Физико-химические механизмы действия на тромбоциты хлораминовых производных биогенных соединений и гипохлорита натрия

Тип работы:
Диссертация
Предмет:
Биофизика
Страниц:
226


Узнать стоимость новой

Детальная информация о работе

Выдержка из работы

Изучение физико-химических механизмов модуляции активности клеток крови биогенными хлораминами и гипохлоритом натрия является актуальным по ряду причин.

Во-первых, хлорноватистая кислота (ионизированная форма — гипохлорит-анион) продуцируется в организме фагоцитирующими клетками в реакции, катализируемой миелопероксидазой. Как вторичные продукты этой реакции, при взаимодействии гипохлорита с биогенными аминами образуются хлораминовые производные аминокислот и родственных соединений [156, 248, 265]. Поскольку и гипохлорит и хлораминовые соединения могут образоваться в местах скопления активированных моноцитов-макрофагов или нейтрофилов в достаточно высоких количествах до 0,1 мМ [200], то кроме взаимодействия с чужеродными агентами, роль этих соединений в модификации самих нейтрофилов и других клеток крови представляется вполне реальной in vivo. Таким образом, в организме возможно межклеточное взаимодействие, заключающееся в изменении функций клеток крови под влиянием фагоцитов.

Механизм действия хлораминовых соединений и гипохлорита натрия на клетки крови мало изучен. Известно, что хлораминовые производные биогенных соединений по сравнению с гипохлоритом гораздо слабее модифицируют эритроциты и лейкоциты [125, 275]. В последнее время получены сведения о том, что N-монохлортаурин способен снижать образование тканеиовреждающих медиаторов воспаления макрофагами (оксида азота, альфа-фактора некроза опухоли, простагландина Е2), тем самым защищая ткани от повреждения [153, 194, 195]. Показано [103], что N-монохлортаурин способен ингибировать коллагеназу, причем этот эффект специфичен по отношению к N-монохлортаурину, так как хлораминовые производные аланина и лейцина не обладают таким свойством. Таким образом, N-монохлортаурин, снижая уровень медиаторов воспаления, повреждающих ткани, может выступать в качестве физиологического регулятора функций макрофагов.

К началу работы в литературе практически отсутствовали данные о молекулярно-клеточных механизмах действия гипохлорита и хлорамининовых соединений на тромбоциты.

Во-вторых, в последнее время гипохлорит натрия, получаемый электрохимическим способом, предложен Сергиенко В. И. с соавторами (19 851 996) как детоксицирующее средство при эндо- и экзотоксикозах, находит применение в клинике. При внутривенном введении гипохлорита натрия могут образовываться хлораминовые производные биогенных соединений. В связи с этим возникает необходимость изучения модифицирующего действия как гипохлорита, так и хлораминов на компоненты крови- это действие может выступать в качестве побочного эффекта.

В-третьих, важно, что биогенные хлорамины, как установлено нами, оказывают выраженное противоагрегационное действие на тромбоциты. Повышенная функциональная активность тромбоцитов играет ведущую роль в патогенезе артериальных тромбозов и синдрома диссеминированного внутрисосудисгого свертывания крови [1, 15, 16, 27, 56, 57, 277]. Для предотвращения и лечения таких состояний может требоваться генерализованное ингибирование тромбоцитов. Предотвращение активации тромбоцитов представляет интерес и с точки зрения усовершенствования способов хранения тромбоцитарного концентрата, так как известно, что его срок хранения в обычных условиях во многом ограничивается постепенной активацией клеток. Поэтому актуальной проблемой является поиск и разработка новых эффективных препаратов противогромбоцитарного типа действия. Хлораминовые производные биогенных соединений были предложены в качестве основы для разработки нового противотромбоцитарного средства. N-Хлораминокислоты, также как и ацетилсалициловая кислота (аспирин), химически модифицируют плазматическую мембрану тромбоцитов. Это ведет к генерализованному ингибированию функциональной активности тромбоцитов, то есть ингибированию их активации независимо от природы агониста.

Целью настоящей работы было выяснение молекулярно-клеточных основ модификации структуры и функций тромбоцитов биогенными хлораминами и гипохлоритом натрия- выявление свойств хлораминовых соединений, существенных для их использования в качестве противотромбоцитарного средства.

Работа состоит из 3 основных разделов, в первом из которых представлен обзор литературы. В нем содержатся данные по физико-химическим свойствам гипохлорита натрия и хлораминовых производных аминокислот. Также рассмотрены структура и функции тромбоцитов, механизмы их активации и агрегации, роль тромбоцитов в патогенезе сосудистых заболеваний. Во втором разделе представлены материалы и методы, использованные в работе. Далее идут 6 основных глав, содержащие экспериментальные результаты работы: проведено систематическое исследование молекулярно-клеточных механизмов действия гипохлорита и хлораминовых соединений на свойства тромбоцитов, изучены механизмы действия гипохлорита натрия и хлораминов на лейкоциты и эритроциты.

В результате проведенных исследований обнаружено явление ингибирования гипохлоритом натрия и хлораминовыми соединениями функциональных процессов в тромбоцитах, включая рецептор-зависимую агрегацию, секрецию плотных гранул, циклооксигеназную пероксидацию липидов. Получены сведения в пользу эффективного нарушения гипохлоритом системы внутриклеточной трансдукции сигнала в тромбоцитах. В результате проведенных исследований был установлен один из возможных первичных механизмов действия гипохлорита и хлораминов на клетки крови, а именно модификация поверхностных сульфгидрильных и аминогрупп мембран этих клеток.

Показано, что изменение функций тромбоцитов происходит в результате прямого взаимодействия гипохлорита с тромбоцитами и за счет модификаций компонентов плазмы. К числу этих компонентов относятся главным образом белки и аминокислоты. Обнаружено явление восстановления нативной плазмой функциональной активности тромбоцитов, инактивированных гипохлоритом натрия. Основным восстанавливающим компонентом является фибриноген.

Предложено использовать гипохлорит натрия с целью генерализованного подавления активности тромбоцитов в качестве консерванта при хранении тромбоцитарного концентрата.

Установлено, что ингибирование агрегационной способности тромбоцитов хлораминами не зависит от природы агониста, но при действии гипохлорита природа агониста существенна. Наибольшее ингибирование гипохлоритом наблюдается в случае агонистов ионов кальция и адреналина. Такой же результат получен при действии реагента на сульфгидрильные группы -дитионитробензойной кислоты. Возможно, что сильный эффект гипохлорита обусловлен модификацией тиолов кальциевых каналов.

Для выяснения взаимодействия гипохлорита и хлораминов с различными химическими группами определены относительные константы скорости реакции гипохлорита натрия с активными группами некоторых аминокислот и пептидов, а также проведена оценка эффективности взаимодействия Ы, Ы-дихлортаурина с серосодержащими соединениями. Получено, что наибольшая константа скорости характерна для реакции исследуемых соединний с сульфгидрильными группами.

Обнаружено, что действие хлораминов аминокислот на тромбоциты в составе обогащенной тромбоцитами плазмы зависит от их структуры, молекулярной массы. Соединения с пониженной молекулярной массой (N-хлорсерин, N-хлораланин, N-хлорглицин) оказывают более сильный противоагрегационный эффект, чем соединения с повышенной молекулярной массой (от N-хлорфенилаланина до N-хлотреонина). Вероятно, соединения с пониженной молекулярной массой взаимодействуют с химическими группами в углублениях мембран тромбоцитов, куда ограничен доступ более крупных молекул.

Показано, что в качестве возможного противотромбоцитарного средства перспективен М, К-дихлортаурин. Он получен в твердом состоянии, характеризутся высокой стабильностью. N. N-Дихлортаурип оказывает генерализованное противотромбоцитное действие: угнетает агрегационную акивность тромбоцитов и секрецию плотных гранул, вызывает дезагрегацию агрегированных тромбоцитов. На кроликах in vivo показано, что 1Ч, М-дихлортаурин оказывает выраженное угнетение агрегационной активности тромбоцитов в тесте с рядом таких агонистов, как коллаген, АДФ, адреналин. Показано, что 1Ч, Тч1-дихлортаурин и общепринятые антитромбоцитарные препараты аспирин и тиклопидин при введении в кровь человека одинаково эффективно подавляют агрегацию

11 тромбоцитов. При введении ]Ч, 1Ч-дихлортаурина в цельную кровь человека значительное ингибирование агрегации тромбоцитов не сопровождается заметным повреждением эритроцитов.

Представляемая работа выполнялась в лаборатории физико-химических методов исследования и анализа отдела биофизики (руководитель отдела -академик РАМН, профессор Владимиров Ю.А.) в НИИ физико-химической медицины (директор — академик РАМН, профессор Лопухин Ю.М.). Часть исследования была проведена на кафедре биофизики Российского государственного медицинского университета.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ВЫВОДЫ

1. Гипохлорит натрия ингибирует функциональные процессы в тромбоцитах: начальную агрегацию (образование мелких агрегатов), обнаруживаемую нефелометрическим методом, конечную агрегацию, реакцию выброса цитоплазматических гранул, контролируемую по выходу акридинового оранжевого, циклооксигеназную пероксидацию липидов.

В изолированных клетках ингибирование процессов на 50% наступает при концентрациях гипохлорита от 10 до 40 мкМ в зависимости от вида процесса и природы агониста. В интервале небольших концентраций гипохлорита натрия начальная агрегация, реакция выброса и циклооксигеназная пероксидация липидов в тромбоцитах ингибируются сильнее конечной агрегации.

2. В случае обогащенной тромбоцитами плазмы (ОТП) агрегация тромбоцитов ингибируется гипохлоритом натрия в концентрациях 1−2 мМ. При этом гипохлорит не оказывает влияния, судя по турбидиметрическим показателям, на форму исходных клеток и процесс перехода клеток из дискоидной в сфероидную форму при их активации. Экзогенные аминокислоты и таурин вызывают необычный эффект: антиагрегационное действие гипохлорита резко усиливается.

3. В ОТП антиагрегационное действие гипохлорита носит преимущественно косвенный характер — обусловлено первичной модификацией компонентов плазмы. Предварительно модифицированные гипохлоритом плазма, сывороточный альбумин, фибриноген ослабляют агрегацию изолированных тромбоцитов.

Нативная плазма и фибриноген восстанавливают агрегационную способность тромбоцитов, модифицированных гипохлоритом.

4. Обнаружено сильное антиагрегационное действие на тромбоциты в изолированном состоянии и ОТП хлораминовых производных аминокислот и родственных им соединений. Образование хлораминов обусловливает усиление действия гипохлорита на тромбоциты в ОТП экзогенными аминокислотами. N-Хлораминокислоты также ингибируют реакцию выброса АТФ из тромбоцитов.

5. Антиагрегационное действие N-хлораминокислот на тромбоциты проявляется при их активации различными агонистами (АДФ, коллагеном, адреналином, тромбином), то есть носит генерализованный характер. Для ингибирования агрегации изолированных клеток на 50% требуется концентрация хлораминокислот 20−30 мкМ, а в случае ОТП и наиболее эффективных соединений

— около 0,5 мМ.

Степень подавления N-хлорглицином и N-хлорлейцином АДФ-индуцируемой агрегации тромбоцитов описывается степенной функцией от концентрации хлораминов- показатель степени близок к двум. Вероятно, необходимы по крайней мере две модификации мембраны тромбоцита для угнетения его агрегационной активности.

