Оптико-биосенсорный анализ белок-белковых, белок-липидных и олигонуклеотидных взаимодействий в реальном времени

Тип работы:
Диссертация
Предмет:
Биохимия
Страниц:
108


Узнать стоимость

Детальная информация о работе

Выдержка из работы

Актуальность

Оптический биосенсор позволяет исследовать межмолекулярные взаимодействия в реальном времени без введения меток в анализируемые молекулы. Современные оптические биосенсоры характеризуются высокой чувствительностью, возможностью определять кинетические параметры образования и распада комплексов и быстротой анализа — несколько минут [Yeung et al., 1995]. В настоящее время такие приборы нашли применение в фармакологических и протеомных исследованиях [Myszka and Rich, 2000- Natsume et al., 2000- Nelson et al., 2000], при эпитопном анализе антигенов [Novotny et al., 2000] и для детекции микробных антигенов [Nedelkov et al., 2000- Welschof et al., 1997]. В качестве изучаемых объектов могут выступать различные пары: белок-белок, белок-липид, олигонуклеотид-олигонуклеотид, фермент-низкомолекулярный лиганд и т. д. В представленной работе оптический биосенсор использовался для изучения кинетических параметров взаимодействия антиген-антитело, взаимодействия белков цитохром Р450-содержащих монооксигеназных систем с фосфолипидными слоями, а также для изучения кинетических параметров гибридизации олигонуклеотидов и взаимодействия фермент-низкомолекулярный лиганд.

Актуальность данной работы определяется тем, что с помощью оптического биосенсора & quot-резонансное зеркало& quot- вычислены кинетические параметры образования межмолекулярных комплексов различных видов, и тем самым продемонстрированы возможности оптического биосенсора в экспериментальном исследовании межмолекулярных взаимодействий, а также возможности практического применения биосенсора при разработке биоаналитических методов, биотехнологических систем, в фармакологии и исследовании метаболических путей.

Исследование кинетики взаимодействия антиген-антитело позволяет получить данные, важные как в теоретическом плане (изучение общих механизмов белок-белковых взаимодействий, определение специфичности взаимодействия антиген-антитело, эпитопное картирование), так и для практического применения (разработка иммуно-тест-систем и терапевтических препаратов на основе антител). Поверхностный антиген вируса гепатита В является основным диагностическим маркером ВГВ — инфекции. Со времени открытия HBsAg в изучении различных аспектов ВГВ инфекции достигнут значительный прогресс, однако, вирусный гепатит В продолжает оставаться важной проблемой здравоохранения: у 10% больных он переходит в хроническое течение, а при хроническом гепатите, в свою очередь, в 1% случаев развивается цирроз и рак печени. Гепатит С также представляет серьезную угрозу здоровью людей из-за очень высокой вероятности (до 85% случаев) перехода в хронический процесс, приводящий в дальнейшем к циррозу и гепатоцеллюлярной карциноме. Нуклеокапсидный (core) белок является одним из структурных белков ВГС. Антитела к core антигену появляются одними из первых при острой инфекции, титры антител нарастают при хронической инфекции и сохраняются пожизненно у большинства выздоровевших людей [Giuberti et al., 1992- Yamagushi et al., 2000- Nikolaeva et af., 2002]. Выбор в качестве объектов исследования пар MKA/HBsAg и HCV-core-Ag/MKA обусловлен большим интересом к разработке новых тест-систем для диагностики гепатитов В и С. Создание эффективных диагностических систем невозможно без информации о кинетических характеристиках взаимодействия белков-маркеров с иммобилизованными белками-зондами. В настоящей работе оптический биосенсор был применен для исследования кинетики взаимодействия пар HBsAg/MKA и HCV-core-Ag/MKA и для детекции HBsAg и anti-core в сыворотке крови.

Актуальность изучения цитохром Р450-содержащих монооксигеназных систем обусловлена их центральной ролью в метаболизме широкого спектра эндогенных субстратов и ксенобиотиков [Арчаков, 1975- Archakov and Bachmanova, 1990]. Липидное окружение может влиять на структуру и функциональные свойства белков. Несмотря на значительное количество работ в области липид-белкового взаимодействия, пока нет стройной модели, описывающей механизм этого взаимодействия. Это обусловлено недостатком данных, в том числе, по кинетическим характеристикам взаимодействия. Кинетические параметры липид-белковых взаимодействий определялись или по тушению флуоресценции аминокислотных остатков мембранного фрагмента [Dufourcq et al., 1975- Yang et al., 1981], или путем введения специальных флуоресцентных меток [Leto and Holloway, 1979]. В настоящее время оптические биосенсоры находят все большее применение для исследования в реальном времени белок-белковых взаимодействий [Ivanov et al., 1997, 1999a, b,

2000, 2001 a, b], а также взаимодействий пленарный липидный слой — белок [Ramsden et al. f 1996- Salamon and Tollin, 1996a, b- Heyse et al., 1998], но созданные за счет адсорбции фосфолипидные слои были нестабильны. В представленной работе были созданы стабильные фосфолипид-содержащие биочипы путем ковалентной иммобилизации фосфолипидов на поверхности аминосилановой кюветы оптического биосенсора и исследовано взаимодействие мембранных и водорастворимых белков цитохром Р450-содержащих монооксигеназных систем с иммобилизованными фосфолипидными слоями.

