Клетки свиньи и кролика, подобные эмбриональным стволовым: получение из преимплантационных эмбрионов и гаструл и характеристика

Тип работы:
Диссертация
Предмет:
Биологические науки
Страниц:
112


Узнать стоимость новой

Детальная информация о работе

Выдержка из работы

Воспроизведение себе подобных и продолжение рода одна из основных, а может быть и самая основная задача, всех представителей живой природы. Поэтому издревле процессы, способствующие поддержанию жизни на земле, будоражили умы ученых-биологов. За последние 2 столетия, наряду с другими достижениями науки, произошел заметный прорыв в изучении проблемы наследственности и изменчивости. Так в 1838−39гг. Матиас Шлейдан и Теадор Шванн обобщили накопившиеся данные и сформулировали клеточную теорию [18], а в 1855 г. Рудольф Вирхов расширил ее, провозгласив: «Omnis cellula е се11и1а"(«каждая клетка из клетки& quot-) [7]. Бовери и Флеминг в 1879 г. сообщили об открытии механизмов деления соматических (митоз), а вслед за ними Вейсман в 1887 г. и половых (мейоз) клеток. Георг Мендель (1856г.) открыл материальность наследственной информации, а в 1909 г. датский ботаник Иогансон дал название этим материальным единицам наследственности — ген [7]. Уникальные работы американского генетика Моргана на дрозофилах в 1912 г. показали системность расположения генов в хромосомах [7]. В 1953 г. Френсис Хари Комптон Крик и Джеймс Девай Уотсон открыли двойную спираль молекулы ДНК. Грандиозным событием, которое до сих пор обсуждается не только биологами всего мира, но, в последнее время, и всем человечеством, вплоть до парламентариев и глав государств, явились две независимые публикации данных в 1981 г. об открытии плюрипотентных клеток из эмбрионов мыши, впоследствии, названными эмбриональными стволовыми клетками (ЭСК), авторами которых были М. Кауфман и М. Эванс [56] и Г. Мартин [74]. В 1999 г. журнал Science признал это открытие третьим по значимости событием в биологии после расшифровки двойной спирали ДНК и программы & laquo-Геном человека& raquo- [16].

Все эти эпохальные события приоткрыли завесу неизвестности в изучении наследственности, изменчивости, регуляции процессов при внутриутробном формировании нового организма и многих других научных проблем. Но возник ряд других актуальных вопросов. Как происходит механизм дифференциальной экспрессии генетического материала, и каким образом из одной примитивной клетки зиготы формируется организм животного с высоко специфичными клеточными системами органов и тканей? На каких стадиях пре- и постнатального развития возможно выделение эмбриональных стволовых клеток, и какими свойствами они обладают? Какие факторы окружающей среды способствуют дифференцировке стволовых клеток, а какие удерживают их в неизмененном виде? Почему некоторые из них обладают неограниченной потенцией к образованию новых тканей вплоть до целого эмбриона, а другие монопотентны?

В настоящее время, эмбриональные стволовые клетки (ЭСК) млекопитающих, в том числе и человека, являются объектом фундаментальных и практических исследований ведущих научно-исследовательских институтов развитых стран мира. Актуальность этой проблемы отражается не только в постановке таких важных практических задач, как необходимость увеличения продуктивности животных и лечение бесплодия у человека. Эмбриональные стволовые клетки являются незаменимой модельной системой для изучения процессов дифференцировки при эмбриогенезе, используются как источник тотипотентных ядер при получении трансгенных и клонированных животных. В этой связи такие клетки незаменимы при получении животных с заранее запрограммированным генотипом, в том числе при создании животных устойчивых к вирусным, прионовым и другим заболеваниям. Так же ЭСК, несомненно, найдут широкое применение при in vitro изучении вирусов, влияющих на эмбриональное развитие. В настоящее время эти клетки широко применяют в генетической и трансплантационной терапии. Примордиальные половые зародышевые клетки (ППЗК), разновидность ЭСК, дают ответы на многие вопросы, возникающие при изучении гаметогенеза. Успех в решение этих научных проблем напрямую зависит от дальнейшего усовершенствования методов выделения и культивирования in vitro ЭСК (в том числе и ППЗК) млекопитающих.

Таким образом, изучение ЭСК млекопитающих представляет интерес для решения многих задач биотехнологии, является актуальным и многообещающим для клеточной и генетической инженерии, а также биологии развития млекопитающих.

Цель и задачи исследований. Целью наших исследований было получение клеток свиньи и кролика, подобных эмбриональным стволовым, из зародышей на разных стадиях развития и их характеристика. В связи с этим был поставлен ряд задач: получить клетки с ЭС-подобным фенотипом из преимплантационных эмбрионов свиньи и охарактеризовать их- изучить влияние различных факторов на длительное культивирование преимплантационных эмбрионов кролика- сравнить различные методические приемы получения ЭС-подобных клеток кролика из бластоцист- выделить ППЗ-подобные клетки кролика из эмбрионов на стадии гаструляции- охарактеризовать ЭС-подобные клетки кролика.

