38. -N. l. -P. 92−98.

30. Espinoza-Delgado t. Cancer Vaccines II Oncologist. 2002. — Vol. 7. — N. 13. -P. 20−33.

31. Feriazzo G. and Munz C. NK cells compartments and their activation by dendritic cells Hi. Immunol. 2004. — Vol. 8. — P. 1333-Ш9.

32. Fiorentini S., Licenziati S., Alessandri G. et al- CDllb Expression Identifies CD8'CD28″ T Lymphocytes with Phenotypc and Function of Both Naive/Memory and Effector Cells// J. Immunol. 2001. — Vol. 166. — P. 900−907.

33. Groscurth P. and Filgueira L. Killing Mechanisms of Cytotoxic T Lymphocytes H News Physiol. Sri. ^ 1998. Vol- 13. — N. — P.

34. Grossman W, J., Verbsky J, W" Tollefsen B, L. et al, Differential expression of granzymes A and В in human cytotoxic lymphocyte subsets and T regulatory cells // Blood, 2004. — Vol. 104. — P. 284*3−2848.

35. Hamblin T.J. CD38: what is it there for? // Blood. 2003- - Vol. 102. — N. 6. -P. 1939−1940.

36. Hcrnbcrg Mr Muhonen Т., Pyrhonen S, Can the CD47CD8* ratio predict the outcome of interferon-a therapy for renal cell carcinoma? // Annals of Oncology. -1997.- Vol, 8. -РЛ 1−77.

37. Hung K-, Hayashi R" Lafond-Walker A., et al The central role of CD4(+) T cells in the antitumor immune response H J. Exp. Med. ?998. -Vol. 188. — P. 23 572 368.

38. Jiang H- and Chess L. An integrated view of suppressor T cells subsets in immunoregulation // J, Clin. Investigation. 2004. — Vol. 114. — N. 9. — P. 11 981 208.

39. Johnson H., Scorrano L" Korsmeyer S.J. and Ley TJ. Cell death induced by granzyme С // Blood. 2002. — Vol, 101. — N. 8. — P. 3093−3101.

40. Jonuleit II. Schmitt В., Stassen M, el at. Identification and functional characterization of human CD4 (+) CD25 (+) T cells with regulatory properties isolated from peripheral blood И J. Exp. Med. 2001. — Vol. 193. — P. 1285−1294.

41. Kane L P., Andres P.G., Howland К С., et al. Akt provides the CD28 costimulatory signal for up-regulation of IL-2 and IFN-y but not Th2 cytokines // Immunol. Nature. 2001. — Vol. 2. — N. I. — P. 37−44.

42. Sl. Kirkin A.F., Dzhandzhugazyan K.N., and Zeulhen J. Cancer/teslis antigens- structural and immunobiological properties H Cancer Invest, 2002. — Vol. 20. — P. 222−242.

43. Kogawa K, Lee S.M., Vilfanueva J. et al. Perforin expression in cytotoxic lymphocytes from patients with hcmophagocytic lymphohistiocyiosis and their family members // Blood. -2002. Vol. 99. — P 61−66.

44. Lenardo, M. Mature T lymphocyte apoptosis-immune regulation in a dynamic and unpredictable antigenic environment 11 Annu. Rev. Immunol. 1999. — Vol, 17. -P. 221−253,

45. Levings M, K, Bacchetta R., Schulz U. and Roncarolo M-G, The role of 1Ы0 and TGF beta in the differentiation end effector function of T regulatory cells U Int Arch Allergy Immunol. 2002. — Vol. 129. — P. 263−271.

46. Liu Z-. Tuguelea S., Cortesini R. and Suciu-Foca N. Specific suppression of alloreactivity by allo-MHC class I-restricted CD8*CD28~ T cells It Int- Immunol- -1998. Vol. 10. -N. 6, — P. 775−783.

47. Liyanage U.K., Moore Т Т., Joo EG- et al. Prevalence of Regulatory T Cells Is Increased in Peripheral Blood and Tumor Microenvironmenl of Patients with Pancreas or Breast Adenocarcinoma // J. Immunol, 2002. — Vol 169. — P. 27 562 761.