Специфичная к последовательности модификация одно- и двухцепочечных нуклеиновых кислот реакционноспособными производными олигонуклеотидов, способными образовывать соответствующие дуплексы и триплексы, — один из наиболее перспективных вариантов антисмыслового подхода к регуляции экспрессии генов [Knorre and Vlassov, 1985]. Оли гону клеотиды и их производные могут быть направлены на матричные РНК с целью ингибирования процесса трансляции, а также на вирусные РНК или одноцепочечные ДНК для контроля процессов репликации или транскрипции. В представленной работе оптический биосенсор был применен для определения кинетических параметров взаимодействия олигонуклеотид/олигонуклеотид.

Изатин — низкомолекулярный эндогенный непептидный регулятор, обнаруженный практически во всех тканях и биологических жидкостях животных и человека [Medvedev et al., 1996- Гловер и др., 1997- Sandler et al., 2000]. Хотя изатин-связывающие белки обнаружены в мембранной и растворимой фракциях клеток, идентифицировано всего несколько мишеней действия изатина (моноаминооксидаза, А-подтип рецепторов натрийуретических пептидов и растворимая NO-стимулируемая гуанилатциклаза тромбоцитов человека) [Glover et al., 1995- Medvedev et al., 1996- Гловер и др., 1997- Medvedev et al., 1998- Sandler et al., 2000]. Однако выявленные мишени действия изатина не могут объяснить всей биологической активности, свойственной этому соединению in vivo. В данной работе с помощью оптического биосенсора было изучено взаимодействие иммобилизованного 5-аминоизатина с NAD-зависимыми дегидрогеназами цитозоля: глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназой (ГАФД), глицерол-3-фосфатдегидрогеназой (ГФДГ) и лактатдегидрогеназой (ЛДГ).

Цель работы

Определение с помощью оптического биосенсора кинетических констант образования и распада белок-белковых, белок-липидных и олигонуклеотидных комплексов.

Задачи работы

— определить кинетические константы образования и распада комплексов MKA/HBsAg и HCV-core-Ag/MKA-

— показать возможность обнаружения HBsAg и антител к нуклеокапсидному белку ВГС в сыворотке крови людей с помощью оптического биосенсора-

— разработать методику ковалентной иммобилизации фосфатидилэтаноламинов на поверхности кюветы оптического биосенсора для исследования белок-липидных взаимодействий-

— определить кинетические характеристики взаимодействия мембранных белков микросомальной цитохром Р450-содержащей монооксигеназной системы с дилауроилфосфатидилэтаноламином (ДЛФЭ) и дистеароилфосфатидилэтаноламином (ДСФЭ) —

— вычислить с помощью оптического биосенсора кинетические параметры гибридизации олигонуклеотидов-

— провести мониторинг взаимодействия глицерол-3-фосфатдегидрогеназы и глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы с иммобилизованным 5-аминоизатином.

Научная новизна

В ходе выполнения работы определены константы скорости реакций образования и распада комплексов для следующих пар антиген-антитело: NE3/HBsAg, CEN24/HBsAg, HCV-core-Ag/CE11, HCV-core-Ag/CE12, HCV-core-Ag/CD11, HCV-core-Ag/B-1.

Путем ковалентной иммобилизации фосфолипидов на поверхности аминосилановой кюветы оптического биосенсора созданы стабильные фосфолипид-содержащие биочипы для исследования белок-липидных взаимодействий. Определены константы скорости ассоциациии и скорости диссоциации белок-липидных комплексов: ДЛФЕ/< 3-Ь5, flCOE/d-b5, ДЛФЕ/d-Fp, ДЛФЕ/с1−2В4, ДСФЕ/с!-2В4.

Установлено, что глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа и глицерол-3-фосфатдегидрогеназа являются изатин-связывающими белками. Определены константы скорости ассоциации и диссоциации комплекса 5-аминоизатин/ГФДГ. Показано, что лактатдегидрогеназа не взаимодействует с иммобилизованным аналогом изатина.

Научно-практическая ценность работы

Показана возможность выявления поверхностного антигена вируса гепатита В, а также антител к нуклеокапсидному белку вируса гепатита С в сыворотке крови людей с помощью оптического биосенсора. Это создает основы для разработки диагностических методов, позволяющих детектировать маркеры заболеваний в реальном времени с высокой специфичностью, при этом требуется малое количество анализируемой пробы (несколько микролитров) и короткое время измерения (несколько минут).

Разработана методика ковалентной иммобилизации фосфатидилэтаноламинов на поверхности кюветы оптического биосенсора. Создание фосфолипидных биочипов позволяет исследовать кинетические характеристики белок-липидных взаимодействий и моделировать мембранные Р450-содержащие монооксигеназные системы.

Апробация работы

Основные положения диссертации были представлены на 12-ой международной конференции & quot-Цитохром Р450: биохимия, биофизика и молекулярная биология& quot- (Франция, 2001), на 5-ом конгрессе & quot-Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии& quot- (Москва, 2002), на 2-ом международном конгрессе & quot-Биотехнология: состояние и перспективы развития. Биотехнология и медицина& quot- (Москва, 2003), на 2-ой международной конференции & quot-Геномика, протеомика и биоинформатика для медицины& quot- (Москва — Плес — Москва, 2004). По материалам диссертации опубликовано 7 статей и 4 тезисов докладов.