Научная новизна. Впервые в России получены клетки свиньи с ЭС-подобной морфологией путем диссоциации бластомеров краткосрочно культивируемых морул.

Впервые изучено влияние девяти монослоев клеток (первичной культуры клеток Сертоли свиньи, STO (перевиваемой линии эмбриональных мышиных фибробластов), ЗТЗ BalbC (линии эмбриональных фибробластов мыши), NIH ЗТЗ (культуры фибробластоподобных клеток эмбриона мыши), RUF (эпителиальных клеток яйцевода кролика), МЭФ (первичных эмбриональных фибробластов мыши), КЭФ (первичных эмбриональных фибробластов кролика), СПЭВ (перевиваемой линии эпителиоподобных клеток почки плода свиньи), FBT (перевиваемой линии эпителиоподобных клеток трахеи плода коровы), используемых в качестве фидерных слоев, и двух кондиционированных сред из первичной культуры клеток Сертоли свиньи и BRL (перевиваемой линии клеток печени крысы) на эффективность длительного культивирования бластоцист кролика.

Показано, что краткосрочно культивируемые вылупляющиеся бластоцисты (36−48 ч.) дают лучшие результаты для получения и длительного культивирования ЭС-подобных клеток кролика по сравнению с длительно культивируемыми эмбрионами (7 сут.).

Впервые получены и охарактеризованы ППЗ-подобные клетки кролика из эмбрионов на стадии гаструляции. Дана сравнительная характеристика механического и ферментативного методов получения этих клеток. Разработан метод изоляции ППЗ-подобных клеток кролика из гаструл для получения и культивирования ЭС-подобных клеточных штаммов без использования заранее приготовленных фидерных слоев.

Плюрипотентность полученных штаммов ЭС-подобных клеток кролика доказана способностью дифференцироваться в культуре и образовывать эмбриоидные тела при длительном культивировании клонов с высокой плотностью клеток или при суспензионном культивировании.

Практическая ценность работы. В результате проведенных исследований отработаны методические приемы, позволяющие получать клетки свиньи и кролика с ЭС-подобным фенотипом, которые могут быть использованы в получении трансгенных и клонированных животных, в исследованиях патогенных факторов, влияющих на эмбриональное развитие. Эти условия возможно могут быть использованы при получении, культивировании и манипуляциях с ЭС-подобными клетками человека. Получение ЭСК и ЭС-подобных клеток важно для пополнения Российской Коллекции клеточных культур сельскохозяйственных и промысловых животных (СХЖ РАСХН).

Основные положения, выносимые на защиту: методы выделения клеток с ЭС-подобным фенотипом из эмбрионов свиньи и кролика- культурально-морфологическая характеристика клеток свиньи и кролика, подобных эмбриональным стволовым- зависимость развития длительно культивируемых бластоцист кролика от ростовых факторов- влияние возраста культур бластоцист на эффективность получения ЭС-подобных клеток кролика- методы выделения ППЗ-подобных клеток из гаструл кролика. Апробация работы. Результаты исследований доложены на Ученых Советах

ВИЭВ, Москва, 2001−2002гг.- 2-ой Международной научной конференции & laquo-Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных& raquo-, ВИЖ, Дубровицы, 2002 г.- 17-ом рабочем совещании & laquo-Консервация генетических ресурсов& raquo-, Пущино, 2002 г.- Международной научной конференции & laquo-Современные проблемы и достижения клеточной биотехнологии и иммунологии& raquo-, ВИЭВ, Москва, 2003 г.- межлабораторном совещании ВИЭВ, Москва, 2003 г.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 3 научные работы, 1 находится в печати.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 112 стр., содержит 9 табл., 29 рис. (в т.ч. 19 фотографий, 3 диаграммы), состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты, обсуждение, выводы, практические предложения, список литературы. Список литературы включает 123 библиографических источника, в т. ч. 92 на английском языке.

5 ВЫВОДЫ

1. Отработаны методические приемы по выделению клеток свиньи с ЭС-подобным фенотипом и получены 5 клонов таких клеток посредством диссоциации бластомеров морул с последующим культивированием их на фидерном слое, представленном эмбриональными фибробластами мыши (линия STO). Клетки характеризовались малым размером (d-Юмкм) и высоким ядерно-цитоплазмотическим соотношением (крупное сферическое ядро и узкий ободок цитоплазмы).