Транспорт флуоресцентного зонда акридинового оранжевого в цитоплазмагические гранулы тромбоцитов не ингибируется N-хлораминокислотами. Можно предполагать, что хлорамины в исследуемых условиях существенно не проникают внутрь тромбоцитов.

6. Ингибирование агрегации тромбоцитов зависит от строения и физико-химических характеристик (молекулярной массы, ван-дер-ваальсового объема молекулы) N-хлораминокислот. В обогащенной тромбоцитами плазме антиагрегационный эффект в ряду: N-хлортреонин — N-хлорсерин — N-хлораланин

— N-хлорглицин, резко возрастает с уменьшением молекулярной массы. Это, вероятно, обусловлено их взаимодействием с химическими группами, находящимися в узком кармане тромбоцитов. Зависимость ингибирующего действия соединений указанного ряда от молекулярной массы (т) эмпирически описывается формулой вида /я (АТк /AT) = G ехр (-1т), где АТК и AT — степень агрегации в контроле и опыте, a G и / - константы- / > 0.

N-Хлораминокислоты с повышенной молекулярной массой от N-хлорфенилаланина до N-хлорлейцина включительно (198,5−164,5 дальтон- ван-деру ваальсовый объем 0,169−0,151 нм) оказывают одинаковое и пониженное антиагрегационное действие на тромбоциты.

7. При сравнении антиагрегационной активности соединений с различным расположением хлораминовой группы в молекуле показано, что более эффективны хлорамины с удаленной от карбоксильной хлораминовой группой (на 3−5 атомов углерода). Можно предположить наличие отрицательного заряженной группы в месте взаимодействия хлораминов с мембраной тромбоцитов.

8. В цельной крови все исследуемые N-хлораминокислоты, за исключением N-хлорфенилаланина, оказывают приблизительно одинаковый антиагрегационный эффект на тромбоциты. Наблюдаемое при этом ослабление действия N-хлораминокислот с пониженной молекулярной массой обусловлено их большей реакционной способностью по отношению к эритроцитам- взаимодействие с лейкоцитами не существенно.

9. Данные по ингибирующему действию ряда аминокислот и пептидов на окисление билирубина или иодида калия показывают, что наиболее эффективно с гипохлоритом натрия и хлораминами взаимодействуют сульфгидрильные группы. Соотношение констант скоростей реакции гипохлорита с активными химическими группами восстановленного глутатиона, окисленного глутатиона, аланина и серина, оцененное на основании интегральных кинетических формул, приближенно составляет соответственно 48: 6,9: 5,5: 2,4.

Взаимодействие гипохлорита и N, N-дихлортаурина с серосодержащими группами осуществляется по различным механизмам. С одной тиометильной группой метионина, с сульфгидрильной или дисульфидной группой глутатиона в расчете на активный хлор реагируют соответственно 3,3±0.1. 3,1±0,1, 6,0±0.1 молекул гипохлорита, тогда как в случае N. N-д ихл ортаур и на — соответственно 1,4±0,1, 2,6±0,2, 4,1±0,2 хлораминовых групп.

10. В плазматической мембране тромбоцитов уже при низких концентрациях гипохлорита натрия (менее 20 мкМ) наблюдается заметное разрушение периферийных сульфгидрильных групп. Аминогруппы плазматической мембраны тромбоцитов, как установлено с помощью флуоресцентной метки флуорескамина, также модифицируются при действии гипохлорита. Одинаковая с сульфгидрильными группами степень модификации аминогрупп проявляется при концентрациях гипохлорита примерно в два раза более высоких. Можно полагать, что функциональное действие гипохлорита сопряжено с модификацией мембранных тиолов и аминогрупп, причем первые наиболее существенны при его малых концентрациях.

11. N-Хлораминокислоты при введении в кровь проявляют значительную избирательность действия на тромбоциты. Это следует из результатов сравнения

199 величин концентраций хлораминов, вызывающих 50% ингибирование агрегации тромбоцитов в изолированном состоянии и крови.

В крови хлорамины в концентрациях, приводящих к подавлению агрегации тромбоцитов на 50%, не вызывают существенной модификации эритроцитов по критерию их гемолиза за период примерно 10 часов и агрегации. Гемолитическое повреждение эритроцитов вызывается хлораминами в количествах, на 2−3 порядка выше необходимых для угнетения агрегации тромбоцитов.

12. Впервые получен Н> 1-дихлортаурин в виде твердого стабильного препарата. Показана его антитромбоцитарная активность при введении in vitro в кровь человека, in vitro и in vivo на животных. Существует перспектива использования N, N — д и хл opi ay ри на как антитромбоцитарного средства.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Гипохлорит натрия оказывает свое действие на клетки крови в концентрациях 1−100 мкМ. Встает вопрос, насколько эти концентрации соизмеримы с концентрациями гипохлорита, образующимися при активации нейтрофилов. По данным Slivka [240], стимулированные форболмеристатом нейтрофилы (2 105 клеток) могут синтезировать около 10 наномолей хлорноватистой кислоты, и в очаге воспаления концентрация гипохлорита может достигать 0,1 мМ [200]. Интересно отметить, что в клинической практике используется 0,8 мМ раствор гипохлорита натрия при его введении в кровь в объеме, не превышающем 1/10 объема циркулирующей крови. Таким образом, используемые нами концентрации гипохлорита натрия являются вполне физиологическими.

При изучении действия гипохлорита на изолированные тромбоциты, было показано, что в концентрациях 10−100 мкМ гипохлорит натрия ингибирует агрегацию, реакцию выброса и циклооксигеназную пероксидацию в этих клетках, индуцированные тромбином. Наблюдалось различие в действии низких (около 10 мкМ) и высоких концентраций гипохлорита: циклооксигеназная пероксидация и реакция выброса в тромбоцитах ингибировались гипохлоритом натрия в концентрации 10 мкМ гораздо сильнее, чем их агрегация. Получено, что константа скорости реакции гипохлорита с сульфгидрильной группой примерно на порядок выше константы скорости реакции с аминогруппой. Возможно, для низких концентраций начальным этапом действия гипохлорита может быть некоторая модификация мембран клеток вследствие его взаимодействия с поверхностными сульфгидрильными группами, в результате чего происходит изменение механизмов внутриклеточной передачи сигнала. При увеличении концентрации гипохлорита его ингибирующее действие, по-видимому, связано с более существенной перестройкой мембраны, вследствие чего может происходить инактивация поверхностных рецепторов. При увеличении концентрации гипохлорита натрия функциональные процессы в тромбоцитах (агрегация и реакция выброса) ингибировались сходным образом. Существенную роль в подобной инактивации может играть модификация под действием гипохлорита доступных периферических сульфгидрильных и аминогрупп. Получено, что при действии гипохлорита (40 мкМ) происходит модификация примерно 40 и 15% соответственно периферических сульфгидрильных и аминогрупп тромбоцитов.

Кроме прямого ингибирующего действия на тромбоциты гипохлорит оказывает косвенное действие — через модификацию компонентов плазмы. Было показано, что сывороточный альбумин, фибриноген и аланин, модифицированные гипохлоритом натрия, ослабляют агрегацию тромбоцитов, индуцированную тромбином. Это свидетельствует о том, что косвенное антиагрегационное действие гипохлорита натрия при его введении в обогащенную тромбоцитами плазму является результатом первоначальной модификации многих белков и аминокислот. В случае соединений, содержащих аминогруппы, эта модификация представляет собой образование хлораминовой группы. Именно эти группы существенны для антиагрегационных свойств модифицированных белков и аминокислот.

Нативная плазма и фибриноген эффективно устраняют модификации тромбоцитов, возникающие при прямом действии гипохлорита. Все это позволяет считать, что прямое действие гипохлорита натрия на тромбоцит ы сопряжено с его взаимодействием с плазматической мембраной, а не с компонентами цитоплазмы. В данных, касающихся участия фибриногена в косвенном действии гипохлорита и восстановлении модифицированных тромбоцитов, можно усмотреть некоторое противоречие. Допустим, что восстановление модифицированных тромбоцитов (Тц*) происходит в химической реакции с образованием модифицированного фибриногена (ФГ*). Но такой модифицированный фибриноген инакгивирует клетки. Противоречие снимается, если рассматриваемые процессы являются взаимно обратимыми, по схеме:

Тц* + ФГ^Тц + ФГ* Здесь Тц и ФГ — нативные тромбоциты и фибриноген.

В опытах с восстановлением равновесие сдвинуто вправо вследствие высокой концентрации нативного фибриногена. Антиагрегационное действие предварительно модифицированного фибриногена проявляется за счет сдвига равновесия влево. Конечно, не исключено, что процессы восстановления и инактивации тромбоцитов с участием фибриногена различны по физикохимической природе. Тогда они могут и не быть взаимно обратимыми. Как бы то ни было, важно, что в изученной системе наблюдается восстановление плазмой инактивированных тромбоцитов и дальнейшее изучение этой системы будет полезно для разработки способов хранения тромбоцитарной массы.

Согласно полученным результатам, хлораминовые производные аминокислот обладают сильным антиагрегационным действием на тромбоциты в составе ОТП в концентрациях 0,5−1 мМ. Эффект ингибирования агрегации тромбоцитов N-хлораминокислотами зависит от молекулярной массы (молекулярного объема) этих соединений. Хлораминовые производные фенилаланина, глютамина и лейцина, имеющие значительную молекулярную массу (199,45−153,45 Да) и, соответственно, большой молекулярный ван-дер-ваальсовый объем (0,169−0,151 нм3), оказывают приблизительно одинаковый антиагрегационный эффект. Это может быть результатом того, что данные соединения взаимодействуют одновременно с однотипными химическими группами тромбоцитов и компонентов плазмы. Антиагрегационный эффект других N-хлораминокислот резко возрастает с уменьшением молекулярной массы соединений. Более сильное ингибирующее действие N-хлораминокислот с пониженной молекулярной массой (вторая группа) можно объяснить их взаимодействием с химическими группами в плазматической мембране тромбоцита, стерически недоступными для соединений с повышенной молекулярной массой.

Зависимость антиагрегационного эффекта N-хлораминокислот второй группы от их молекулярной массы аппроксимируется уравнением, в котором отношение константы скорости реакции N-хлораминокислоты с тромбоцитами к константе ее взаимодействия с плазмой увеличивается с уменьшением молекулярной массы по экспоненциальному закону.

Проведено исследование зависимости антиагрегационного эффекта от концентрации отдельно взятых хлораминовых производных глицина и лейцина. Выяснено, что эту зависимость можно аппроксимировать степенной функцией, показатель степени которой, близкий к 2 для этих соединений, указывает, что необходимо по крайней мере две модификации мембраны тромбоцита для утраты клеткой агрегационной активности.

Показано, что при снижении концентрации тромбоцитов в ОТП хлораминовые производные аминокислот с повышенной молекулярной массой ингибируют агрегацию тромбоцитов несколько слабее, чем в случае неразведенной ОТП, что является следствием повышенного расходования соединений в реакциях с компонентами плазмы. Кроме того, на примере метионина показано, что введение в ОТП серосодержащих соединений приводит к снижению антиагрегационного эффекта всех исследованных N-хлораминокислот.

Влияние хлораминовых производных глицина и лейцина в конечной концентрации 1 мМ на трансформацию формы АДФ-активированных тромбоцитов слабо выражено по сравнению с их антиагрегационным действием в ОТП- не выявлено изменения процесса транспорта флуоресцентного зонда акридинового оранжевого в клетки под действием этих соединений.