48. Ma J. Chen Т., Mandeiin J, et al. Regulation of macrophage activation H Cell Mol. Life. Sci. 2003. — Vol. 60. -N, II. — P. 2334−2346.

49. Marian! E., Marian! A. R., MetvegheUi A., el. al. Age-dependent decreases of NK cell phosphoinositide turnover during spontaneousbut not Fc-mediatcd cytolytic acti vity H International Immunology, 1998. — Vol. 10. — N. 7, -P 981−989.

50. Markovic-Plese S-, Cortese L, Wandinger K.P. et al. CD4*CD28~ costimulation-independent T cells in multiple sclerosis It J, Clin. Invest. 2001. — Vol. 108. — P. 1185−1194.

51. Mars L.T., Novak J., Liblau R.S. and Lehuen A. Terapeutic manipulation of iNKT cells in autoimmunity: modes of action and risks // Tends Immunol. 2004. -Vol. 25. -P. 471−482

52. Mariincz-Escribano JA. I Icmandez-Caselles Т., Campillo J.A. et al. Changes in the number of CD80+, CD86+, and CD28+ peripheral blood lympbocytes have prognostic value in melanoma patients // Hum. Immunol. 2003. — Vol, 64. — N. 8, -P. 796−801

53. MeIief C, JH Toes R.E., Medema J.P. and van der Burg S.H. Ossendorp F, Of& inga R. Strategies for immunotherapy of cancer// Adv Immunol. 2000. — Vol. 75. -P. 235−282.

54. Miyaji C, Miyakawa Y., Watanabe H. et al. Mechanisms underlying the activation of cytotoxic function mediated by hepatic lymphocytes following the administration of glycyrrhiztn // Int. Immunopharmacol. 2002, — Vol. 121. — N. 8. -P. 1079−1086.

55. Morton D, OHila D., Hsueh E, et al, Cytoreductive surgeiy and adjuvant immunotherapy: a new management paradigm for metastatic melanoma. С A Cancer Hi. Clin 1999 — Vol 49. -P. 101−116.

56. Munoz P., Navarro M C-, Pavon EJ. ct al. CD38 signaling in T cells is initiated within a subset of membrane rafts containing Eck and CD3-? subunit of the T cell antigen receptor H JBC. 2003. — Vol. 279. — N. 50. — P. 50 791−50 802.

57. Najafian N. Chitnis T- Salama A.D. et al. Regulatory functions of CD8*CD28~ T cells in an autoimmune disease model H J. Clin. Invest. 2003. -Vol. 112. -P. 1037−1048.

58. Namckawa T, Snyder M.R., Yen J.H., ct al. Kilter Cell Activating Receptors Function as Costimulatoiy Molecules on CD4, CD28,", T Cells Clonally Expanded in Rheumatoid Arthritis II J. Immunol. 2000. — Vol. 165. — P. 1 S3& -1145.

59. Nikot A, r Nieda M. Koezuka Y. ct al. Dendritic cells are targets for human mvaliant Va24+ natural killer T-cell cytotoxic activity: an important immune regulatory function H Exp, hematol. 2000, — Vot, 28. — N. 3. — P, 1897-. 904,

60. Novak JM Beaudoin L, Griseri T, and Lchuen A. Inhibition of T cell differentiation into effectors by NKT cells requires ceti contacts Hi. Immunol. -2005. Vol. 174. — P. 1954−1961.

61. Okano F. Merad M., Furumoto K. and Engleman E.G. In Vivo Manipulation of Dendritic Cells Overcomes Tolerance to Unmodified Tumor-Associated Self-Antigens and Induces Potent Antitumor Immunity It J. Immunol. 2005. — Vol. 174. — P. 2645−2652.

62. Orlinick JR. and Chao M.V. TNF-rclatcd tigands and their receptors // Cell. Signal. -1998. -Vol. tO. -N. I -P. 55−59.

63. Oya H., Kawamura T. Shimizu T. ct al. The differential effect of stress on natural killer T (NKT) and NK cell function // Clin. Exp. Immunol. 2000. — Vol. 121. -N. 2. -P. 384−390.