Работа выполнена в ГУ НИИ БМХ РАМН при финансовой поддержке Межведомственной научно-технической программы & quot-Вакцины нового поколения и медицинские диагностические системы будущего& quot- и РФФИ (гранты № 99−448 081, № 01−04−48 245, № 03−04−48 244).

Апробация диссертации состоялась на межлабораторном семинаре ГУ НИИ БМХ РАМН 21 февраля 2005 года.

Структура и объем диссертации.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка цитируемой литературы. Работа содержит 108 страниц машинописного текста, 8 таблиц и 26 рисунков. Список литературы включает 207 источников.

6. выводы

1. Определены кинетические константы образования и распада комплексов MKA/HBsAg и HCV-core-Ag/MKA с помощью оптического биосенсора.

2. Оптический биосенсор может быть использован для выявления поверхностного антигена вируса гепатита В и антител к нуклеокапсидному белку вируса гепатита С в сыворотке крови людей. 3. Разработана методика ковалентной иммобилизации фосфатидилэтаноламинов на поверхности кюветы оптического биосенсора.

4. Полноразмерные мембранные белки — цитохром Р450 2В4, цитохром Ь5 и NADPH-цитохром Р450 редуктаза — встраиваются в созданные фосфолипидные слои. Определены константы скорости ассоциации для процессов адсорбции и встраивания, обусловленного гидрофобными взаимодействиями, а также константы скорости диссоциации белок-липидных комплексов: ДЛФЕим/с1-Ь5, ДСФЕИМ/ d-b5, ДЛФЕим/d-Fp, ДПФЕим/d-2В4, ДСФЕИ"^-2В4.

5. Оптический биосенсор применен для определения кинетических параметров взаимодействия олигонуклеотид-олигонуклеотид. Вычислены кинетические параметры гибридизации 11-мера TGGGAAGAGGG (ODN-11) и 14-мера TGGGAAGAGGGTCA (ODN-14) с 14-мерным биотинилированным олигонуклеотидом pTGACCCTCTTCCCA (р14), иммобилизованным на 7

0поверхность декстрановои кюветы через стрептавидин. — - - ~ (

6. Глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназа и глицерол-3-фосфатдегидрогеназа являются изатин-связывающими белками. Это взаимодействие специфическое, поскольку лактатдегидрогеназа, также NAD-зависимый фермент цитозоля, не взаимодействует с иммобилизованным аналогом изатина. Определены кинетические константы образования и распада комплекса 5-аминоизатиним/ГФДГ.

5. ОБЩЕЕ ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В соответствии с поставленной целью — определение с помощью оптического биосенсора кинетических констант образования и распада белок-белковых, белок-липидных и олигонуклеотидных комплексов — были проведены исследования взаимодействий антиген-антитело, белок-липид, олигонуклеотид-олигонуклеотид, фермент-низкомолекулярный лиганд с помощью оптического биосенсора. В диссертационной работе продемонстрировано применение оптического биосенсора для анализа взаимодействия антиген-антитело, в частности, пар MKA/HBsAg и HCV-core-Ag/anti-core. Полученные с помощью оптического биосенсора значения константы аффинности МКА к HBsAg не зависят от выбора типа кюветы и от порядка иммобилизации белков (показано на примере пары NE3/HBsAg), а также согласуются с описанными в литературе данными метода количественной преципитации. Были определены константы скорости ассоциации и константы скорости диссоциации для следующих пар антиген-антитело: NE3/HBsAg, CEN24/HBsAg, HCV-core-Ag/CE11, HCV-core-Ag/CE12, HCV-core-Ag/CD11, HCV-core-Ag/B-1. Также продемонстрирована возможность использования оптического биосенсора для выявления в сыворотке крови людей поверхностного антигена ВГВ и антител к нуклеокапсидному белку ВГС.

Путем исследования взаимодействия белок — липид с помощью оптического биосенсора определены константы скорости ассоциации для процессов адсорбции и встраивания, обусловленного гидрофобными взаимодействиями, а также константы скорости диссоциации белок-липидных комплексов: ДЛФЕ/с1-Ь5, ДСФЕ/с1-Ь5, ДЛФЕ/d-Fp, ДЛФЕЛ1−2В4, ДСФЕЛ1−2В4. Мембранные белки 2В4, Fp и Ь5 встраиваются в фосфолипидные слои. Была продемонстрирована доминантная роль гидрофобных мембранных фрагментов d-b5 и d-Fp во встраивании их в липидный слой. Наряду с гидрофобными взаимодействиями в процессе встраивания d-b5 и d-Fp принимают участие электростатические силы. Электростатические взаимодействия препятствовали адсорбции цитохрома Ь5 на ДЛФЭ слой, но не влияли на его встраивание, и в то же время способствовали встраиванию Fp в фосфолипидный слой. Эффективность встраивания уменьшалась с увеличением длины ацильной цепи фосфолипида. В буфере низкой ионной силы не наблюдали встраивания

Ь5 и Fp в липид с более длинной ацильной цепью (ДСФЭ). Встраивание d-b5 увеличивалось при температуре ДЛФЭ-слоя выше точки фазового перехода.

На примере d-2B4 было показано, что степень агрегации белка влияла на его взаимодействие с липидным слоем- агрегаты d-2B4 не встраивались в фосфолипидный слой.