Обнаружено, что эффективность действия N-хлораминокислот на агрегацию тромбоцитов при их введении в кровь меняется. Все исследуемые соединения, за исключением N-хлорфенилаланина, оказывают приблизительно одинаковый антиагрегационный эффект. Это является следствием ослабления действия на тромбоциты соединений с пониженной молекулярной массой. Полученные нами данные свидетельствуют, что лейкоциты в количестве, соответствующем их содержанию в крови, не оказывают влияния на антиагрегационный эффект всех N-хлораминокислот. Следовательно, можно полагать, что в крови N-хлораминокислоты с пониженной молекулярной массой конкурентно больше расходуются в реакциях взаимодействия с эритроцитами, чем с плазмой и тромбоцитами.

Заметно повышенную антиагрегационную активность в составе цельной крови при активации тромбоцитов агонистами АДФ и коллагеном проявляет N-хлорфенилаланин. Возможно, это обусловлено его более медленным взаимодействием с эритроцитами, в результате чего большее количество соединения взаимодействует с тромбоцитами.

При изучении действия N-хлораминокислот и ^^дихлортаурина на изолированные эритроциты было показано, что данные соединения взаимодействуют с эритроцитами. Однако важно отметить, что в крови в результате такого взаимодействия не происходит заметного повреждения эритроцитов по критерию гемолиза. В условиях, соответствующих сильному угнетению активности тромбоцитов (при введении в цельную кровь человека N, N-дихлортаурина в концентрации 1 мМ), на эритроциты приходится около 0,2 нмоль на 1 миллион клеток. Добавление в суспензию изолированных эритроцитов N, N-дихлортаурина из расчета 0,2 нмоль на 1 миллион клеток не вызывало гемолиза даже за длительный промежуток времени (12 часов) (рис. 69). Гемолиз эритроцитов регистрировался при использовании Ы, 1Г-дихлортаурина в концентрациях примерно в 1000 раз более высоких. Экстраполяция данных на низкие концентрации дихлортаурина при условии постоянства механизма модификации мембран показывает, что гемолиз эритроцитов в крови с 1 мМ N, N-дихлортаурина следует ожидать через сроки, превышающие время их жизни в организме.

Получены аргументы в пользу того, что в крови и ОТП имеет место избирательность действия хлораминовых производных аминокислот на тромбоциты, то есть тромбоциты в сравнении с другими составляющими крови характеризуются повышенной способностью к взаимодействию с хлораминами. Возможно, это обусловлено тем, что плазматическая мембрана тромбоцитов, с которой прежде всего взаимодействуют хлорамины, имеет особое происхождение, формируется из плазматического ретикулума мегакариоцитов. Избирательность действия хлораминовых производных аминокислот и таурина на тромбоциты в составе ОТП и крови, по-видимому, определяется большим количеством серосодержащих групп рецепторных белков плазматической мембраны тромбоцита, с которыми эффективно реагируют хлорамины. Например, согласно данным литературы, молекула фибриногенового рецептора GP ПЬ-Ша содержит в своем составе 29 дисульфидных связей, 21 из которых определяет четвертичную структуру гликопротеина GP Ша, и 8 дисульфидных групп входят в состав GP lib [73,74]. Эти группы имеются также в структуре коллагенового (содержит 35 полуцистиновых остатков), аг-адренергического рецепторов плазматической мембраны тромбоцитов [181].

Хлораминовые соединения эффективно реагируют с серосодержащими соединениями. Мембранные сульфгидрильные группы играют важную роль в процессах адгезии и агрегации тромбоцитов. Химическая модификация сульфгидрильиых плазматических мембран приводит к угнетению агрегационной активности тромбоцитов. В наших экспериментах введение в цельную кровь N-метилмалеимида (модификатора SH-групп, проникающего внутрь мембраны и в цитоплазму) в конечной концентрации 300 мкМ снижало на 50% АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов человека в составе ОТП. В суспензии изолированных тромбоцитов подавление агрегации в два раза наблюдали при действии N-метилмалеимида в конечной концентрации около 3 мкМ. Таким образом, тромбоциты (по критерию агрегации) проявляют высокую чувствительность к химической трансформации сульфгидрильиых групп. Концентрация мембранных периферических сульфгидрильиых групп всех тромбоцитов составляет приблизительно 20 мкМ (рис. 32−33) [280]. Указанный очень сильный антиагрегационный эффект N-метилмалеимида, вероятно, обусловлен его взаимодействием с внутримембранными сульфгидрильными группами.

N-Хлораминовые соединения окисляют в пределе только примерно 50% периферических сульфгидрильиых групп тромбоцитов (рис. 33) при концентрациях 80−100 мкМ, вызывающих сильное ингибирование агрегации изолированных клеток (см., например, рис. 43). Вероятно, взаимодействие хлораминокислот с другими химическими группами (дисульфидными и др.) вносит дополнительный вклад в противотромбоцитарный эффект N-хлораминов.

Секреторная активность тромбоцитов, отражающая выброс во внеклеточную среду содержимого плотных гранул и приводящая к каскадной активации клеток крови, подавлялась хлораминовыми производными аминокислот и таурина в большей степени, чем агрегация: в одинаковых условиях снижение степени секреции тромбоцитов на 60−70% сопровождалось угнетением их агрегации на 2535%. Таким образом, мембранные структуры тромбоцитов, обеспечивающие реакцию выброса гранулярного аппарата, сильно модифицируются хлораминами. В этой связи необходимо вспомнить, что коллаген- и адреналин-индуцированная агрегация тромбоцитов кролика, сопровождающаяся реакцией выброса, подавлялась N-хлораминокислотами в большей степени, чем агрегация, вызванная АДФ и протекающая без стимуляции реакции выброса.

Итак, химическая модификации плазматической мембраны тромбоцитов может привести к инактивации рецепторов к тромбоцитарным агонистам и генерализованному подавлению агрегации и секреции тромбоцитов.

Работы многих исследователей направлены на поиск и создание лекарственных средств, способных предотвращать аретериальные тромбозы путем ингибирования активности тромбоцитов [56, 57, 227]. Химическая модификация плазматической мембраны тромбоцита в целом может обеспечить генерализованное ингибирование тромбоцитов, т. е. ингибирование их активации в ответ на действие любого агониста. Хлораминовые соединения, которые химически модифицируют серосодержащие группы плазматических мембран тромбоцитов, могут оказаться эффективными для этих целей. В результате этого могут образовываться дисульфиды тиолов, а также сульфеновые и сульфоновые группы. Ожидается, что эти продукты являются безвредными, так как они образуются и при обычном метаболизме серосодержащих аминокислот. Следует подчеркнуть, что аспирин, широко используемый в клинике для предотвращения тромбозов (раздел & quot-Обзор литературы& quot-), также подавляет активность тромбоцитов путем их химической модификации, ацетилируя по гидроксильной группе серина циклооксигеназу тромбоцитов [216].

Известно, что гиперактивность тромбоцитов играет важную роль в патогенезе сердечно-сосудистых заболеваний. Способность тромбоцитов к спонтанной агрегации в клинике является показателем риска развития острого инфаркта миокарда, в организме лишь часть тромбоцитов активируется субэндотелием в месте повреждения сосудистой стенки, остальные тромбоциты активируют друг друга [277]. Поэтому важным достоинством изученных хлораминов, как возможных антитромбоцитарных препаратов, является их способность подавлять агрегацию активированных тромбоцитов (рис. 51).

В ряду исследованных нами биогенных хлораминов лишь 1Ч, 1Ч-дихлортаурин характеризуется химической устойчивостью и может считаться потенциально возможным кандидатом на роль противотромбоцитарного средства. N, N-Дихлортаурин нам удалось получить в виде твердого препарата. Важным достоинством КШ-дихлортаурина. наряду с антиагрегационной и антисекреторной активностью, следует считать его способность подавлять начальную агрегацию

195 тромбоцитов и вызывать распад уже образовавшихся агрегатов (дезагрегацию). Кроме того, сравнение эффективности антиагрегационного действия N, N-дихлортаурина с такими антитромбоцитарными препаратами, как аспирин и тиклопидин показало, что исследуемый М, 1Ч-дихлортаурин при введении в кровь подавляет агрегацию тромбоцитов в составе ОТП не слабее препаратов сравнения (рис. 55, 56).

Таким образом, хлораминовые производные аминокислот и таурина способны подавлять агрегацию тромбоцитов человека, находящихся на разных этапах активации, угнетать секреторную активность тромбоцитов, циклооксигеназную пероксидацию и вызывать их дезагрегацию на фоне отсутствия заметного повреждения эритроцитов. Всё это позволяет рекомендовать данный класс соединений в качестве потенциальных тромбоцитарных ингибиторов для дальнейших исследований.

Показать Свернуть

Содержание

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1. Физико-химические свойства продуктов реакции, катализируемой миелопероксидазой: гипохлорита и хлораминовых производных аминокислот

2. Структура и функции тромбоцитов.

2 Л. Строение тромбоцитов.

2.2. Механизм активации, агрегация и секреция тромбоцитов.

2.3. Система трансдукции сигнала в тромбоцитах.

2.4. Роль тромбоцитов в патогенезе сосудистых заболеваний и противотромбоцитарные препараты

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

1. Реактивы.

1.1. Получение хлораминовых производных аминокислот и таурина

2. Объекты исследования.

2.1. Получение образцов тромбоцитов кролика.

2.2. Приготовление образцов тромбоцитов человека.

2.3. Выделение мононуклеарных клеток, нейтрофилов и суммарной фракции лейкоцитов.

2.4. Выделение эритроцитов.

3. Методы исследования.

3.1. Регистрация агрегации тромбоцитов и лейкоцитов

3.2. Регистрация дезагрегации тромбоцитов.

3.3. Регистрация изменения формы тромбоцитов.

3.4. Регистрация продуктов пероксидации липидов.

3.5. Исследование реакции выброса цитоплазматических гранул и транспорта в гранулярный аппарат в тромбоцитах.

3.6. Флуориметрическое определение модификации аминогрупп

3.7. Спектрофотометрическое определение сульфгидрильных групп

3.8. Регистрация агрегации эритроцитов

3.9. Кинетический гемолиз эритроцитов

3. 10. УФ-облучение исследуемых образцов

3. 11. Статистическая обработка полученных результатов.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. Действие гипохлорита натрия на функциональную активность тромбоцитов.

1.1. Действие гипохлорита натрия на изолированные тромбоциты

1.2. Действие гипохлорита на тромбоциты в составе обогащенной тромбоцитами плазмы

1.3. Прямое и косвенное действие гипохлорита натрия на тромбоциты в составе обогащенной тромбоцитами плазмы.

1.4. Восстановление плазмой и ее компанентами агрегации тромбоцитов, модифицированных гипохлоритом натрия

1.5. Влияние компонентов плазмы, модифицированных гипохлоритом натрия, на агрегацию нативных тромбоцитов

Г ЛАВА 2. Действие хлораминовых производных биогенных соединений на различные функциональные процессы в тромбоцитах

2.1. Противотромбоцитарное действие хлораминовых производных аминокислот и таурина.

2.2. Действие N-хлораминокислот на АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов в присутствии серосодержащих соединений.

2.3. Влияние N-хлораминокислот на изменение формы тромбоцитов

2.4. Влияние N-хлораминокислот на транспорт, приводящий к накоплению акридинового оранжевого в гранулярном аппарате тромбоцитов.

2.5. Зависимость противоагрегационного действия N-хлораминокислот от состояния тромбоцитов кролика.