2. Изучено влияние на эффективность длительного культивирования бластоцист кролика 9 культур клеток (первичной культуры клеток Сертоли свиньи, STO (перевиваемой линии эмбриональных мышиных фибробластов), ЗТЗ BalbC (линии эмбриональных фибробластов мыши), NIH ЗТЗ (культуры фибробластоподобных клеток эмбриона мыши), RUF (эпителиальных клеток яйцевода кролика), МЭФ (первичных эмбриональных фибробластов мыши), КЭФ (первичных эмбриональных фибробластов кролика), СПЭВ (перевиваемой линии эпителиоподобных клеток почки плода свиньи), FBT (перевиваемой линии эпителиоподобных клеток трахеи плода коровы), используемых в качестве фидерных слоев, и двух кондиционированных сред из первичной культуры клеток Сертоли свиньи и BRL (перевиваемой линии клеток печени крысы). Установлено, что максимальное количество бластоцист развивается при использовании питательных слоев, представленных первичными эмбриональными фибробластами мыши (35,7%) и кролика (33,3%).

3. Выявлено влияние возраста культур бластоцист на эффективность получения ЭС-подобных клеток кролика. Из 30 зародышей (с удаленной зоной пеллюцида), культивируемых in vitro в течение 7 сут., успешно развились 7 (23,3%) и был получен один клеточный штамм с ЭС-подобной морфологией. Краткосрочное культивирование эмбрионов (36−48 ч.) до стадии вылупления позволило увеличить количество развивающихся бластоцист кролика на 22,2%, а при диссоциации этих зародышей получить 6 штаммов клеток с ЭС-подобной морфологией.

4. Получены ППЗ-подобные клетки из гаструл кролика посредством механической и ферментативной диссоциаций. Использование обоих методов оказалось одинаково пригодным в этой связи. При последующем культивировании таких клеток на фидерном слое, представленном собственными митотически активными первичными эмбриональными фибробластоподобными клетками, получены 4 штамма клеток с ЭС-подобным фенотипом.

5. ЭС-подобные клетки кролика характеризовались определенными культурально-морфологическими признаками: имели небольшие размеры (d~10−15 мкм), шарообразную форму, высокое ядерно-цитоплазмотическое соотношение, росли колониями, интервал пассирования составлял 4−5 сут., при индукции к дифференцировке образовывали фибробласто-, нейроно- и эпителиоподобные клетки, & laquo-простые»- и & laquo-цистические»- эмбриоидные тела. Клетки были способны поддерживать эмбриональный фенотип в течение 3−4 пассажей.

6 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Рекомендуется для выделения и культивирования ЭС-подобных клеток свиньи использовать фидерные слои из STO-клеток.

2. Для эффективного длительного культивирования бластоцист кролика необходимо использовать фидерные слои из первичных эмбриональных фибробластов мыши (МЭФ) и кролика (КЭФ).

3.С целью получения ЭС-подобных клеток из бластоцист кролика следует использовать краткосрочно культивируемые эмбрионы (36−48 ч.) до стадии вылупления и культивирование полученных клеток на фидерных слоях из МЭФ и КЭФ.

4. Для получения ППЗ-подобных клеток кролика их эмбрионов на стадии гаструляции рекомендуется использовать как ферментативную, так и механическую дезагрегации.

5. Для культивирования ППЗ-подобных клеток кролика с целью получения колоний ЭС-подобных клеток пригодны собственные митотически активные эмбриональные фибробластоподобные клетки.

Показать Свернуть

Содержание

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Стволовые клетки.

1.2 Региональные стволовые клетки.

1.3 Эмбриональные стволовые клетки (ЭСК).

1.4 ЭСК сельскохозяйственных животных.

1.5 Использование фидерных слоев для длительного культивирования эмбрионов сельскохозяйственных животных in vitro.

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1 Приборы и оборудование.

2.2 Культуральная посуда.

2.3 Питательные среды и растворы.

2.4 Культуры клеток.

2.5 методы Культивирования клеток.

2.5.1 Приготовление фидерных слоев из перевиваемых эмбриональных фибробластов мыши линии STO.

2.5.2 Приготовление фидерных слоев, представленных первичными клетками Сертоли свиньи.

2.5.3 Приготовление фидерных слоев из перевиваемой клеточной линии тестикул поросенка (ПТП).

2.5.4 Пригототовление фидерных слоев из клеток СПЭВ.

2.5.5 Приготовление фидерных слоев из клеток FBT.

2.5.6 Приготовление фидерных слоев клеток ЗТЗ BalbC.

2.5.7 Приготовление фидерных слоев из клеток NIH ЗТЗ.

2.5.8 Культивирование клеток BRL.

2.5.9 Приготовление фидерных слоев, представленных клетками RUF.

2.5. 10 Культивирование первичных эмбриональных фибробластов мыши и кролика для приготовления фидерных слоев.

2.5. 10.1 Получение первичной культуры эмбриональных фибробластов.

2.5. 10.2 Культивирование первичных эмбриональных фибробластов мыши и кролика (МЭФ и КЭФ).

2.6 Техника получения преимплантационных эмбрионов свиньи и кролика.