Водорастворимые белки или не адсорбировались на поверхности фосфолипида (Ad), или адсорбировались только за счет электростатических взаимодействий (альбумин), или за счет электростатических и гидрофобных взаимодействий (Р450сат). Причем адсорбция водорастворимых белков была больше в случае фосфолипида с меньшей длиной ацильной цепи.

В работе продемонстрировано применение оптического биосенсора для определения кинетических параметров взаимодействия олигонуклеотид-олигонуклеотид. Определены кинетические параметры гибридизации олигонуклеотидов ODN -11 и ODN -14 с иммобилизованным зондом р14. Результаты, полученные с помощью оптического биосенсора, т. е. в гетерогенных условиях, сравнили с данными, полученными в гомогенных условиях: методом температурного скачка, а также рассчитанными из кривых плавления олигонуклеотидных дуплексов. Процесс диссоциации имеет сходные количественные характеристики и в одном, и в другом случае. Процесс ассоциации, происходящий в чувствительном слое биосенсора, более адекватно отражает реакцию в живых клетках.

В представленной работе также показана возможность использования оптического биосенсора для изучения взаимодействия фермент низкомолекулярный лиганд на примере NAD-зависимых дегидрогеназ цитозоля и низкомолекулярного эндогенного непептидного регулятора изатина. Показано, что глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа и глицерол-3фосфатдегидрогеназа являются изатин-связывающими белками. Это взаимодействие является специфическим, поскольку показано также, что еще один NAD-зависимый фермент цитозоля — лактатдегидрогеназа — не взаимодействует с иммобилизованным аналогом изатина. Определены константа скорости ассоциации и константа скорости диссоциации для пары 5-аминоизатиНим/ГФДГ.

ПоказатьСвернуть

Содержание

1 Введение

2 Обзор литературы

2.1 Принцип оптико-биосенсорного анализа межмолекулярных взаимодействий

2.2 Взаимодействие антиген-антитело

2.2.1 Методы изучения кинетики реакции антиген-антитело

2.2.2 Характеристика поверхностного антигена вируса гепатита В

2.2.3 Характеристика нуклеокапсидного белка вируса гепатита С

2.3 Взаимодействие белок-липид

2.3.1 Методы исследования белок-липидных взаимодействий в мембранной цитохром Р450-содержащей монооксигеназной системе

2.3.2 Мембранные и водорастворимые белки цитохром Р450-содержащих монооксигеназных систем

2.4 Взаимодействие олигонуклеотид-олигонуклеотид

2.5 Взаимодействие фермент — низкомолекулярный лиганд

3 Материалы и методы исследования

4 Результаты исследования и их обсуждение

4.1 Исследование взаимодействия MKA/HBsAg

4.2 Исследование взаимодействия HCV-core-Ag/anti-core

4.3 Исследование взаимодействия мембранных и водорастворимых белков из цитохром Р450-содержащих монооксигеназных систем с иммобилизованными фосфолипидными слоями

4.4 Исследование кинетики образования и распада дуплексов p14) (ODN-11) и (p14) (ODN-14)

4.5 Исследование взаимодействия NAD-зависимых дегидрогеназ цитозоля с иммобилизованным 5-аминоизатином

Список литературы

1. Ахрем А. А., Лапко А. Г., Лапко В. Н., Морозова Л. А., Репин В. А., Тищенко И. В., Чащин В. Л. Аминокислотная последовательность адренодоксина из митохондрий надпочечника свиньи // Биоорганическая химия, 1978, т. 4, с. 462 475.

2. Баранов А. А., Каганов Б. С., Потапов А. С., Зайнудинов З. М. Хронический гепатит В у детей // Вопросы современной педиатрии, 2002, т. 1, № 3, с. 44−55.

3. Гловер В., Медведев А. Е., Сандпер М. Изатин: возможная роль в функциональном взаимодействии натрийуретических пептидов и моноаминов // Вопр. мед. химии, 1997, т. 43, с. 515−521.

4. Заслонко И. С., Смирнов В. Н., Тереза A.M. Численное моделирование высокотемпературного распада метилнитрата // Кинетика и катализ, 1988, т. 29, вып. 3, с. 519 522.

5. Ивков В. Г., Берестовский Г. Н. Динамическая структура липидного слоя. М.: Наука. 1981, 293с.

6. Калиткин Н. Н. Численные методы. М.: Наука, 1978, 512с.

7. Карузина И. И., Бачманова Г. И., Ментгазетдинов Д. Э. Выделение и свойства цитохрома Р450 из микросом печени кроликов // Биохимия. 1979, т. 44, с. 1044−1057.

8. Курский М. Д., Костерин С. А., Рыбальченко В. К. Биохимическая кинетика. Киев: Высшая школа, 1977, 262с.

9. Полак Л. С., Гольденберг М. Я., Левицкий А. А. Вычислительные методы в химической кинетике. М.: Наука, 1984, 280с.

10. Робинсон У. С. Вирусология. Под ред. Б. Филдса. М. 1989, т. 3, с. 287−330.

11. Тернер М., Ричарде Ф., Варга Дж., Розенстайн Р., Конигсберг У., Стьюард М., Файнстайн А., Бил Д. Структура и функции антител. Под ред. Глинна Л., Стьюарда М. М.: Мир, 1983, с. 122−125.