ГЛАВА 3. Ингибирование агрегации тромбоцитов в зависимости от физико-химических свойств хлораминовых производных аминокислот.

3.1. Концентрационная зависимость антиагрегационного действия N-хлораминокислот на тромбоциты

3.2. Зависимость ингибирования агрегации тромбоцитов в составе обогащенной тромбоцитами плазмы от молекулярной массы

N-хлораминокислот

3.3. Зависимость антиагрегационного действия N-хлораминокислот от положения в молекуле хлораминовой группы.

3.4. Ингибирование N-хлораминокислотами агрегации тромбоцитов в составе цельной крови в зависимости от молекулярной массы.

ГЛАВА 4. Взаимодействие гипохлорита натрия и хлораминовых соединений с биологически важными веществами и компонентами тромбоцитов

4.1. Исследование относительных констант скорости взаимодействия гипохлорита натрия с аминокислотами и пептидами

4.2. Сравнительная эффективность взаимодействия К^-дихлортаурина с различными серосодержащими группами

4.3. Стехиометрия взаимодействия гипохлорита натрия и 1Ч, М-дихлортаурина с серосодержащими соединениями

4.4. Модификация сульфгидрильных и аминогрупп тромбоцитов при изменении их агрегационной активности гипохлоритом и хлораминовыми соединениями.

4.5. Особенности ингибирования начальной агрегации тромбоцитов исследуемыми соединениями при действии разных агонистов.

ГЛАВА 5. Действие И^-дихлортаурина на тромбоциты.

5.1. Получение твердого стабильного препарата 1 М, Ы-дихлортаурина.

5.2. Антиагрегационное действие хлораминовых производных таурина и аминокислот на нативные и предстимулированные тромбоциты человека.

5.3. Подавление хлораминовыми производными аминокислот и таурина секреции АТФ в тромбоцитах человека

5.4. Действие 1Ч, 1Ч-дихлортаурина на циклооксигеназную пероксидацию и агрегацию изолированных тромбоцитов

5.5. Ингибирование начальной агрегации и дезагрегация тромбоцитов человека при действии М, 1Ч-дихлортаурина

5.6. Сравнительная оценка эффективности противотромбоцитарного действия аспирина, тиклопидина и Ы^-дихлортаурина

5.7. Антиагрегационное действие ]Ч[, Ы-дихлортаурина in vivo на тромбоциты кролика

ГЛАВА 6. Действие хлораминовых производных биогенных соединений и гипохлорита натрия на эритроциты и лейкоциты.

6.1. Гемолиз и агрегация эритроцитов при действии N-хлораминокислот.

6.2. Действие гипохлорита натрия и М,]М-дихлортаурина на лейкоциты.

6.3. Избирательность действия хлораминовых соединений при их введении в кровь и обогащенную тромбоцитами плазму.

Список литературы

1. Балашова Т. С., Кубатиев А.А.О возможности регуляции блокаторов S2 -рецепторов нафтидофурилом агрегационной способности тромбоцитов больных инсулин-зависимым сахарным диабетом. //Вопросы мед. химии. -1996-Т.4 -С. 337−344.

2. Булегенов К. Е., Балмуханов Б. С. Агрегация эритроцитов в присутствии Альцианового голубого. // Кардиология, — 1993.- Т. 33.- № 4, — С. 42−44.

3. Ван де Хюлст Г. Рассеяние света малыми частицами. М., ИЛ, 1961

4. Ваншинкель Н. М., Петров Н. Н. Ультраструктура и функции тромбоцитов человека. Л.: Наука. — 1982.

5. Варфоломеев С. Д., Мевх А Х Простагландины молекулярные биорегуляторы.- Изд-во МГУ, — 1985.

6. Васильев Ю. Б., Сергиенко В. И., Гринберг В. А., Мартынов А. К. Электрохимические методы детоксикации в медцине. Моделирование монооксидаз печени и молекулярных механизмов фагоцитоза. -В кн.: Итоги науки и техники. Электрохимия. -Изд-во ВИНИТИ-1990- Т. 31.

7. Васильев С. А., Жердева Л. В., Мазуров А. В. Наследственные дефекты мембранных гликопротеинов тромбоцитов. // Гематол. и трансфузиол. 1994. -Т. 39. -№ 1. — С. 34−38.

8. Владимиров Ю. А., Добрецов Г. Е. Флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран, — М.: Наука.- 1980.

9. Владимиров Ю. А., Оленев В. И., Суслова Т. Б., Потапенко А. Я. Механизм перекисного окисления липидов и его действие на биологические мембраны.- В кн.: Итоги науки и техники. Биофизика, Т.5.- М.: Изд-во ВИНИТИ, — 1975.

10. Ю. Гасилин B.C., Сидоренко Б. А. Стенокардия. М.: Медицина. — 1987.

11. П. Говорова Н. Ю., Шаронов Б. П., Лызлова С. Н. Влияние низкомолекулярных соединений на хемилюминесценцию люминола, обусловленную действием продуктов миелопероксидазного катализа и экзогенного гипохлорита. // Биохимия,-1988, — Т. 53, — Вып. 12. С. 2025−2032.

12. Горюнов А. В., Рощупкнн Д. И. Перекнсное окисление липидов в тромбоцитах, индуцированное УФ-облучением. // Биол. мембр.- 1989, — Т.6.- N 5.- С. 551 -554.

13. Духанин А. С., Губаева Ф. Р. Фармакологическая регуляция активности тромбоцитов. // Эксперим. и клинич. фармакология. 1998. — Т. 61. — № 4. — С. 66−71.

14. Журавлёва И. А., Мухпелентьев И. А., Виноградов Н. А. Роль окиси азота в кардиологии и гастроэнтерологии. // Клинич. Мед. 1997, — Т. 75, — № 4.- С. 18−22.

15. Кубатиев А. А., Ядигарова З. Т., Рудько И. А., Быков В. А., Тюкавкина Н. А. Влияние диквертина на содержание циклических нуклеотидов в тромбоцитах. // Бюлл. экспериметальной биологии и медицины,-1999-Т. 128- С. 267−270.

16. Кубатиев А. А., Андреев С. В. Эндогенные простагландины в динамике индуцированной агрегации тромбоцитов. // В кн. :Актуальные проблемы гемостазиологии. (Под редакцией Петровского Б. В., Чазова Е. И., Андреева С.В.). Изд-во & laquo-Наука»- -М.- 1979- С. 115−118.

17. Кудрявцев Н. Т., Вячеславов П. М. Прикладная электрохимия, — JL: Медицина,-1980.

18. Лакин Г. Ф. Биометрия, — М.: Высшая школа.- 1990.

19. Мазуров А. В., Васильев С. А. Структура и функции мембранных гликопротеинов тромбоцитов. // Гематол. и трансфузиол. 1994. — Т. 39. — № 1. -С. 29−34.

20. Маянский А. Н., Маянский Д. Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. -Новосибирск: Наука.- 1989.

21. Межлумян А. Г., Гаврилов И. Ю., Попов Е. Г. Количественная оценка аккумулирующей способности интактных тромбоцитов с помощью флуоресцентных красителей. // Бюл. эксп. биол. и мед.- 1987, — N 7, — С. 119 121.

22. Метелица В. И. Справочник кардиолога по клинической фармакологии. М.: Медицина. — 1987.

23. Натвиг Д. Б. (ред.) Лимфоциты: выделение, фракционирование и характеристика.- М.: Медицина.- 1980.

24. НикулинВ.А., Шура-БураБ.Л. //Врач, дело.- 1977,-N2,-С. 135 138.

25. Панасенко О. М. Гипохлорит и окислительная модификация липопротеинов крови человека. Дисс. на соискание ученой степени доктора биологических наук, — 1998 — М.

26. Панченков Г. М., Лебедев В. П. Химическая кинетика и катализ. // -1961- Изд. Московского университета 550 с.

27. Перцев С. С., Сосновский А. С., Кубатиев А. А., Пирогова Г. В. Влияние интерлейкина -1 р на агрегацию тромбоцитов у крыс Август, Вистар и ВЭГ при остром эмоциональном стрессе. Бюл. эксп. биол. и мед.- 1997- № 8- С. 144−148.

28. Пеленицын А. Б., Потапенко А. Я., Рощупкин Д. И О механизме фотохимического окисления липидов в мембранах эритроцитов, — В кн.: Биоантиокислители.- М.: Наука.- 1975.

29. Пол У. Иммунология, — М.: Мир, — 1987.

30. Попов Е. Г., Габбасов Э. А., Гаврилов И. Ю., Позин Е. Я., Межлумян А. Г. Аккумуляция аминопроизводных акридина электронноилогными гранулами тромбоцитов. // Бюл. эксп. биол. и мед.- 1987, — N 10, — С. 435 438.

31. Попов Е. Г., Габбасов Э. А., Гаврилов И. Ю., Межлумян А. Г., Позин Е. Я. Способ исследования молекулярного переноса в клетках крови. // АС N 1 363 071.- Бюл. изобр. и откр, — 1987.- N 48.

32. Рощупкин Д. И. Молекулярные механизмы повреждения биомембран, липидов и белков под действием УФ-излучения.- Дисс. д.б.н. -М.- 1979.

33. Рощупкин Д. И. Молекулярные механизмы фотоповреждения биологических мембран, — В кн.: Фотобиология животной клетки.- Л.: Наука.- 1977, — С. 23 34.

34. Рощупкин Д. И., Бержицкая В. В., Соколов А. Я. Изменение малоуглового рассеяния света тромбоцитами при их активации и агрегации. // Биофизика. -1998 -Т. 43- С. 503−510.

35. Рощупкин Д. И., Соколов А. Ю. Способ исследования начальной агрегации тромбоцитов (варианты) и устройство для его осуществления (варианты). -Патент РФ. № 2 067 764.

36. Сидоренко Б. А., Преображенский Д. В. Антитромботические препараты, применяемые при лечении сердечно-сосудистых заболеваний. // Кардиология. -1996,-№ 1,-С. 37−51.

37. Струков А. И., Серов В. В. Патологическая анатомия. М.: Медицина. — 1985.

38. Чирков Ю. Ю., Белушкина Н. Н., Тыщук И. А., Северина И. С. Роль гуанилатциклазы в регуляции агрегации тромбоцитов человека. // Вестник АМН СССР, 1991. -С. 51.

39. Шаронов Б. П., Говорова Н. Ю., Лызлова С. Н. Антиокислительные свойства и деградация белков сыворотки активными формами кислорода (02 ОСГ), генерируемыми стимулированными нейтрофилами. // Биохимия, — 1988, — т. 53, вын. 5, — С. 816 825.

40. Шаронов Б. П., Чурилова И. В. Окисление супероксиддисмутазы гипохлоритом. Появление изомеров, обладающих каталитической активностью. // Докл. АН СССР. -1990- Т. 314-С. 1500−1502.

41. Эмануэль Н. М., Сергеев Г. Б. (ред.). Экспериментальные методы химической кинетики, — М.: Высшая школа.- 1980.

42. Affolter PI., Pletscher A. Rheo-optical shape analysis of human blood platelets. // Thromb. Haemost. 1982. — V. 48. — P. 204−207.

43. Agbanyo F.R., Sixma J.J., Degroot P.O., Languino L.R., Plow E.F. Thrombospondin platelet interactions role of divalent cations, wall shear rate, and platelet membrane glycoproteins. // J. Clin. Invest. — 1993, — V. 92.- No. 1. — P. 288−296.