2.7 Получение эмбрионов кролика на стадии гаструляции.

2.8 Оценка качества преимплантационных эмбрионов.

2.9 Оценка качества эмбрионов на стадии гаструляции.

2. 10 Оценка колоний ЭС-подобных клеток.

2. 11 Приготовление кондиционированных сред.

2. 12 Желатинизирование пластиковой посуды.

2. 13 Силиконизирование посуды.

2. 14 Уравновешивание парафинового масла со средой.

2. 15 Определение жизнеспособности клеток.

2. 16 Подсчет посевной концентрации клеток.

2. 17 Подсчет итоговой концентрации клеток.

2. 18 Подсчет индекса пролиферации.

3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1 Получение клеток свиньи с ЭС-подобной морфологией.

3.1.1 Характеристика биологического материала.

3.1.2 Влияние стадии эмбриогенеза и фидерных слоев клеток на получение колоний ЭС-подобных клеток свиньи.

3.1.3 Характеристика ЭС-подобных клеток свиньи.

3.2 Получение из бластоцист кролика клеток с фенотипом, подобным эск, и их характеристика.

3.2.1 Длительное культивирование преимплантационных эмбрионов кролика in vitro на фидерных слоях.

3.2.2 Влияние некоторых ростовых факторов на эффективность получения клеток кролика с ЭС-подобной морфологией из длительно культивируемых бластоцист.

3.2.3 ВыделениеЭС-подобных клеток из бластоцист кролика.

3.2.4 Влияние продолжительного культивирования бластоцист на получение ЭС-подобных клеток кролика.

3.2.5 Культурально-морфологическая характеристика ЭС-подобных клеток кролика в культуре.

3.3 Получение от эмбрионов на стадии гаструляции ППЗ-подобных клеток кролика и их характеристика.

3.3.1 Сравнение способов получения ППЗ-подобных клеток кролика.

3.3.2 Характеристика первичных культур клеток кролика, выделенных из гаструл.

4 ОБСУЖДЕНИЕ.

5 ВЫВОДЫ.

6 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Список литературы

1. Абрамян Д. С., Глебов O.K. Внутриклональная гетерогенность и нестабильность клеток китайского хомячка (СНО-К1) по чувствительности к ультрафиолетовому свету и устойчивости к 8-азагуанину. // Цитология, 1981, Т. 23, N. 9, с. 1031−1040.

2. Алешков С. Б., Устав М. Б., Баев А. А. Экспрессия кДНК тканевого активатора плазминогена человека в культуре человеческих клеток, направляемая различными эукариотическими промоторами. // ДАН СССР, 1989, Т. 309, N. 3, с. 721−724.

3. Алынтейн А. Д. Вирусные инфекции и генетическая инженерия. // Биотехнология, 1987, Т. З, N. 3, с. 276−282.

4. Васильева С. Г., Васильев И. М. Влияние стадии развития и условий культивирования эмбрионов коров и мышей на получение ES-подобных клеток. // Онтогенез, 1995, Т. 26, N. 3, с. 206−212.

5. Гилберт С. Биология развития: В 3-х т. М.: Мир, 1995.

6. Глебов O.K. Генетическая трансформация соматических клеток. Д.: Наука, 1989. -350с.

7. Грин Н., Стаут У., Тейлор Д. Биология: В 3-х т. М.: Мир, 1990.

8. Животная клетка в культуре. Методы и применение в биотехнологии. / Под общей редакцией Дьяконова Л. П., Ситькова В. И. М.: Компания спутник+, 2000. — 400с.

9. Ю. Зеленина И. А., Семенова М. Л., Алимов А. А., Колесников В. А.

10. Использование высокоскоростной механической инъекции для переноса чужеродной ДНК в ранние эмбрионы мышей. // Генетика, 1991, Т. 27, N. 12, с. 2182−2186.

11. Курило Л. Ф. Некоторые этические вопросы технологии эмбриональных стволовых клеток. // Пробл. репрод., 2000, № 3, с. 6−12.

12. Материалы научного совещания, посвещенного 125-летию со дня рождения А. А. Максимова. С. -Петербург, 1999.

13. Николаенко Н. С., Садофьев Л. А., Кухарева Л. В. и др. Сравнительное исследование состава белков внеклеточного матрикса культивируемых нормальных и трансформированных фибробластов крысы. // Цитология, 1996, Т. 38, N. 2, с. 229.

14. Н. Полежаева И. А. Получение, генетическая трансформация и использование эмбриональных стволовых клеточных линий. Автореф. дис. канд. биол. наук. -М. ВИЭВ, 1993. -25с.

15. Приданцева Т. А. Выделение и характеристика примордиальных половых зародышевых клеток свиньи. Дис. канд. биол. наук. — Дубровицы, 2001. -110л.

16. Репин B.C. Эмбриональная стволовая клетка: от фундаментальных исследований в клинику. // Патол., физиол. и эксп. тер. 2001, № 2, с. 3−8.