12. Цупрун В. Л., Мясоедова К. Н., Берндт П., Зограф О., Черняк В. Я., Арчаков А. И., Скулачев В. П. Гексамерная организация цитохрома Р450, изолированного из микросом печени //Докл. АН СССР, 1985, т. 285, с. 1496−1499.

13. Alexander G.J.M. Immunology of hepatitis В virus infection // Br. Med. Bull., 1990, v. 46, p. 354−367.

14. Almeida J.D., Waterson A.P. Immune complexes in hepatitis // Lancet, 1969, v. 2, p. 983−986.

15. Andersen K.B., Vangran M.H. Gel centrifugation chromatography for macromolecular separations // J. Chromatogr., 1982, v. 240, p. 1−8.

16. Archakov A.I., Bachmanova G.I. Cytochrome P450 and Active Oxygen. Taylor and Francis: London, 1990, 275p.

17. Ashish В., Murthy G.S. Analysis of human chorionic gonadotropin-monoclonal antibody interaction in BIACORE // J. Biosci., 2004, v. 29, p. 57−66.

18. Authier L., Grossiord C., Brassier P., Limoges B. Gold nanoparticle-based quantitative electrochemical detection of amplified human cytomegalovirus DNA using disposable microband electrodes //Anal. Chem., 2001, v. 73, p. 4450−4456.

19. Bassett S.E., Brasky K.M., Lanford R.E. Analysis of hepatitis С virus (HCV)-inoculated chimpanzees reveals unexpected clinical profiles // J. Virol., 1998, v. 72, p. 2589−2599.

20. Bayer M.E., Blumberg B.S., Werner B. Particles associated with Australia antigen in the sera of patients with leukaemia, Down’s syndrome, and hepatitis // Nature (London), 1968, v. 218, p. 1057−1059.

21. Benters R., Niemeyer C.M., Drutschmann D., Blohm D., Wohrle D. DNA microarrays with РАМАМ dendritic linker systems // Nucleic Acids Res., 2002, v. 30, № 2, e10.

22. Black S., French J.S., Williams C.H., Coon M.J. Role of a hydrophobic polipeptide in the N-terminal region of NADPH-cytochrome P450 reductase in complex formation with P450 LM // Biochem. Biophys. Res. Commun., 1979, v. 91, p. 1538−1539.

23. Black S.D., Coon M.J. Structural features of liver microsomal NADPH-cytochrome P450 reductase. Hydrophobic domain and connection region // J. Biol. Chem., 1982, v. 257, p. 5929−5936.

24. Black S., Coon M.J. Studies on the identity of the heme-binding cysteinyl residue in rabbit liver microsomal cytochrome P450 isozyme 2 // Biochem. Biophys. Res. Commun., 1985, v. 128, p. 82−89.

25. Black S. Membrane topology of the mammalian P450 cytochromes // FASEB J. 1991, v. 6, p. 680−685.

26. Blanck J., Smettan G., Ristau O., Ingelman-Sundberg M., Ruckpaul K. Mechanism of rate control of the NADPH-dependent reduction of cytochrome P450 by lipids in phospholipid vesicles // Eur. J. Biochem., 1984, v. 144, p. 509−513.

27. Bosterling В., Trudell J.R. Association of cytochrome b5 and cytochrome P450 reductase with cytochrome P450 in the membrane of reconstituted vesicules // J. Biol. Chem., 1982, v. 257, p. 4783−4787.

28. Brown S.E., Howard C.R., Zuckerman A.J., Steward M.W. Determination of the affinity of antibodies to hepatitis В surface antigen in human sera // J. Immunol. Methods, 1984, 72(1), 41−48.

29. Borer P.N. Nucleic acids. In Handbook of Biochemistry and Molecular Biology (Fasman G.D., ed.), CRC, Cleveland, OH, 3rd ed., 1975, Vol I, p. 589.

30. Bukh J., Miller R.H., Purcell R.H. Genetic heterogeneity of hepatitis С virus: quasispecies and genotypes // Semin. Liver Dis., 1995, v. 15, p. 41−63.

31. Cantor C.R., Schimmel P.R. Biophysical Chemistry. Part III. The Behavior of Biological Macromolecules. W.H. Freeman and Co., San Francisco, 1980, 534 p.

32. Carman W.F., Zanetti A.R., Karayiannis P., Waters J., Manzillo G., Tanzi E., Zuckerman A.J., Thomas H.C. Vaccine-induced escape mutant of hepatitis В virus // Lancet, 1990, v. 336, p. 325−329.

33. Carman W.F., Van Deursen F.J., Mimms L.T., Hardie D., Cappola R., Decker R., Sanders R. The prevalence of surface antigen variants of hepatitis В virus in Papua New Guinea, South Africa and Sardinia // Hepatology, 1997, v. 26, p. 16 581 666.

34. Carman W.F. The clinical significance of surface antigen variants of hepatitis В virus // J. Viral Hepatitis, 1997, v. 4, p. 11−20.

35. Chiang Y.L., Coon M.J. Comparative study of two highly purified forms of liver microsomal cytochrome P450: Circular dichroism and other properties // Arch. Biochem. Biophys., 1979, v. 195, p. 178−187.