44. Aledort Г. М., Troup S.B., Weed R.I. Inhibition of sulfhydryl-dependent platelet functions by penetrating and non-penetrating analogues of parachloromercuribenzene. // Blood. 1968. — V. 31. — No.3. — P. 471−477.

45. Altman R., Scazziota A. Synergistic interactions of PAF-acether and sodium arachidonate in human platelet aggregation: unexpected results after aspirin intake. // Thromb. Res. 1986. — V. 43. — P. 113 — 120.

46. Ardlie N.G., Bell L.K., MeGuiness J.A. Synergistic potentiation by epinephrine of collagen or thrombin-induced calcium mobilization in human platelets. // Thromb. Res. 1987. -V. 46. — P. 519 — 526.

47. Arnhold J., Wiegel D., Richter O., Hammerschmidt S., Arnold K., Krumbiegel M. Modification of low density lipoproteins by sodium hypochlorite. // Biomed. Biochim. Acta.- 1991.- V. 50, — No. 3.- P. 967 973.

48. Arnhold J., Hammerschmidt S., Wagner M., Muller S., Arnold K., Grimm E. On the action of Hypochlorite on human serum albumin. // Biomed. Biochim. Acta.- 1990-V. 49-P. 991−997.

49. Arnhold J., Herold W., Deev A.I. Reduction of amino groups and changes of the surface charge of liposomes on methylation and peroxidation. // Studia biophysica.- 1988.- V. 128.- No. 1, — P. 45 50.

50. Arnhold J., Mueller S., Arnold K., Sonntag K. Mechanisms of inhibition of chemiluminescence in the oxidation of luminol by sodium hypochlorite. // J. Biolumin. Chemilumin. 1993. — V. 6. — P. 307 — 313.

51. Aruoma O.I., Halliwell В., Holy B.N., Butler J. The antioxidant action of taurine hypotaurine and their metabolic precursors. // Biochim. J. -1988- V. 256-P. 251−255.

52. Asakawa J., Matsushita S. // Lipids.- 1980, — V. 15, — No. 6, — P. 137 140.

53. Becker R.C. Thrombin antagonists and antiplatelet agents. // Am. J. Cardiol. 1992. -V. 69. P. 39A- 51A.

54. Becker R.C. Antiplatelet therapy in coronary heart disease. Emerging strategies for the treatment and prevention of acute myocardial infarction. // Arch. Pathol. Lab. Med. 1993. -V. 117.-.P. 89- 96.

55. Berliner S., Fishelson Z., Bruhis S., Kaufman H., Pinhas J., Aronson M. The phenomenon of leukergy: induction and detection of leukocyte aggregation in whole human blood. // J. Lab. and Clinic. Med. 1987. — V. 109. — P. 575 — 582.

56. Berkels R., Stockklauser K., Rosen P., Rosen R. Current status of platelet NO synthases. // Thromb. Reseach. 1997, — V. 87, — No. 1, — P. 51−55.

57. Bertolino G., Noris P., Previtali M., et al. Platelet function after in vivo and in vitro treatment with thrombolytic agents. // Am. J. Cardiol. 1992. — V. 69. — P. 457 — 461.

58. Beukers M.W., Pirovano I.M., van Weert A., Kerkhof C.J., Ijzerman A.P., Soudijn W. Characterization of ecto-ATPase on human blood cells. A physiological role in platelet aggregation? // Biochem. Pharmacol. 1993. — V. 46. — No. 11. — P. 1959−66.

59. Bills N.K., Smith J.B., Silver M.J. Selective release of arachidonic acid from the phospholipids of human platelets in response to thrombin. // J. Clin. Invest.- 1977-V. 6O-N0 l-P. 1−6.

60. Blockmans D., Deckmyn H., Vermylen J. Platelet activation. // Blood Reviews. -1995, — V. 9,-P. 143−156.

61. Bondi A. Van der Waals volumes and radii. // J. Phys. Chem. 1964. — V. 68. — No. 3. -P. 441 -451.

62. Born G.V.R. Aggregation of blood platelets by adenosine diphosphate and its reversal. // Nature.- 1962, — V. 194.- No. 4832, — P. 927 929.

63. Born G.V.R. Observations on the change in shape of blood platelets brought about by adenosine diphosphate. // J. Physiol. Lond. 1970. — V. 209. — P. 487−511.

64. Bourguignon L.Y.W., Walker G., Bourguignon G.J. Phorbol ester-induced phosphorilation of a transmembrane glycoprotein (GP 180) in human blood platelets. // J. Biol. Chem. 1985. — V. 260. — P. 11 775−11 780.

65. Bracht F., Schror K. Isolation and identification of aptamers from defibrotide that act as thrombin antagonists in vitro. II Biochem. Biophys. Res. Commun. 1994. — V. 200. — P. 933 — 937.

66. Brass F., Ahuja M., Belmonte E., Pisarro S., Tarver A., Hoxie J. The human platalet thrombin receptor: turning it on and turning it off. // Ann. N.Y. Acad. Sci.- 1994.- V. 714,-P. 1−12.

67. Braun M., Kramann J., Strobach H., et al. Incomplete inhibition of platelet secretion by low-dose aspirin. // Platelets. 1994. — V. 5. — P. 325 — 331.

68. Bredt D.S. Snyder S.H. Nitric oxide: a physiologic messenger molecule. /V Annu. Rev. Biochem. 1994. — V. 63. — P. 175 — 195.

69. Bushfield M., McNicol A., Macintyre D.E. Possible mechanisms of the potentiation of blood-platelet activation by adrenaline. // Biochem. J. 1987. — V. 241. — P. 671 -676.

70. Calvete J. J Clues for understanding the structure and function of a prototypic human integrin: the platelet glycoprotein Ilb/IIIa complex. // Thromb. Haemost. 1994. — V. 72. — P. 1 — 15.

71. Calvete J.J. On the structure and function of platelet integrin alpha lib beta 3, the fibrinogen receptor. // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1995. — V. 208. — No. 4. — P. 346 -360.

72. Carr C., van den Berg J.J.M., Winterbourn C.C. Chlorination of cholesterol in cell membranes by hypochlorous acid. // Arch. Bioch. Biophys.- 1996- No 1- P. 63−69.

73. Carrol R.C., Butler R.G., Morris P.A., Gerrard J.M. Separable assembly of platelet pseudopodal and contractil cytoskeletons. // Cell. 1982. — V. 30. — P. 385−393.

74. Cattaneo M., Akkawat В., Kinlough-Rathbone R.L. Ticlopidine facilitates the deaggregation of human platelets aggregated by thrombin. // Thromb. Haemost. -1994. V. 71. — P. 91 -94.

75. Cattaneo M., Lombardi R., Bettega D. Shear-induced platelet aggregation is potentiated by desmopressin and inhibited by ticlopidine. // Arterioscler. Thromb. -1993,-V. 13. -P. 393 397.

76. Chesney J.A., Eaton J.W., Mahoney J.R. Bacterial glutathione: a sacrificial defense against chlorine compounds. // J. Bacteriol. 1996.- V. 178.- P. 2131−2135.

77. Chignard M., Le Couedic J.P., Vargaftig B.B., Benveniste J. Platelet-activating factor (PAF-acether) secretion from platelets: effects of aggregating agents. // Br. J. Haematol. 1980, — V. 46. — P. 455 — 464.

78. Chilton F.H., Cluzel M., Triggiani M. Recent advances in our understanding of the biochemical interactions between PAF and arachidonic acid. // Lipids. 1991, — V. 26,-No. 12,-P. 1021 -1027.

79. Chow T. W, Heliums J.D., Moake J.L., Kroll M.H. Shear-stress-induced von Willebrand factor binding to glycoprotein lb initiates calcium influx associated with aggregation. // Blood. 1992. — V. 80. — P. 113 — 120.

80. Chronos N.A.F., Wilson D.J., Janes S.L., et al. Aspirin does not affect the flow cytometric detection of fibrinogen binding to, or release of a-granules from, human platelets. // Clin. Sci. 1994, — V. 87. — P. 575 — 580.

81. Clark R.A., Klebanoff S.J., Einstein A.B., Fever A. Peroxidase H202 — halide system: Cytotoxic effect on mammalian tumor cells. // Blood. — 1975.- V. 45.- P. 161 — 170.

82. Clark R.A., Olsson I., Klebanoff S.J. Cytotoxicity for tumor cells of cationic proteins from human neutrophil granules. // J. Cell Biol.- 1976.- V. 70, — P. 719 723.

83. Clark R.A., Klebanoff S.J. Role of the myeloperoxidase H202 — halide system in concanavalin A — induced tumor cell killing by human neutrophils. // J. Immunol. -1979, — V. 122, — No. 6, — P. 2605 — 2610.

84. Clark R.A., Szot S. Chemotactic factor inactivation by stimulated human neutrophils mediated by myeloperoxidase-catalyzed metionine oxidation. // J. Immunol. -1981-V. 128- P. 1507−1513.

85. Clemetson K.J. Platelet activation: signal transduction via membrane receptors. // Thromb. Haemost. 1995. — V. 74. — No. 1. — P. 111 — 116.

86. Collen D., Lijnen H.R. Strategies for improvement of thrombolytic agents. // Thromb. Haemost. 1991. — V. 66. — P. 88 — 110.

87. Collen D., Lijnen H.R. Basic and clinical aspects of fibrinolysis and thrombolysis. // Blood. 1991. -V. 78. -P. 3114−3124.

88. Coller B.S. Platelets and thrombolytic therapy. // N. Engl. J. Med. 1990. — V. 323. -P. 33 — 42.

89. Coller B.S., Anderson K., Weisman H.F. New antiplatelet agents: platelet GP Ilbllla antagonists. // Thromb. Haemost. 1995. — V. 74. — No. 1. — P. 302 — 308.

90. Colman R.W. Platelet activation: role of an ADP receptor. // Semin. Haematol. -1986. -V. 23. -P. 119- 128.

91. Cook N.S., Kottirsch G., Zerwes H.G. Platelet glycoprotein Ilbllla antagonists. // Drugs Future 1994. — V. 19. — P. 135 — 159.

92. Coutre S., Leung L. Novel antithrombotic therapeutics targeted against platelet glycoprotein Ilbllla. // Annu. Rev. Med. 1995. — V. 46. — P. 257 — 265.

93. Cristalli G., Mills D.C.B. Identification of a receptor for ADP on blood platelets by phytoaffinity labelling. // Biochem. J. 1993. — V. 291, — P. 875 — 881.

94. Cuperus R.A., Muijsers A.O., Wever R. The superoxide dismutase activity of myleoperoxidase fornation of compound III. // Bioch. Biophys. Acta -1986- V. 871-P. 78−84.

95. Da Prada M., Richards J.G., Kettler R. Amine storage organells in platelets.- In: J.L. Gordon (ed.). Platelets in Biology and Pathology. Elsevier.- North Holland Biomedical Press.- 1981, — P. 321 348.

96. Dallegri F., Ballestero A., Otonello L., Patrone F. Platelets as inhibitory cells in neutrophyil mediated cytolisis. // J. Lab. Clin. Med. — 1989- V. 114- P. 502−509.

97. Dandona P., Thusu K., Khurata U., Love J., Aljada A., Mousa Sh. Calcium, calmodulin and protein kinase С dependence of platelet shape change. // Thromb. Res each. 1996, — V. 81, — No. 2, — P. 163−175.