64. Pardoll D M. and Topalian S.L. The role of CD4 T cell responses in antitumor immunity // Cunr Opin Immunol, 1998, -Vol. 10. — P. 588−594.

65. PiecirilJo C. A. and Shevach E. M. Cutting edge: control of CD8* T cell activation by CD4'CD25″ immunoregulatory cells //J. Immunol, 2001, — Vol. 167--P, 1137−1147.

66. Poehtein C.H., Ни H.M., Yamada J et at. TNF plays an essential rote in tumor regression after adoptive transfer of perforinifIFN-gamma double knockout effector T-cellsIt}. Immunol, -2003. Vol. 170. — N. 4. — P. 2004−2013.

67. Price J.D. Schaumburg J., Sandin C" et al Induction of a Regulatory Phenotypc in Human CD4' T Cells by Streptococcal M Protein H J, Immunol -2005. Vol, 175. — P. 677−684.

68. Rca D. Kooten C., Meijgaarden K., ei al, Glucocorticoids transform CD40-triggering of dendritic cells into an alternative activation pathway resulting inantigen-presenting cells that secrete IL-10 H Blood. 2000. — Vol. 95- - P. 31 623 170.

69. Ribas A, Butterfield L., Glasby J, et al Current developments in cancer vaccines and cellular Immunotherapy // J. Clin. Oncol. 2003. — Vol. 21. — P. 24 152 432.

70. Rics GX.A. Reichman M-E-, Lewis D. R, el al. Cancer survival and incidence from the Surveillance, Epidemiology, and End Results (SEER) program if Oncologist. 2003. — Vol, 8, — P, 541−557,

71. Riley J, and June C.H. The CD28 family: a T-cell rheostat for therapeutic control of T-ell activation It Blood. 2005. — Vol. 105, — P, 13−21.

72. Rosenberg S.A. Progress in human tumor immunology and Immunotherapy t) Nature, 2001. — Vol. 411. — P. 380−388,

73. Rudensky A.Y. and Campbell D. J, In vivo sites and cellular mechanisms of Treg cell-mediated suppression // JEM, 2006, — Vol. 203. — N. 3. — P. 489−492.

74. Rukavina D., Lascarin G" Rubesa G, et al. Age-Related Decline Perforin Expression in Human Cytotoxic T Lymphocytes and Natural Killer Cells // Blood. -1998. Vol, 92. -N. 7. — P. 2410−2420.

75. Saikh K.U., Kissner T. and Urich R. G, Regulation of HLA-DR and co-stimulatory molecule expression on natural killer T-cells by granulocyte-macrophage colony-stimulating factor ff Immunology. 2002, — Vol. 106. — N. 3. -P. 363−372,

76. Saito T, Dworacki G, Gooding W. et al. Spontaneous apoptosis of CDS4 T lymphocytes in peripheral blood of patients with advanced melanoma // Clin, Cancer. Res, 2000. — Vol. 6. — P. 135Ы364.

77. Sakaguchi S. Naturally arising FoxP3-expressing CD25'CD4f regulatory T cells in tmmunologycal tolerance to self and non-self// Nat. Immunol. 2005. -Vol, 6, — P. 345−352.

78. Sandoval-Montes C. and Santos-Argumcdo L, CD38 is expressed selectively during the activation of a subset of mature T cells with reduced proliferation butimproved potential to produce cytokines U J, Leukos. Biol, 2005. -Vol, 77. -P. 513−521.

79. Sayers TJ. Brooks A. D, t Ward J. M, et al. The restricted expression of grartzyme M in human lymphocytes // Ibid. 2001. — Vol, 166. — P, 765−771.

80. Scheuring UJ., Sabzcvari H, and Thcofilopoulos A. N, Proliferative arrest and cell cycle regulation in CD8TD2T versus CD8'CD28* T celts // Hum. Immunol. -2002, Vol. 63. — N. II. — P. 1000−1009

81. Schirmer M., Vallejo A.N., Weyand C.M., and Goronzy J.). Resistance to apoptosis and elevated expression of Bcl-2 in clonally expanded CD4'CD28″ T cells from rheumatoid arthritis patients US. Immunol. -1998. Vol. 161. — P. 10 181 025.