36. Chisari F.V., Ferrari C. Hepatitis В virus immunopathogenesis // Annu. Rev. lmmunol., 1995, v. 13, p. 29−60.

37. Chocholova L., Kolinova M. Effect of isatin (2,3-dioxoindoline) on audiogenic seizures in rats and its relationship to electrographic and behavioural phenomena // Physiol. Bohemoslov, 1979, v. 28, p. 495−502.

38. Chocholova L., Kolinova M. Effect of isatin (2,3 dioxoindoline) on physiological and pathological electrographic manifestations and vigilance // Physiol. Bohemoslov, 1981, v. 30, p. 129−137.

39. Choulier L., Andersson K., Hamalainen M.D., van Regenmortel M.H.V., Malmqvist M., Altschuh D. QSAR studies applied to the prediction of antigen-antibody interaction kinetics as measured by BIACORE // Protein Engineering, 2002, v. 15, p. 373−382.

40. Chu T. -W., Kimura T. Studies on adrenal steroid hydroxylases // J. Biol. Chem., 1973, v. 248, p. 5183−5189.

41. Coghlan V.M., Vickery L.E. Site-specific mutations in human ferredoxin that assect bonding to ferredoxin reductase and cytochrome P450scc // J. Biol. Chem., 1991, v. 266, p. 18 606−18 612.

42. Coon M. J., Chiang Y.L., French J.S. Chemical characterization of enzymes involved In drug metabolism. // The induction of drug metabolism. Estabrook R.W., Lindenlaub E. eds Stuttgart, New York — F.K. Schatlaner Verlag, 1979, p. 201−211.

43. Cramp M.E., Carucci P., Rossol S., Chokshi S., Maertens G., Williams R., Naoumov N.V. Hepatitis С virus (HCV) specific immune response in anti-HCV positive patients without hepatitis С viraemia // Gut., 1999, v. 44, p. 424−429.

44. Crumeyrolle-Arias M. f Medvedev A., Cardona A., Barritault D., Glover V. In situ imaging of specific binding of 3H. isatin in rat brain // J. Neurochem., 2003, v. 84, p. 618−620.

45. Dane D.S., Cameron C.H., Briggs M. Virus-like particles in serum of patients with Australia-antigen-associated hepatitis // Lancet, 1970, v. 1, p. 695−698.

46. Dignam I.D., Strobel W. NADPH-cytochrome reductase from rat liver: purification by affinity chromatography and characterization // Biochem., 1977, v. 26, p. 116−1123.

47. Dubertret В., Calame M., Libchaber A.J. Single-mismatch detection using gold-quenched fluorescent oligonucleotides // Nat. Biotechnology, 2001, v. 19, p. 365−370.

48. Dufourcq J., Faucon J.F., Lussian C., Bernon R. Study of lipid-protein interactions in membrane models: intrinsic fluorescence of cytochrome b5 -phospholipid complexes // FEBS Lett., 1975, v. 57, p. 112−116.

49. Eigen M. and Maeyer L. Temperature jump methods. In Investigation of Rates and Mechanisms of Reactions (Hammes, G.G., ed.). 3rd ed., John Wiley & Sons, New York, NY. 1974, p. 79.

50. Eisenberg D., Weiss R.M., Terwillinger T.C., Wilcox W. Hydrophobic moments and protein structure// Faraday Symp. Chem. Soc., 1982, v. 17, p. 109−120.

51. Estabrook R.W., Werringloer J. The microsomal enzyme system responsible for the oxidative metabolism of many drugs. The induction of drug metabolism. Estabrook R.W., Lindenlaub E., eds. Stuttgart — N.Y., Schattauer F.K. Verlag, 1979, pp. 187−199.

52. Farci P., Alter H.J., Grovindarajan S., Wong D.C., Engle R., Lesniewski R.R., Mushahwar I.K., Desai S.M., Miller R.H., Ogata N. Lack of protective immunity against reinfection with hepatitis С virus // Science, 1992, v. 258, p. 135−14.

53. Fedorova O.S., Podust L.M. Application of tris (2,2'-bipyridyl)ruthenium (lll) for the investigation of DNA spatial structure by a chemical modification method // J. Inorg. Biochem., 1988, v. 34, p. 149−155.

54. Francois G., Kew M., Van Damme P., Mphahlele M.J., Meheus A. Mutant hepatitis В viruses: a matter of academic interest only or a problem with farreaching implications?//Vaccine, 2001, v. 19, p. 3799−3815.

55. Freeman W.M., Robertson D.J., Vrana KE. Fundamentals of DNA hybridization arrays for gene expression analysis // Biotechniques, 2000, v. 29, p. 1042−1046.

56. French J.S., Guengerich F.P., Coon M.J. Interaction of cytochrome P450, NADPH-cytochrome P450 reductase, phospholipid, and substrate in the reconstituted liver microsomal enzyme system // J. Biol. Chem., 1980, v. 255, p. 4112−4119.

57. Ganem D., Schneider R.J. Hepadnaviridae and their replication. In: Fields Virology. Knipe D.M., Howley P.M., Chanock R.M., eds. Philadelphia: Lippincott-Raven. 2001, 4th ed., p. 2703−2737.

58. George A. J. Т., Danga R., Gooden C.S.R., Epenetos A.A., Spooner R.A. Quantitative and qualitative detection of serum antibodies using resonant mirror biosensor//Tumor Targeting, 1995, v. 1, p. 245−250.