98. Davies J.M.S., Horwitz D.A., Davies K. JA. Inhibition of collagenase activity by N-chlorotaurine a product of activated neutrophils. // Arthritis and Rheumatism. -1994- V. 37- No 3- P. 424−427.

99. Defreyn G., Bernat A., Delebassee D., et al. Pharmacology of ticlopidine: a review. // Thromb. Haemost. 1989. — V. 15. — P. 159 — 166.

100. Deranleau D.A., Dubler D., Rothen C., Luscher E.F. Transient kinetics of the rapid shape change of unstirred human platelets stimulated with ADF. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1982, — V. 79. — P. 7297 — 7301.

101. Dorn H.J.W., Dejesus A. Human platelet aggregation and shape change are coupled to separate thromboxane A2 prostaglandin H2 receptors. // Am. J. Physiol. -1991. -V. 260. — P. H327 — H334.

102. Ellman G.L. Tissue sulfhydryl groups. //Arch. Bioch. Biophys.- 1959- V. 82-P. 70−77.

103. Fitzgerald D.J., Fitzgerald G.A. Role of thrombin and thromboxane A2 in reocclusion following coronary thrombolysis with tissue-type plasminogen activator. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1989. — V. 86. — P. 7585 — 7589.

104. Folkes L. K, Candeias L., Wardman P. Kinetics and mechanisms of hypochlorous acid reactions. // Arch. Bioch. Biophys.- 1995- V. 323- P. 120−126.

105. Foote C.S., Goyne Т.Е., Lehrer R.J. Assesment of chlorination by human neutrofils. //Nature.- 1983- V. 301-P. 715−716.

106. Frishman W.H., Miller K.P. Platelets and antiplatelet therapy in ischemic heart disease. // Curr. Probl. Cardiol. 1986. — V. 22. — P. 73 — 136.

107. Fuster V. Mechanisms leading to myocardial infarction: insights from studies of vascular biology. // Circulation. 1994. — V. 90. — P. 2126 — 2146.

108. Gabbasov Z.A., Popov E.G., Gavrilov I. Yu., Pozin E. Ya. Platelet aggregation: the use of optical density fluctuations to study microaggregate formation in platelet suspension. // Thromb. Res. 1989. — V. 54. — No. 3. — P. 215 — 223.

109. Gent M., Blakely J.A., Easton J.D. The Canadian American Ticlopidine Study (CATS) in thromboembolic stroke. // Lancet. 1989 — V. 1. — P. 1215 — 1220.

110. Gerrard J.M., White J.G., Peterson D.A. The platelets dense tubular system: its relationship to prostaglandin systesis and calcium flux. // Thromb. Haemost. 1978. -V. 40. -No. 2. -P. 224 — 231.

111. Golino P., Buja M., Ashton J.H. Effect of thromboxane and serotonin receptor antagonists on intracoronary platelet deposition in dogs with experimental stenosed coronary arteries. // Circulation. 1988. — V. 78. — P. 701 — 711.

112. Goodnith S.H., Coull B.M., McAnulty J.H., Taylor L.M. (153. Antiplatelet therapy Part I. // West. J. Med. — 1993. — V. 158. — P. 385 — 392.

113. Goodnith S.H., Coull B.M., McAnulty J.H., Taylor L.M. Antiplatelet therapy -Part II. //West. J. Med. 1993. -V. 158. — P. 506 — 514.

114. Gray E.T., Margerum D.W., Huffman R.P. (45. Chloramine equilibria and the kinetics of disproportionation in aqueous solution. // Am. Chem. Soc. Symp. Ser. -1978, — No. 82,-P. 264−277.

115. Greaves M.W., Hensby C.N., Plummer N.A., Warin A.P. The effect of short wave length ultraviolet С (254 nm) irradiation on arachidonic and prostaglandins E2 and F2 concentration in human skin. //Brit. J. Pharmacol. -1977, — V. 6, — P. 445 -446.

116. Grisham M.B., Jefferson M.M., Thomas E.L. Role of monochloramine in the oxidation of erythrocyte hemoglobin by stimulated neutrophils. // J. Biol. Chem. -1984, — V. 259, — No. 11, — P. 6757 6772.

117. Hamberg M., Samuelson B. Prostaglandin endoperoxides. Novel transformation of arachidonic acid in human platelets. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1975. — N. 12. -No. 8. — P. 3400 — 3404.

118. Hamberg M., Swenson I., Samuelson B. Thromboxanes: a new group of biologically active compounds derived from prostaglandin endoperoxides. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1975. — V. 72. — No. 8. — P. 2994 — 2998.

119. Han P., Boatwright C., Ardlie N.G. Verapamil and collagen-induced platelet reactions evidence for a role for intracellular calcium in platelet activation. // Thromb. Haemostas. — 1983. — V. 50. — No.2. — P. 537−541.

120. Hantgan R.R. A study of the kinetics of ADP-triggered platelet shape change. // Blood. 1984. — V. 64. — P. 896 — 906.

121. Harbury С.В., Schrier S.L. Modification of platelet sulfhydryl groups. // Thromb. Diath. Haemorrh. 1974. — V. 31. — No.3. — P. 469.

122. Hardisty R.M., Powling M.J., Nokes T.J.C. The action of ticlopidine on human platelets: studies on aggregation, secretion, calcium mobilization and membrane glycoproteins. // Thromb. Haemost. 1990. — V. 64. — P. 150 — 155.

123. Harrison J.E. The functional mechanism of myleoperoxidase. //In: Cancer Enzymology. Eds. Schultz J., Cameron B.F. New-York, Academic Press. -1976-P. 307−317.

124. Harrison J.E., Schultz J. Studies of cholorinating activity of myleoperoxidase. // J. Biol. Chem. -1976-V. 251 -P. 13 71 -1374

125. Hass W.K., Easton J.D., Adams J.H.P., et al. A randomized trial comparing ticlopidine hydrochloride with aspirin for the prevention of stroke in high-risk patients. //N. Engl. J. Med. 1989. — V. 321. — P. 501 507.

126. Held A.M., Hurst J.K. Ambiguity associated with use singlet oxygen trapping agents in myeloperoxidase catalysed oxidation. //Biochem. Biophys. Res. Commun.- 1978, — V. 81, — No. 3, — P. 878 — 885.

127. Herbert J.M., Tissinier A., Defreyn G., et al. Inhibitory effect of clopidogrel on platelet adhesion and intimal proliferation after arterial injury in rabbits. // Arterioscler. Thromb. 1993. — V. 13. — P. 1171 — 1179.

128. Holt J.C., Niewiarowski I. Biochemistry of a-granule proteins. // Semin. Haematol. 1985. — V. 22. — P. 151−163.

129. Honda Z., Nakamura M., Miki I. et al. Cloning by functional expression of platelet-activating factor receptor from guinea-pig lung. // Nature. 1991. — V. 349. -P. 342 — 346.

130. Hopkins N., Gorman R.R. Regulation of endothelial cell cyclic nucleotide metabolism by prostacyclin. // J. Clin. Invest. 1981. — V. 67. — P. 540 — 546.

131. Hourani S.M., Hall D.A. Receptors for ADP on human blood platelets. // Trends. Pharmacol. Sci. 1994. — V. 15. — No. 4. — P. 103−108.

132. Isenberg W.M., McEver R.P., Phillips D.R., Shuman M.A., Bainton D.F. The platelet fibrinogen receptor: An immunologic-surface replica study of agonist-induced ligand binding and receptor clustering. // J. Cell Biol. 1987. — V. 104. — P. 1655 -1663.

133. ISIS-2 Collaborative Group. Randomized trial of intravenous streptokinase, oral aspirin, both, or neither among 17,187 cases of suspected acute myocardial infarction. // Tancet. 1988. — V. 2. — P. 349 — 360.

134. Jackson S.P., Yuan Y.P., Schoenwaelder S.M., Mitchell C.A. Role of the platelet integrin glycoprotein Ilb-IIIa in intracellular signaling. // Thromb. Res. 1993. — V. 71. — No. 2. — P. 159−168.

135. Kaplan K.L., Broekman M.J., Chernoff A., Lesznik G.R., Drillings M. Platelet a-granule proteins: studies on release and subceelular localization. // Blood. 1979. — V. 53. — P. 604−618.

136. Kehrel B. Platelet-collagen interactions. // Semin. Thromb. Hemost. 1995. — V. 21. — No. 2. — P. 123 — 129.

137. Kehrel B. Platelet Receptors for collagens. // Platelets. 1995. — V. 6. — P. 11 — 16.

138. Kehrel В., Kronenberg A., Rautenberg J., et al. Platelets deficient in glycoprotein Illb aggregate normally to collagens type I and III but not to collagen type V. // Blood. 1993. — V. 82. P. 3364 — 3370.

139. Kessels H., Beguin S., Andree H., et al. Measurement of thrombin generation in whole blood: the effect of heparin and aspirin. // Thromb. Haemost. 1994. — V. 72. -P. 78 — 83.

140. Kimura Y., Okuda H. Effects of alpha- and beta-adrenergic antagonist on epinephrine-induced aggregation and intracellular free calcium concentration in human platelets. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1994. — V. 202. — No. 2. — P. 1069−1075.

141. Klebanoff S.J., Clark R.A. The neutrophil function and clinical disorders. -Amsterdam North Holland Publ. Co.- 1978, — P. 425 — 466.

142. Knudsen J.B., Kjoller E., Skagen K., et al. The effect of ticlopidine on platelet functions in acute myocardial infarction: a double blind controlled trial. // Thromb. Haemost. 1985. — V. 53. — P. 332 — 336.

143. Kotze H.F., Lamprecht S., Badenhorst P.N., et al. In vivo inhibition of acute platelet-dependent thrombosis in a baboon model by Bay U3405, a thromboxane A2-receptor antagonist. // Thromb. Haemost. 1993. — V. 70. — P. 672 — 675.

144. Koyama I., Nakamori K., Nagahama Т., Ogasawara M., Nemoto M. The reactivity of taurine with hypohlorous acid and its application for eye drops. // Adv. Exp. Med. Biol. -1996, — V. 403. P. 9−17.

145. Lanza F., Beretz A., Stierle A., Hanau D., Kubina M., Cazenave J.P. Epinephrine potentiates human platelet activation but is not an aggregating agent. // Am. J. Physiol. 1988, — V. 255, — P. H 1276 — H1288.

146. Lapetina E.G. The signal transduction induced by thrombin in human platelets. // FEBS Lett. 1990. — V. 268. — P. 400 — 404.

147. Larrimer N.R., Balcerzak S.P., Metz E.N., Lee R.E. Surface structure of normal human platelets. // Am. G. Med. Sci. 1970. — V. 259. — P. 242−256.

148. Latimer P., Wamble F. Light scattering by aggregates of large colloidal partcles. // Appl. Optics.- 1982- V. 21- P. 24−47.

149. Lee C.F. Kinetics of reactions between chlorine and phenolic compound.- In: Principles and applications of water chemistry (Faust S.D., Hunter J.W. editors). -1967- P. 54 72.

150. Learm. D.V., Fried W.A., Thomas E. L Taurine and hypotaurine content of human leucocytes. // J. Leukoc. Biol. 1990. — V. 48, — P. 174−182.

151. Lips J.P.M., Sixma J.J., Schiphorst M.E. Binding of adenosine di-phosphate to human blood platelets and to isolated blood platelet membranes. // Biochim. Biophys. Acta. 1980. — V. 628. — P. 451−467.