82. Sharma K, Wang R.X., Zhang L.Y. et al Death the Fas way: regulation and pathophysiology of CD95 and its ligand tl Pharmacol. Ther 2000. — Vol. 88. — P. 333−347.

83. Shash A.H. and Lee C. TGF-^-based immunotherapy for cancer: breaching (he tumor firewall И Prostate 2000, — Vol. 45. — P. 167−172,

84. ShcvachE. M. Certified professionals: CD4'CD254 suppressor T cells U J. Exp. Med. -2001, Vol. 193. — P. 41−49.

85. Shimizu J., Yamazaki S. and Sakaguchi S. Induction of tumor immunity by removing CD2S*CD4*T cells: a common basis between tumor immunity and autotmmunity // J. Immunol. 1999. — Vol. 163. — P. 5211−5220.

86. П0 Siegel R M, Chan F KM. Chun H I. and Lcnardo MX The multlfacctcd ток of Fas signaling in immune cell homeostasis and Autoimmunity // Nat. Immunol, 2000. Vol 1. -N.6. -P. 469−474.

87. Smyth MJ- and Godfrey D.l. NKT celts and tumor immunity a double-edged sword// Nat. Immunol. — 2000. — Vol. I. — N. 6 — P 459−460.

88. Smyth M.J., Crowe N.Y., Nayakawa Y. et al. NKT-cells conductors of tumor immunity? // Curr. Oprn. Immunol. — 2002−6. — Vol. 14. — N. 2 — P. 165- J 71.

89. Smyth M.J., Crowe N Y,. Pcllici D. G, et al, Sequential production of interfcron-gamma by NK1. I (+) T-cells and natural kilter cells is essential for the antimctastatic effect of a-galactosylceramide // Blood. 2002-a- - Vol. 99. — N. 4. -P. 1259−1266.

90. Smyth MJ. Thia K.Y.T., Street SEA., et al. Differential Tumor Surveillance by Natural Killer (NK) and NKT Cells // Exp. Med, 2000. — Vol. 191. -N. 4. -P. 661−668,

91. Spaner D. Raju K., Radvanyi L-, et al. A Role for Perforin in Activation-Induced Celt Death // J. Immunol. 1998- - Vol. 160. — P. 2655−2664.

92. Stavetey-O'CarrolI K., Sotomayor E, Montgomery J. et af Induction of antigen-specific T cell anergy: an early event in the course of tumor progression // Proc. Nat. Acad, Set. USA. 1998. — Vol. 95. — P. H78−1183.

93. Steinbrink K., Jonuleit IIMutter G. et al. Interleukin-10-treated human dendritic cells induce a melanoma-antigen-specific anergy in CDS' T cells resulting in a failure to lyse tumor cells // Blood. 1999. — Vol. 93. — P, 1634−1642.

94. Steinman R. M, and Dhodapkar M. Active immunization against cancer with dendritic cells, the near future И Int J Cancer. 2001. — Vol. 94, — P, 459−73.

95. Sun-Payer E. and Cantor H- Differential cytokine requirements for regulation of autoimmune gastritis and colitis by CD4+CD25* T cells // J Autoimmun. 2001. -Vol, 16. -P. 115−121

96. Takahashi Т., Tagami Т., Yamazaki S., et al. Immunologic self-tote ranee maintained by CD25(+) CD4(+) regulatory' T cells constitutive!}' expressing cytotoxic T lymphocyte-associated antigen 4 // J Exp Med. 2000. — Vol. 192. — P. 303−310.

97. Terme M., Masurier C., Fernandez N., et al Rote of dendritic cells in the modulation of innate effectors of immunity // Pathol Biol. 2001. -Vol. 49. N. 6. — P, 475−477.

98. Thronton AM, Piclrillo C.A. Shcvach E M. Activation requirements for the induction of CD4'CD25r T cell suppressor function // Eur. J. Immunol. 2004. -Vol- 24. -P 366−373.