59. Glover V., Halket J.M., Watkins P.J., Clow A., Goodwin B.L., Sandler M. Isatin: identity with the purified endogenous monoamine inhibitor tribulin // J. Neurochem., 1988, v. 51, p. 656−659.

60. Glover V., Medvedev A., Sandler M. Isatin is a potent endogenous antagonist of guanylate cyclase-coupled atrial natriuretic peptide receptors // Life Sci., 1995, v. 57, p. 2073−2079.

61. Gomara M.J., Ercilla G., Alsina M.A., Наго I. Assessment of synthetic peptides for hepatitis A diagnosis using biosensor technology // J. Immunol. Methods, 2000, v. 246, p. 13−24.

62. Gotoh M., Hasegawa Y., Shinohara Y., Shimizu M., Tosu M. A new approach to determine the effect of mismatches on kinetic parameters in DNA hybridization using optical biosensor// DNA Research, 1995, v. 2, p. 285−293.

63. Grab P.J. Hepatitis B: virus, pathogenesis and treatment//Vaccine, 1998, v. 16, p. 11−16.

64. Gum J.R., Strobel H.W. Purified NADPH-cytochrome P450 reductase. Interaction with hepatic microsomes and phospholipid vesicles // J. Biol. Chem., 1979, v. 254, p. 4177−4185.

65. Gum J.R., Strobel H.W. Isolation of the membrane-binding peptide of NADPH-cytochrome P450 reductase //J. Biol. Chem., 1981, v. 256, p. 7478−7486.

66. Gunsalus I. C., Sligar S.G. Oxygen reduction by the P-450 monooxygenase systems //Adv. Enzymol., 1978, v. 47, p. 1−44.

67. Hadler S.C., Margolis H. Viral hepatitis. In: Evans A.S., editor. Viral infections of humans. Epidemiology and control. New York: Plenum medical Book Company. 1998, p. 351−391.

68. Haniu M., Armes L.G., Yasunobi K.T., Shastry B.A., Gunsalus I.C. Amino acid sequence of the Pseudomonas putida cytochrome P-450. Parts I and II // J. Biol. Chem., 1982, v. 257, p. 12 657−12 667.

69. Hanukoglu I. Steroidogenic enzymes structure, function and role in regulation of steroid hormone biosynthesis // J. Steroid Biochem. Mol. Biol., 1992, v. 43, p. 779 804.

70. Heinemann F.S., Ozols J. The complete amino acid sequence of fenobarbital induced liver microsomal cytochrome P450 // J. Biol. Chem., 1983, v. 258, p. 41 954 201.

71. Heyse S., Stora Т., Schmid E., Lakey J.H., Vogel H. Emerging techniques for investigating molecular interactions at lipid membranes // Biochim. Biophys. Acta, 1998, v. 85 507, p. 319−338.

72. Hilleman M.R. Vaccine perspectives from the vantage of hepatitis В // Vaccine Research, 1992, v. 1, p. 1−15.

73. Holloway P.W., Katz T.J. Effect of cytochrome b5 on the size, density, and permeability of phosphatidylcholine vesicles // J. Biol. Chem., 1975, v. 250, p. 90 029 007.

74. Honda M., Brown E.A., Lemon S.M. Stability of a stem-loop involving the initiator AUG controls the efficiency of internal initiation of translation on hepatitis С virus RNA // RNA, 1996, v. 2, p. 955−968.

75. Jansson I., Schenkman I.B. Studies on three microsomal transfer enzyms systems//Arch. Biochem. Biophys., 1977, v. 178, p. 89−107.

76. Jakoby M.G., Covey D.F., Cistola D.P. Localization of tolbutamide binding sites on human serum albumin using titration calorimetry and heteronuclear 2-D NMR // Biochemistry, 1995, v. 34, p. 8780−8787.

77. Jensen K.K., Orum H., Nielsen P.E., Norden B. Kinetics for hybridazation of peptide nucleic asids (PNA) with DNA and RNA studied with the BIAcore technique // Biochemistry, 1997, v. 36, p. 5072−5077.

78. Jokelainen P.T., Krohn K., Prince A.M., Finlayson N.D.C. Electron microscopic observations on virus-like particles associated with SH antigen // J. Virol., 1970, v. 6, p. 685−689.

79. Knorre D.G., Vlassov V.V. Complementary-addressed (sequence-specific) modification of nucleic acids // Progr. Nucl. Acids Res. Mol. Biol., 1985, v. 32, p. 291 320.

80. Koh D.W., Patel C.N., Ramsinghani S., Slama J.T., Oliveira M.A., Jacobson M.K. Identification of an inhibitor binding site of poly (ADP-ribose) glycohydrolase // Biochemistry, 2003, v. 42(17), p. 4855−4863.

81. Kondo K., Tajima S., Sato R., Narita K. Primary structure of the membrane-binding segment of rabbit cytochrome b5 // J. Biochem., 1979, v. 86, p. 1119−1128.

82. Koziel M.J. Immunology of viral hepatitis//Am. J. Med., 1996, v. 100, p. 98−109.

83. Kumar P. Isatin inhibition of rat testicular alkaline phosphatase. A non-allosteric phenomenon // Enzyme, 1979, v. 24, p. 152−157.