17. Репин B.C., Сухих Г. Т. Медицинская клеточная биология. М.: Бэн-БиМ, 1998. -199с.

18. Савченкова И. П. Создание модельных систем культур клеток млекопитающих для решения проблем биологии и биотехнологии. -Дис. докт. биол. наук. Дубровицы, 1997. — 279 л.

19. Савченкова И. П. Эмбриональные стволовые клетки в биологии: настоящее и будущее. Дубровицы, 1999. — 95с.

20. Савченкова И. П., Сергеев Н. И., Айтбаев Н. Е. Сравнительный анализ развития предимплантационных эмбрионов кролика на различных монослоях соматических клеток. // Цитология, 1994, N. 9/10, с. 156−161.

21. Савченкова И. П., Сергеев Н. И., Шихов И .Я., Айтбаев Н. Е. Экспрессия гена lac-Z E. coli в культуре клеток сельскохозяйственных животных. / Тезисы докладов. Новые направления биотехнологии. -Пущино, 1994, с. 144.

22. Селюгин М. А. Получение ЭС-подобных клеток свиньи и их культурально-морфологическая характеристика. // Доклады РАСХН, 2003, N. 1, с. 33−35.

23. Семенова-Тянь-Шанская А. Г. Первичные половые клетки зародышей человека в период миграции к зачаткам гонад. // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 1969, Т. 56, № 6, с. 3−8.

24. Семенова-Тянь-Шанская А. Г. Первичные половые клетки зародышей высших позвоночных и человека ранних стадий развития. // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 1971, Т. 60, № 6, с. 106−116.

25. Семенова-Тянь-Шанская А. Г. Происхождение, дифференцировка и миграция гоноцитов у ранних зародышей человека. Дис. канд. биол. наук. -Л., 1972.- 146 с.

26. Семенова-Тянь-Шанская А. Г. Цитологические особенности гоноцитов в ходе их миграции у ранних эмбрионов крыс. // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 1976, Т. 71, № 2, с. 52−58.

27. Семенова-Тянь-Шанская А. Г. Изменение ядер гоноцитов на ранних этапах их дифференцировки у ранних зародышей человека. // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 1978, Т. 74, № 1, с. 91−97.

28. Томилин Н. В. Новые системы генетической трансформации соматических клеток млекопитающих. // Биотехнология, 1987, Т. З, N. 3, с. 343−351.

29. Томилин Н. В., Глебов O.K., Михайлов Б. М. Экспрессия в трансформантных ТК5+0 клетках китайского хомячка бактериального гена бетта-лактомазы. //Цитология, 1985. Т. 27. N. 6, с. 688−693.

30. Филатов Ф. П., Тугизов Ш. М., Савченкова И. П. и др. Рекомбинантный поверхностный белок вируса гепатита В, экспонирующий иммунодоминанту мембранного белка вируса ВИЧ1. // ДАН, 1992, Т. 327, N1, с. 172−175.

31. Фодор И. И., Черное В. И., Бендукидзе Л. Ф., Альштейн А. Д. Живые рекомбинантные вакцины новое направление в биотехнологии. // Биотехнология, 1987, Т. З, N. 3, с. 276−282.

32. Anderson G.B. Isolation and use embryonic stem cells from livestock species. -Animal Biotechnology, 1992, V. 3, N. l, p. 165−175.

33. Askew G.R., Doetschman Т., Lingrel J.B. Site-directed point mutations in embryonic stem cells: a gene-targeting tag-and-exchange strategy. Mol. Cell. Biol., 1993, V. 13, p. 4115−4124.

34. Axelrod H.R. Embryonic stem cell lines derived from blastocysts by a simplified technique. Dev. Biol, 1984, V. 101, p. 225−228.

35. Barbosa J.A., Kamarck M.E., Biro P.A. et al. Identification of human genomic clones coding the major histocompatibility antigenes HLA-A2 and HLA-B7 by DNA-mediated gene transfer. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1982, V. 79, p. 6327−6331.

36. Baribault H., Kemler R. Embryonic stem cell culture and gene targeting in transgenic mise. Mol. Biol. Med., 1989, V. 6, p. 481−492.

37. Behr J.P. Cene transfer with synthetic cationic amphiphiles: Prospects for gene therapy. Bioconjugate Chemistry, 1994, V. 5, N. 5, p. 382−389.

38. Bernard H.U., Krammer G., Rowekamp W.G. Construction of a fusion gene that confers resistance against hygromycin В to mammalian cells in culture. Exper. Cell Research, 1985, V. 158, p. 237−243.

39. Betthauser J., Forsberg E., Augenstein M. et al. Production of cloned pigs fromin vitro systems. Nature, 2000, V. 18, N. 10, p. 1055−1059.