99. Toes R.E., Ossendorp F. Offringa R. and Melief С J. CD4 T cells and their role in antitumor immune responses // J Exp Med, 1999. — Vol, 189. — P. 753−756,

100. Topp M.S., Riddel. S. R-, Akatsuka Y. et at, Restoration of CD28 expression in CD28 CDS" memory effector T cells reconstitutes antigen-induced tL-2 production// J, Exp, Med 2003. — Vol. 198. — Ле. 6, — P. 947−955,

101. Uzzo R.G., Rayman P, Kolenko V. et al. Mechanisms of apoptosis in T cells from patients with renal cell carcinoma // Clin, Cancer Res. 1999. — Vol, 5, — P, 1219−1229.

102. Viguier M" Lemaire F" Verola A, el al. Foxp3 expressing CD4'CD25"4'1' regulatory T cells are overreprcsented in human metastatic melanoma lymph nodes and inhibit the function of infiltrating T celts H J Immunol 2004, — Vol. 173 — P 1444−1453.

103. Wallet M A., Sen p. and TL Immunoregulation of Dendritic Cells it Clinical Medicine & Research 2005, — Vol, 3--Ж 3. -P. 166−175.

104. Wang Т., Niu G., Kortytewski M. et al. Regulation of the innate and adaptive immune responses by Stat-3 signaling in tumor cells // Nat Med. 2004, — Vol. 10. -P, 48−54.

105. Watanabe M" Hara Y., Tanabe K, ct al. A distinct rote for ICOS-mcdiated co-stimulatoty signaling in CD4' and CDS" T celts subsets// Intern. Immunol -2005. Vol. 17. — №. 3. — P. 269−278.

106. Weber JS, JcfTcry G, Marty V, et al. A phase 1 trial of GPlOO/tyrosinase peptide-pulsed dendritic cells for metastatic melanoma // American Society of Clinical Oncology 35th Annual Meeting, Atlanta. 1999, — Abstract t664.

107. Whiteside T.L. and Rabinowich H. The role of Fas/FasL in immunosupression induced by human tumors // Cancer Immunol Immunother. -1998,-Vol, 46,-P, 175−184,

108. Wilson M, T" Singh A. JC and Van Kaer L. Immunotherapy with tigands of natural kiIler T-celIs// Trends Mol, Med, -2002. Vol. 8. -N. S. — P. 225−231.

109. Wing K., Ekmark A., Karlsson H, ct al. Characterisation of human CD25'CD4' T cells in thymus, cord and adult blood // J. Immunol. 2002. — Vol, 106. -P. 190−199.

110. Woo E, Y., Chu C. S, Goletz T, J, et al Regulatory CD4"CD25″ T cells in tumors from patients with early stage non-small cell lung cancer and tale-stage ovarian cancer H Cancer Res, 2001 — Vol. 61 — P. 4766−4772.

111. Wu J, and Lanier L. L, Natural killer cells and cancer //Adv Cancer Res. -2003. Vol. 90. — P, 127−136.

112. Yang S. and Haluska F.G. Treatment of melanoma with 5-fluorouracil or dacarbazine in vitro sensitizes cells to antigen-specific CTL lysis through Perforin/granzyme- and Fas-mediated pathways // J. Immunol. 2004, — Vol, 172. -P. 4599−460″,

113. Young K, and Zhang L The nature and mechanisms of DN regulatory T-Cell mediated suppression H Hum. Immunol. 2002. — Vol. 63. — P. 926−932.

114. Young К J., Du Temple B" Phillips MJ. and Zhang I, Inhibition of graft versus host disease by double negative regulatory T cells // J. Immunol. 2003. -Vol. 171. -P. 134−141.

115. Yu P., Lee Y., Liu W. et al. Intratumor depletion of CD4″ celts unmasks tumor immunogenicity leading to the rejection of laie-stagc tumors И J. Exp. Med. 2005, — Vol. 201. — P. 779−791.

116. Zhang D,. Beresford P.J., Greenberg A. H and Lieberman J. Immunology granzymes A and В directly cleave lamins and disrupt the nuclear lamina during granule-mediated cytolysis // Proc, Nat, Acad. Sri. USA 2001. — Vol. 98. — P. 5746−5 75 J. htM cfpr

Заполнить форму текущей работой