152. Mahautsmith M.P., Sage S.O., Rink T.J. Rapid ADP-evoked currents in human platelets recorded with the nystatin permeabilized patch technique. // J. Biol. Chem. -1992. V. 267. — No. 5. — P. 3060−3065.

153. Marguerie G.A., Edgington T.S., Plow E.F. Interaction of fibrinogen with its platelet receptor as part of a multistep reaction in ADP-induced platelet aggregation. // J. Biol. Chem. 1980. — V. — 255. — No. 1. — P. 154 — 161.

154. Marguerie G.A., Plow E.F. The fibrinogen dependent pathway of platelet aggregation. // Ann. N. -Y. Acad. Sci. -1983. V. 408. — P. 556 — 566.

155. Marguerie G.A., Plow E.F., Edgington T.S. Human platelets possess an inducible and saturable receptor specific for fibrinogen. // J. Biol. Chem. 1979. — V. — 254. -No. 12. -P. 5357 — 5363.

156. Marietta M., Faeehinetti F., Neri I. L-arginine infusion decreases platelet aggregation through an intraplatelet nitric oxide release. // Thromb. Reseach.- 1997,-V. 88, — No. 2,-P. 229−235.

157. Martin Caterine. Aspirin: New life for old drug. // Chem. Brit. 1996, — V. 32. -No. 6. -P. 8−10.

158. Matchar D.B., McCrory Barnett J.M., Feussner et al. // Medical treatment for stroke prevention. // Ann. Intern. Med. 1994. — V. 121. — P. 41 — 53.

159. Mayne R. Collagenous proteins of blood vessels. // Arteriosclerosis 1986. — V. 6. -P. 593 — 685.

160. McTavish D., Faulds D., Goa K.L. Ticlopidine: an updated review of its pharmacology and therapeutic use in platelet- dependent disorders. // Drugs 1990. -V. 40. — P. 238 — 259.

161. Meyer D., Girma J.P. Von Willebrand factor: structure and function. // Thromb. Haemost. 1993, — V. 70. — P. 99 — 104.

162. Milton J.G., Frojmovic M.M. Adrenaline and adenosine diphosphate-induced platelet aggregation require shape change. Importance of pseudopods. // J. Lab. Clin. Med. 1984. — V. 104. — P. 805 — 815.

163. Milton J.G., Frojmovic M.M. Adrenalin and adenosin diphosphate-induced platelet aggregation require shape change. Importance of pseudopodies. // J. Lab. Clin. Med. 1984. — V. 104. — P. 805−815.

164. Moncada S., Palmer R.M.J., Higgs E.A. Nitric oxide: physiology, pathophysiology and pharmacology. // Pharmacol. Rev. 1991, — V. 43. — P. 109 — 142.

165. Moran N., Fitzgerald G.A. Mechanisms of action of antiplatelet drugs. In.: Colman R.W., Hirsh J., Marder V.J., Salzman E.W., eds. Hemostasis and thrombosis: basic principles and clinical practice. 11 Philadelphia: JB Lippincott. 1994. — P. 1623 — 1637.

166. Morris J.C. Kinetics of reaction between aqueous chlorine and nitrogen compounds.- In: Principles and applications of water chemistry (Faust S.D., Hunter J.W., ed).- 1967,-P. 23−51.

167. Mullane K.M., Farnabaio D. Thromboxane synthetase inhibitors reduce infarct size by a platelet-dependent, aspirin sensitive pathway. // Circ. Res. 1988. — V. 62. -P. 668 — 678.

168. Musial J., Radwan J. and Szczeklik A. Aspirin delays thrombin generation in vitro through interaction with platelet phospholipids. // Thromb. Reseach. 1997, — V. 85,-No. 4,-P. 367−368.

169. Nathan C.F., Silverstein S.C., Brukner L.H., Cohn Z.A. Extracellular cytolysys by activated macrophages and granulocytes. Hydrogen peroxide as a mediator of cytotoxicity. // J. Exp. Med.- 1979, — V. 149, — No. 1, — P. 100 113.

170. Nishizuka Y. The role of protein kinase С in cell surface signal transduction and tumor promotion. // Nature. 1984. — V. 308. — P. 693 — 698.

171. O’Brien J.R. Effects of adenosine diphosphate and adrenaline on mean platelet shape. // Nature. 1965. V. 207. — P. 306−307.

172. Packham M.A., Guccione J.P., GreenbergJ. P Release of 14C-serotonine during initial platelet changes induced by thrombin, collagen or A 23 187. //Blood. -1977, — V. 50.- No. 5, — P. 915 926.

173. Park E., Shuller-Levis G., Qwin M. Taurine chloramine inhibits production of nitric oxide and TNF-a in activated RAW 264.7 cell by mechanisms that involve transcriptional and translational events. // J. Immunol. -1995- V. 154- P. 4778−4784.

174. Park E., Schuller-Levis G., Jia J.H., Quinn M. R Preactivation exposure of RAW 264.7 cells to taurine chloramine attenuates subsequent production of nitric oxide and expression of iNOS mRNA. // J. Leukoc. Biol.- 1997, — V. 61.- No. 2, — P. 161−166.

175. Patscheke H. Role of activation in epinephrine-induced aggregation of platelets. // Thromb. Res. 1980. — V. 17. — P. 133−142.

176. Patscheke H., Womer P. Platelet activation detected by turbidimetric shape-change analysis. Differential influence of cytochalasin В and prostaglandin Е. // Tromb. Res. 1978. — V. 12. — No. 3. — P. 485 — 496.

177. Pengo V., Boschello M., Marzari A., et al. Adenosine diphosphate (ADP) induces a-granules release from platelets of native whole blood and is reduced by ticlopidine but not by aspirin or dipyridamole. // Thromb. Haemost. 1986. — V. 56. — P. 147 -150.

178. Prutz W.A. Prutz W.A. Hypochlorous acid interactions with thiols, nucleotides, DNA, and other substrates. // Arch. Biochem. Biophys.- 1996. -V. 332. -No.l.- P. l 10.

179. Pero R.W., Sheng Y., Olsson A., Brungelsson C., Lung-Pero M. Hypohlorous acid/N-chloramines are naturally produced DNA repair inhibition. // Carcinogenesis. -1996,-V. 17.- P. 13−18.

180. Plow E.F., D’Souza S.E., Ginsberg M.H. (85. Consequences of the interaction of platelet membrane glycoprotein GP Ilbllla and its ligands. // J. Lab. Clin. Med. 1992. V. 120. — No. 2. — P. 198 — 204.

181. Popov E.G., Gabbasov Z.A., Gavrilov I. Yu., Pozin E. Ya., Mejlumian A.G. Accumulation and release of acridine derivatives by intact platelets. // Thromb. Res. -1987,-V. 47,-P. 639 645.

182. Puri R.N., Colman R.W. Reocclusion after thrombolytic therapy: strategies for inhibiting thrombin-induced platelet aggregation. // Blood Coagul. — Fibrinolysis. 1993, — V. 4. -P. 465 478.

183. Quinn M.R., Park E., Schuller-Levis G. Taurine chloramine inhibits prostaglandin E2 production in activated RAW 264.7 cells by posttranscriptional effects on iducible cuclooxigenase expression. // Immunol Lett. -1996.- V. 50.- P. 185−188.

184. Radomski M.W., Palmer R.M.J., Moncada S. The role of nitric oxide and cGMP in platelet adhesion to vascular endothelium. // Biochem. Biophys. Res. Comm. -1987. -V. 148. -P. 1482 1489.

185. Radomski M.W., Palmer R.M.J., Moncada S. An L-arginine: nitric oxide pathway present in human platelets regulates aggregation. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990 -V. 87. -P 10 043 — 10 047.

186. Radomski M.W., Palmer R.M.J., Moncada S. The anti-aggregating properties of vascular endothelium: interactions between prostacyclin and nitric oxide. // Brit. J. Pharmacol. 1987. — V. 92, — P. 639 — 646.

187. Rao A.K., Mintz P.D., Lavine S.J. Coagulant activities of platelets in coronary artery disease. // Circulation. 1984. — V. 69. — P. 15 — 21.

188. Rasmussen U.B., Vouret-Craviari V., Jallat S. cDNA cloning and expression of hamster alpha-thrombin receptor coupled to Ca mobilisation. // FEBS Lett. 1991. -V. 288. — P. 123 — 128.

189. Rinder C.S., Student L.A., Bonan J.L. Aspirin does not inhibit adenosine diphosphate-induced platelet alpha-granule release. // Blood. 1993. — V. 82. — P. 505 -512.

190. Roald H.E., Barstad R.M., Kierulf P. Clopidogrel: a platelet inhibitor which inhibits thrombogenesis in non-anticoagulated human blood independently of the blood flow conditions. // Thromb. Haemost. 1994. — V. 71. — P. 655 — 662.

191. Rote W.E., Mu D.X., Lucchesi B.R. Thromboxane antagonism in experimental canine carotid artery thrombosis. // Stroke. 1993. — V. 24. — P. 820 — 828.

192. Roth G.J., Calverley D.C. Aspirin, platelets and thrombosis: theory and practice. // Blood. 1994. — V. 83. — P. 885 — 898.

193. Roth G.J., Stanford N., Majerus P.W. Acetilation of prostaglandin synthase by aspirin. // Proc. Natl. Acad. Sci. 1975. — V. 72. — P. 3073.

194. Roux S.P., Sakariassen K.S., Turitto V.T., et al. Effect of aspirin and epinephrine on experimentally induced thrombogenesis in dogs. // Arterioscler. Thromb. 1991. -V. 11. -P. 1182 — 1191.

195. Rudnick G., Fishkes H., Nelson P.J., Schuldiner S. Evidence for two distinct serotonin transport systems in platelets. // J. Biol. Chem.- 1980.- V. 255.- No. 8. -P. 3638 3641.

196. Ruggeri Z.M. Mechanisms of shear-induced platelet adhesion and aggregation. // Thromb. Haemost. 1993. — V. 70. — P. 119 — 123.

197. Saelman E.U.M., Nieuwenhuis H.K., Hese K.M., et al. Platelet adhesion to collagen types I through VIII under conditions of stasis and flow is mediated by GP Ialla. // Blood. 1994. — V. 83. — P. 1244 — 1250.

198. Sage S.O., Merritt J.E., Hallam T.J., Rink T.J. Receptor mediated calcium entry in fura-2 loaded human platelets stimulated with ADP and thrombin. // Biochem. J. -1989. -V. 258. -P. 923 — 926.

199. Saltzman A.G., Morse В., Whitman M.M., Ivanshchenko Y., Jaye ML, Felder S. Cloning of the human serotonin 5-HT2 and 5-HT1C receptor subtypes. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1991. — V. 181.- P. 1469 — 1478.

200. Santoro S.A. Molecular basis of platelet adhesion to collagen. In: Platelet membrane receptors: molecular biology, immunology, biochemistry, and pathology. (Ed. Jamieson G.A.) New York: Alan R. Liss. — 1988. — P. 291 — 314.

201. Sato Т., Hashizume Т., Fujii T. N-Ethylmaleimide inhibits Ca2f influx induced by collagen or arachidonate on rabbit platelets. // Biochim. Biophys. Acta. 1987. — V. 928. -No. 3,-P. 266−271.

202. Savage В., Shattil S.J., Ruggeri Z.M. Modulation of platelet function through adhesion receptors a dual role of glycoprotein Ilbllla mediated by fibrinogen and GPIb-vWF. //J. Biol. Chem. — 1992. — V. 267. — P. 11 300 — 11 306.