40. Bradley A., Ramirez-Solis R., Zheng H. et al. Genetic manipulation of the mouse via gene targeting in embryonic stem cells. Wiley, West Sussex. 1992, p. 256−276.

41. Browne M.J., Tyrrell A.W., Chapman C.G. Isolation of human tissue-type plasminogen activator genomic DNA clone and its expression in mouse cells. -Gene, 1985, V. 33, N. 3, p. 279−284.

42. Buehr M., McLaren A. Isolation and culture of primordial germ cells. -Methods Enzymol. 1993, V. 225, p. 58−77.

43. Camerini-Otero R.D., Kucherlapati R. Right on target. New. Biol., 1990, V. 2, p. 327−341.

44. Campbell K., McWhir J., Ritchie В., Wilmut I. Production of live lambs following nuclear transfer of cultured embryonic disc cells. Theriogenology, 1995, V. 42, p. 181.

45. Campbell K.H., McWhir J., Ritchie W.A., Wilmut I. Sheep cloned by nuclear transfer from a cultured cell line. Nature, 1996, V. 7, p. 6569.

46. Chen L.R., Shiue Y.L., Bertolini L. et al. Establishment of pluripotent cell lines from porcine preimplantation embryos. Theriogenology, 1999, V. 52, N. 2, p. 195 212.

47. Dalman M.J., Lamb J.R. Hematopoietic and lymphoid cell culture. British J. of Hematology, 2000, V. lll, p. 1263.

48. De-Felici M., Pesce M. Growth factors in mouse primordial germ cell migration and proliferation. Prog. Growth Factor Res. 1994, V. 5, p. 135−143.

49. De-Groot N., Hochberg A. Gene impriting during placental and embryonic development. Mol. Reprod. Dev., 1993, V. 36, p. 390−406.

50. Eistetter H.R. Pluripotent embryonal stem cell lines can be established from disaggregated mouse morulae. Dev. Grouth Differ, 1989, V. 31, p. 275−282.

51. Evans M.J., Kaufman M.H. Establishment in culture of pluripotential cells from mouse embryos. Nature, 1981, V. 292, p. 154−155.

52. Evans M.J., Notarianni E., Laurie S., Moor R.M. Derivation and preliminaiy characterization of pluripotent cell lines from porcine and bovine blastocysts. -Theriogenology, 1990, V. 33, p. 125−128.

53. Flechon J.E., Notarianni E., Laurie S. et al. Characterization of ovine and porcine embryonic stem cells. J. Reprod. Fertil. Abstr., 1990, V. 6, p. 25.

54. Gilbert S.F., Raunio A.M. Embryology constructing the organism. -Sunderland, USA: «Sinauer associates». 1997.

55. Giles J.R., Yang X., Mark W., Foote R. Pluripotency of cultured rabbit inner cell mass cells detected by isozyme analysis and eye pigmentation of fetuses following injection into blastocysts or morulae. Mol. Reprod. and Dev., 1993, V. 36, p. 130−138.

56. Goff AK, Smith LC. Effect of steroid treatment of endometrial cells on blastocyst development during co-culture. Theriogenology, 1998, V. 49, N. 5, p. 1021−1030.

57. Graves K.H., Moreadith R.W. Derivation and characterization of putative pluripotential embryonic stem cells from preimplantation rabbit embryos. Mol. Reprod. and Development, 1993, V. 36, p. 424−433.

58. Kaufman M.H., Robertson E.J., Handyside A.H., Evans M.J. Establishment of pluripotential cell lines from haploid mouse embryos. Embryol. Exp. Morphol, 1983, V. 73, p. 249−261.

59. Kennelly J.J., Foote R.H. Superovulatory response of pre and postpubertal rabbits to commercially available gonadotrophins. J. Repr. Fertil., 1965, V. 9, p. 177 188.

60. Kirschstein R., Skirboll L.R. Stem cells: scientific progress and future research directions. NIH, Bethesda. — 2001.

61. Koshimizu U. Retinoic acid is a potent growth activator of mouse primordial germ cells in vitro. Dev. Biol., 1995, V. 168, p. 683−685.

62. Kothary R.K., Allen N.D., Barton S.C., Norris M.L., Sorani M.A.H. Factors affecting cellular mosaicism in the expression of a lac-Z transgene in two cell stage mouse embryos. Biochem. Cell. Biol., 1992, V. 70, p. 1097−1104.

63. Kuzan F.B., Wright R.W. Jr. Blastocyst expansion, hatching, and attachment of porcine embryos co-cultured with bovine fibroblasts in vitro. Anim. Reprod. Sci., 1982, V. 5, p. 57−63.

64. Lebkowski J.S., Gold J., Xu C. et al. Human embryonic stem cells: culture, differentiation, and genetic modification for regenerative medicine applications. -Cancer, 2001, V. 7, N. 2, p. 83−93.

65. Leichthammer F., Brem G. In vitro culture and cryopreservation of farm animals primordial germ cells. Theriogenology, 1990, V. 33, N. l, p. 272.

66. Martin G. Isolation of pluripotent cell line from early mouse embryos cultured in medium conditioned by teratocarcinoma stem cell. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1981, V. 78, p. 7634.

67. Martin G.R., Lock L.F. Pluripotent cell lines derived from early mouse embryos cultured in the medium conditioned by teratocarcinoma stem cells. Gold Spring Harbor Conference on Cell Proliferation. 1983, V. 10, p. 635−663.

68. McMahon A.P., Bradley A. The Wnt-1 (int-1) proto-oncogene is required for development of a larch region or the mouse brain. Cell, 1990, V. 62, p. 1073−1085.

69. Mitalipova M., Beyhan Z., First N.L. Pluripotency of bovine embryonic cell line derived from precompacting embryos. Cloning, 2001, V. 3, N. 2, p. 59−67.

70. Moore K., Piedrahita J.A. Effects of heterologous hematopoietic cytokines on in vitro differentiation of cultured porcine inner cell masses. Mol. Reprod. Dev., 1996, V. 45, N. 2, p. 139−144.

71. Park J.S., Han Y.M., Lee C.S. et al. Improved development of DNA-injected bovine embryos co-cultured with mouse embryonic fibroblast cells. Anim. Reprod. Sci., 2000, V. 28, N. 59, p. 13−22.

72. Park T.S., Han J.Y. Derivation and characterization of pluripotent embryonic germ cells in chicken. Mol. Reprod. Dev., 2000, V. 56, N. 4, p. 475−482.

73. Paton A.C., Kollins W.P. Proceses of differentiation in granulosa cells. -Molec. Reproduc. and Devel., 1994, V. 40, p. 987−996.

74. Piedrahita J.A., Anderson G.B., Bon Durant R.H. Influence of feeder layer type on the efficiency of isolation of porcine embryo derived cell lines. Theriogenology, 1990, V. 34, p. 865−877.

75. Piedrahita J.A., Anderson G.B., Bon Durant R.H. On the isolation of embryonic stem cells: Comparative behavior of murine, porcine and ovine embryos. -Theriogenology, 1990a, V. 34, p. 877−879.

76. Piedrahita J.A., Guillespie L., Maeda N. Establishing an embryonic stem (ES) cell system utilizing hamster embryos. Biol. Reprod. Suppl., 1990c, V. 42, p. 175.

77. Piedrahita J.A., Moor K., Oetama B. et al. Generation of transgenic porcine chimeras using primordial germ cell-derived colonies. Biol, of reprod, 1998, V. 58, p. 1321−1329.

78. Polejaeva I.A. Cloning pigs: advances and applications. Reprod. Suppl., 2001, V. 58, p. 293−300.

79. Rexroad C.E. Jr., Powell A.M. Development of ovine embryos co-cultured on oviductal cells, embryonic fibroblasts, or STO cell monolayers. Biol. Reprod., 1993, V. 49, N. 4, p. 789−793.

80. Robertson E.J. Teratocarcinomas and embryonic stem cells: a practical approach. IRL Press. Oxford. 1987.

81. Saito S., Strelchenko N., Niemann H. Bovine embryonic stem cell like cell lines cultured over several passages. -Roux. Arch. Dev. Biol., 1992, V. 201, p. 134−141.

82. Sands A., Lawrence A., Donehower, Bradley A. Gene-targeting and the p53 tumor-suppressor gene. Mutation Research., 1994, V. 307, p. 557−572.

83. Savchenkova I., Sergeev N., Bulla J., Brem G. Derivation of embryonic stem (ES) cell like cells from rabbit blastocysts. The 1995 Annual Meeting of Europen Embryo Transfer Association (A.E.T.E.), 1995, p. 238.

84. Schoonjans L., Albright G.M., Li J.L. et al. Pluripotential rabbit embryonic stem (ES) cells are capable of forming overt coat color chimeras following injection into blastocysts. Mol. Reprod. Dev., 1996, V. 45, N. 4, p. 439−443.

85. Shamblott M.J., Axelman J., Wang S., et al. Derivation of pluripotent stem cellsfrom cultured human primordial germ cells. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1998, V. 95, p. 13 726−13 731.

86. Shim H., Guterrez-Adan A., Chen L.R. et al. Isolation of pluripotent stem cells from cultured porcine primordial germ cells. Biol. Reprod., 1997, V. 57, N. 5, p. 1089−1095.

87. Smith A.G., Heath J.K., Donaldson D.D. et al. Inhibition of pluripotential embryonic stem cell differentiation by purified polypeptides. Nature, 1988, V. 336, p. 688−690.

88. Smith A.G., Hooper M.L. Buffalo rat liver cells produce a diffusible activity with inhibits the differentiation of murine embryonal carcinoma and embryonic stem cells. Dev. Biol., 1987, V. 121, p. 1−9.