203. Schror K. Antiplatelet drugs. A comparative review. // Drugs 1995. — V. 50. -No. 1. -P. 7−28.

204. Schror К. The basic pharmacology of ticlopidine and clopidogrel. // Platelets1993. -V. 4. -P. 252 -261.

205. Schumacher W.A., Steinbacher Т.Е., Heran C.L. Effects of antithrombotic drugs in a rat model of aspirin-insensitive arterial thrombosis. // Thromb. Haemost. 1993. -V. 69. -P. 509 — 514.

206. Selvaraj R.I., Paul B.B., Strauss R.R., Jacobs A.A., Sbarra A.J. (18. Oxidative peptide cleavage and decarboxylation by the MPO-H202-antimicrobial system. // Infection and immunity.- 1974.- V. 9, — No. 2.- P. 255 260.

207. Sergienko V.I., Vasiliev Yu.B. Electrochemical methods of detoxication for medical use.- Harwood Academic Publishers GmbH.- 1989.- P. 54.

208. Shen Y.C., Hong C.Y. Effect of trilinolein on cyclic nucleotide formation in human platelets: relationship with its antiplatelet effect and nitric oxide synthesis. // Br. J. Pharmacol. 1995. — V. 116. — No. 1. — P. 1644−1648.

209. Siess W. Molecular mechanisms of platelet activation. // Physiol. Reviews. -1989. V. 69. — No. 1.

210. Silk S.T., Wong K.T.H., Marcus A.J. Arachidonic acid releasing activity in platelet membranes: Effects of sulfgydryl-modifying reagents. // Biochemistry 1981 -V. 20, P. 391 — 397.

211. Silverstein R.M., Hager L.P. The chloroperoxidase catalysed oxidation of thiols and disulfides to sulfenyl chlorides. // Biochemistry.- 1974.- V. 13, — No. 25.- P. 5069 — 5073.

212. Simoons M.L., de Boer M.J., van den Brand M.J.B.M., et al. Randomised trial of a GP Ilbllla platelet receptor blocker in refractory unstable angina. // Circulation1994. -V. 89. -P. 596 -603.

213. Skaer R.J. Platelet degranulation.- In: Gordon J.L. (ed.). Platelets in Biology and Pathology. Elsevier.- North Holland Biomedical Press.- 1981.- P. 321 348.

214. Slivka A., LoBuglio A.F. Weiss S.J. A potential role for hypochlorous acid in granulocyte mediated tumor cell cytotoxicity. // Blood.- 1980, — V. 55.- No. 2, — P. 347 — 350.

215. Smith I.B., Ingerman C.M., Silver M.J. Malondialdehyde formation as an indicator of prostaglandin production by human platelets. // J. Lab. Clin. Med. -1976, — V. 88, — No. 1, — P. 167 172.

216. Smith J.W., Piotrowicz R.S., Mathis D. A mechanism for divalent cation regulation of beta 3-integrins. //J. Biol. Chem. 1994. — V. 269. — No. 2. — P. 960−967.

217. Soslau G., Brodsky L, Parker J. Occupancy of P2 purinoceptors with unique properties modulates the function of human platelets. // Biochim. Biophys. Acta. -1993. V. 1177. — No. 2. — P. 199−207.

218. Steen V.M., Holmsen H. Synergism between thrombin and epinephrine in human platelets: different dose-response relationships for aggregation and dense granule secretion. // Thromb. Haemost. 1985. — V. 54. — P. 680 — 683.

219. Stelmaszynska Т., Zgliczynska J.M. Myeloperoxidase of human neutrophilic granulocytes as chlorinating enzyme. // Eur. J. Biochem.- 1974.- V. 45.- P. 305 312.

220. Takahara K., Murray R., Fitzgerald G.A., Fitzgerald D.J. The response to thromboxane A2 analogues in human platelets. Discrimination of two binding sites linked to distinct effector systems. // J. Biol. Chem. 1990. — V. 265. — P. 6836 — 6844.

221. Thomas E.L. Myeloperoxidase, hydrogen peroxide, chloride antimicrobial system: effect of exogenous amines on antibacterial action against E. coli. // Infect. Immunity.- 1979, — V. 25.- N0. 1.- P. 110 116.

222. Thomas E.L., Grisham M.B., Jefferson M.M. Myeloperoxidase dependent effect of amines on functions of isolated neutrophiils. // J. Clin. Invest.- 1983.- V. 72.- No. 2,-P. 441 -454.

223. Thomas E.L., Jefferson M.M., Grisham M.B. Myeloperoxidase catalized incorporation of amines into proteins: role of hypochlorous acid and dichloramines. // Biochemistry. — 1982. — V. 21. — P. 6299 — 6308.

224. Thomas G., Skrinska V.A., Lucas F.V. The influence of glutathione and other thiols on human platelet aggregation. // Thromb. Res. 1986 — V. 44. — P. 859 — 866.

225. Topol E.J. Novel antithrombotic approaches to coronary artery disease. // Am. J. Cardiol. 1995. — V. 75. — P. 27B — 33B.

226. Trip M.D., Cats V.M., van Capelle F.J.L. Vreeken J. Platelet hyperactivity and prognosis in survivors of myocardial infarction. // N. Engl. J. Med. 1990. — V. 322. -P. 1549 — 1554.

227. Tsao P.W., Forsythe M.S., Mousa Sh.A. Dissotiation between the antiaggregatory and anti-secretory effects of platelet integrin ацЬРз (GP Ilb/IIIa) antagonists, C7E3 and DMP 728. // Thromb. Reseach. 1997, — V. 88, — No. 2, — P. 137 146.

228. Uchiyama S., Yamazaki M., Maruyama S., et al. Shear-induced platelet aggregation in cerebral ischemia. // Stroke. 1994. — V. 25. — P. 1547 — 1551.

229. Verhoeven A.J.M., Mommersteeg M.E., Akkerman J.W.N. Comparative studies on the energetics of platelet responses induced by different agonists. // Biochem. J. -1986. -V. 236. -P. 879 887.

230. Verstraete M. Thromboxane synthase inhibition, thromboxane/endoperoxide receptor blockade and molecules with the dual property. // Drugs Today 1993. — V. 29. -P. 221 -232.

231. Verstraete M. New developments in antiplatelet and antithrombotic therapy. // Europ. Heart J. 1995. — V. 16. — Supplem. L. — P. 16 — 23.

232. Verstraete M., Zoldhelyi P. Novel antithrombotic drugs in development. // Drugs.- 1995. V. 49, — No. 6. — P. 856 — 884.

233. Villa S., Colotta F., de Gaetano G., Semeraro N. Arachidonic acid and leukotriene B4 induce aggregation of human peripheral blood mononuclear leukocytes in vitro. // Br. J. of Haematology.- 1984, — V. 58, — No. 1, — P. 137 -146.

234. Vizcaino-Salazar G. Platelet physiology. Advances in platelet reactivity. // Invest. Clin. 1994. -V. 35. -No. 1,-P. 41−62.

235. Ware J.A., Smith M., Salzman E.W. Synergism of platelet aggregating agents. Role of elevation of cytoplasmic calcium. // J. Clin. Invest. — 1987. — V. 80. — P. 267 -271.

236. Weil J.C., Morris J.C. Kinetic studies on the chloramine N-chlormethylamine and N-chlordimethylamine. //J. Amer. Chem. Soc.- 1949.- V. 71.- No. 5, — P. 1664 1671.

237. Weiss S., LoBuglio A.F. Biology of disease: phagocyte generated oxygen metabolites and cellular injury. //Lab. Invest.- 1982, — V. 47.- No. 1.- P. 5 — 18.

238. Weiss S., Slivka A. Monocyte and granulocyte mediated tumor cell destruction: a role for the hydrogen peroxide — myeloperoxidase — chloride system. // J. Clin. Invest.- 1982, — V. 69, — No. 2, — P. 255 — 262.

239. White B.P., Sullivan A.T., Lumley P. Prevention of intracoronary thrombosis in the anaesthetised dog: the importance of thromboxane A2 and thrombin. // Thromb. Haemost. 1994. — V. 71, — P. 366 — 374.

240. White J. G. Electron microscopic studies of platelet secretion. // Prog. Haemost. Thromb. 1974. — V. 2. — P. 49−98.

241. White J. G. Shape change. // Thromb. Diath. Haemorrh. 1974. — V. 60. — P. 159 171.

242. White J.G., Escolar G. The blood platelet open canalicular system a two-way street. //Eur. J. Cell Biol. -1991. -V. 56,-No. 2,-P. 233 — 242.

243. Wiberg N. Lehrbuch der Anorganische Chemil. // Berlin New-York: Walter de Gruyter.- 1985- P. 422−425.

244. Winterbourn C.C. Comparative reactivities of various biological compounds with myeloperoxidase-hydrogen- peroxide-chloride, and similarity of oxidant to hypochlorite. // Вioch. Biophys. Acta -1985- V. 840- P. 204−210.

245. Winterbourn C.C., van den Berg J.J.M., Roitman E., Kuypers F.A. Chlorohydrin formation from unsaturated fatty acids reacted with hypochlorous acid. // Arch. Bioch. Biophys.- 1993- V. 34- P. 63−69.

246. Wright C.E., Tallan H.H., Lin Y.Y. //Ann. Rev. Biochem. 1986. V. 55. P. 427.

247. Wu J. -R., Zhou Z., Bittar E.E. Abolishing with chloramine-T of inactivation in barnacle muscle fibers results in stimulation of ouabain insensitive sodium efflux. // Biochim. et biophys. Acta. Biomembranes. — 1992, — V. 1112, — No. 1.- P. 99 — 104.

248. Wu K.K. Platelet activation mechanisms and markers in arterial thrombosis. // J. Int. Med. 1996. — V. 239. — P. 17−34.

249. Wuthrich C., Deranleau D., A., Dubler D., Luscher E. Human blood platelet secretion: Optical multichannel analyzer measurements using acriflavine as a release indicator. // Biochemistry.- 1984-V. 23- P. 1224−1229.

250. Xiao Z., Theroux P., Levesque J., et al. Platelet aggregation in response to the thrombin receptor agonist peptide in patiens with coronary artery disease. Circulation 1994. — V. 90. -P. 371 — 378.

251. Yamada K, Kubo K, Shuto K, Nakamizo N. Involvment of disulfide-sulfhydryl interaction in anti-platelet actions of KF 4939. // Thromb. Res. -1985, — V. 38.- P. 6169.

252. Zaverio M. Ruggeri The role of von Willebrand factor and fibrinogen in the initiation of platelet adhesion to thrombogenic surfaces. // Thromb. Haemost. 1995. V. 74. No.l. P. 460−463. 225

253. Zgliczynska J.M., Stelmaszynska Т., Ostrowski W., Naskalski J., Sznajd J. Myeloperoxidase of human leukemic leukocytes. Oxidation of aminoacids in the presence of hydrogen. // Eur. J. Biochem.- 1968, — V. 4.- No. 4.- P. 540 547.

254. Zgliczynska J.M., Stelmaszynska Т., Domanski., Ostrowski W. Chloramines as intermediates of oxidation reaction of aminoacids by myeloperoxidase. // Biochem. Biophys. Acta.- 1971, — V. 235, — No. 2.- P. 419 424.

255. Zhou W., Javors M.A., Olson M.S. Platelet activation factor as an intercellular signal in neutrophil-dependent platelet activation. // J. Immunol. 1992. — V. 149. -No. 5. -P. 1763−1769.

Заполнить форму текущей работой