89. Smith L.C., Wilmut I. Influence of nuclear and cytoplasmic activity on the development in vivo of sheep embryo after nuclear transplantation. Biol. Reprod., 1989, V. 40, p. 1027−1035.

90. Stice S., Strelchenko N., Betthauser J. Bovine pluripotent embryonic cells contribute to nuclear transfer and chimeric fetuses. Theriogenology, 1994, V. 41, p. 301.

91. Strauer B.E., Brehm M., Zeus T. et al. Repair of infarcted myocardium by autologous intracoronary mononuclear bone marrow cell transplantation in humans. -Circulation, 2002, V. 106, p. 1913−1918.

92. Stringfellow D.A., Gray B.W., Toivio-Kinnucan M. et al. A continuous cell line established from a preimplantation bovine embryo. Theriogenology, 1991, V. 33, p. 901−913.

93. Strojek R.M., Reed M.A., Hoover J.L., Wagner Т.Е. A method for cultivationg morfologically undifferentiated embryonic stem cells from porcine blastocysts. -Theriogenology, 1990, V. 33, N. 4, p. 901−913.

94. Sukoyan M., Vatolin S., Golubitsa A. et al. Embryonic stem cells derived from morulae, inner cell mass and blastocysts of mink: comparisons of their pluripotencies. -Mol. Reprod. and Develop., 1993, V. 36, p. 148−158.

95. Talbot N.C., Caperna Т.J., Wells K.D. The PICM-19 cell line as an in vitro model of liver bile ductules: effects of cAMP inducers, biopeptides and pH. Cells tissues organs., 2002, V. 171, N. 2−3, p. 99−116.

96. Talbot N.C., Powell A.M., Garrett W.M. Spontaneous differentiation of porcine and bovine embryonic stem cells (epiblast) into astrocytes or neurons. In vitro cell dev. boil, anim., 2002, V. 38, N. 4, p. 191−197.

97. Talbot N.C., Rexroad C.E., Pursel V.G., Powell A.M. Alkaline phosphatase staining of pig and sheep epiblast cells in culture. Mol. Reprod. Dev., 1993, V. 36, N. 2, p. 139−147.

98. Talbot N.C., Rexroad C.E., Pursel V.R. et al. Culturing the epiblast cells of the pig blastocyst in vitro. Cell. Dev. Biol., 1993, V. 29A, p. 543−554.

99. Tateishi-Yuyama E., Matsubara H., Murohara T. et al. Therapeutic angiogenesis for patients with limb ischaemia by autologous transplantation of bone-marrow cells: a pilot study and a randomised controlled trial. Lancet, 2002, V. 360, 427−435.

100. Thomson J.A., Itskovitz-Eldor J., Shapiro S.S. et al. Embryonic stem cell lines derived from human blastocists. Science, 1998, V. 228, N. 5391, p. 1145−1147.

101. Tsuchiya Y., Raasch G.A., Brandes T.L. et al. Isolation of ICM-derived cell colonies from sheep blastocysts. Theriogenology, 1994, V. 41, p. 321.

102. Vasil’ev I.M., Vasil’eva S.G. The factors influencing the isolation of pig embryonic stem cells. Ontogenez, 1995, V. 26, N. 3, p. 201−205.

103. Vasil’eva S.G., Prelle K., Muller S. et al. Isolation and long-term cultivation of rabbit embryonic stem cells. Ontogenez, 1998, V. 29, N. 5, p. 347−353.

104. Walker S.K., Heard T.M., Seamark R.F. In vitro culture of sheep embyos without co-culture: successes and perspectives. Theriogenology, 1992, V. 37, p. 111

105. Wheeler M.B. Development and validation of swine embryonic stem cells: a review. Reprod. Fertil. Dev, 1994, V. 6, p. 563−568.

106. Willadsen S.M. Nuclear transplantation in sheep embryos. Nature (London), 1986, V. 320, p. 63−65.

107. Williams R.L., Hilton D.J., Pease S. et al. Myeloid leukaemia inhibitory factor maintains the developmental potential of embryonic stem cells. Nature, 1988, V. 336, P. 684−687.

108. Wobus A.M., Holzhauzen H., Jakel P., Schoneich J. Characterization of a pluripotent stem cell line derived from a mouse embryo. Exp. Cell Res., 1984, V. 152, p. 212−219.

109. Wylie C., Heasman S., Swan A.P. et al. Evidence for substrate guidance of primordial germ cells Exp. Cell. Res., 1979, V. 121, p. 315−324.

110. Xu C., Inokuma M.S., Denham J. at al. Feeder-free growth of undifferentiated human embryonic stem cells. Nat. biotechnol. 2001, V. 19, N. 10, p. 971−974.1. Р00С1: rocv/v-. r1

Заполнить форму текущей работой