84. Medvedev A.E., Goodwin B.L., Clow A., Halket J.M., Glover V., Sandler M. Inhibitory potency of some isatin analogues on human monoamine oxidase A and В //Biochem. Pharmacol., 1992, v. 44, p. 590−592. (a)

85. Medvedev A.E., Gorkin V.Z., Fedotova I.В., Semiokhina A.F. Monoamine oxidase inhibitors, as anticonvulsants // Can. J. Physiol. Pharmacol., 1994, 71 (Suppl. 1) 400. (a)

86. Medvedev A.E., Gorkin V.Z., Fedotova I.В., Semiokhina A.F., Sandler M., Glover V. Antiseizure effect of isatin and reduction of monoamine oxidase activity in rats with experimental audiogenic seizures // Med. Sci. Res. 1994, v. 22, p. 555−557. (b)

87. Medvedev A.E., Clow A., Sandler M., Glover V. Isatin a link between natriuretic peptides and monoamines? // Biochem. Pharmacol., 1996, v. 52, p. 385−391.

88. Medvedev A., Sandler M., Glover V. Interaction of isatin with type A-natriuretic peptide receptor: possible mechanism // Life Sci., 1998, v. 62, p. 2391−2398.

89. Medvedev A.E., Goodwin B.L., Sandler M., Glover V. Efficacy of isatin analogues as antagonists of rat brain and heart atrial natriuretic peptide receptors coupled to particulate guanylyl cyclase // Biochem. Pharmacol., 1999, v. 57, p. 913 915.

90. Miwa G.T., Lu A.Y.H. Studies on the stimulation of cytochrome P450-dependent monooxygenase activity by dilauroylphosphatidylcholine // Arch. Biochem. Biophys., 1981, v. 211, p. 454−458.

91. Moriya K., Fujie H., Shintani Y., Yotsuyanagi H., Tsutsumi Т., Ishibashi K., Matsuura Y., Kimura S., Miyamura Т., Koike K. The core protein of hepatitis С virus induces hepatocellular carcinoma in transgenic mice // Nat. Med., 1998, v. 4, p. 1065−1067.

92. Muller M. Vergleichende pharmacologische Studien mit Indole und Isatin. Med. Exp. 1962, v. 7, p. 155−160.

93. Murray R.L., Gunsalus I.C., Dus K.M. Active site studies of cytochrome P-450cam. I. Specific cysteine labeling with the affinity reagent isobornyl bromacetate as a model for substrate binding //J. Biol. Chem., 1982, v. 257, p. 12 513−12 525.

94. Myszka D.G., Morton T.A., Doyle M., Chaiken I.M. Kinetic analysis of a protein antigen-antibody interaction limited by mass transport on an optical biosensor // Biophys. Chem., 1997, v. 64, p. 127−137.

95. Myszka D.G., Rich R.L. Implementing surface plasmon biosensors in drug discovery // Pharm. Sci. Technol. Today, 2000, v. 3(9), p. 310−317.

96. Nassar A-E.F., Zhang Z., Chynwat V., Frank M.A., Rusling J.E. Orientation of myoglobin in cast multibilayer membranes of amphiphilic molecules // J. Phys. Chem., 1995, v. 99, p. 11 013−11 017.

97. Natsume Т., Nakayama H., Jansson O., Isobe Т., Takio K., Mikoshiba K. Combination of biomolecular interaction analysis and mass spectrometric amino acid sequencing //Anal. Chem., 2000, v. 72(17), p. 4193−4198.

98. Nedelkov D., Rasooly A., Nelson R.W. Multitoxin biosensor-mass spectrometry analysis: a new approach for rapid, real-time, sensitive analysis of staphylococcal toxins in food // Int. J. Food Microbiol., 2000, v. 60, p. 1−13.

99. Nelson R.W., Nedelkov D., Tubbs K.A. Biosensor chip mass spectrometry: a chip-based proteomics approach // Electrophoresis, 2000, v. 21(6), p. 1155−1163.

100. Nisimoto Y., Otsuka-Murakami. Cytochrome b5, cytochrome c, and cytochrome P-450 interactions with NADPH-cytochrome P-450 reductase in phospholipid vesicles // Biochemistry, 1988, v. 27(16), p. 5869−5876.

101. Noshiro M., Harada N. Omura T. Immunological study on the route of electron transfer from NADH and NADPH to cytochrome P450 of liver microsomes // J. Biochem., 1980, v. 88, p. 1521−1535. (a)

102. Novotny L.A., Jurcisek J.A., Pichichero M.E., Bakaletz L.O. Epitop mapping of the outer membrane protein P5-homologous fimbrin adhesin of nontypeable Haemophilus influenzae// Infect Immun., 2000, v. 68(4), p. 2119−2128.

103. Omata Y., Albara K., Ueno Y. Conformation between the substrate binding side and heme studied by excitation energy transfer // Biochim. Biophys. Acta, 1987, v. 912, p. 115−123.

104. Omura Т., Sato R. The carbon monoxide binding pigment of liver microsomes. 1. Evidence for its hemoprotein nature. 2. Solubilization, purification and properties // J. Biol. Chem., 1964, v. 239, p. 2370−2385.

105. Omura Т., Takesue S. A new method for simultaneous purification of cytochrome b5 and NADH-cytochrome b5 reductase from rat liver microsomes // J. Biochem., 1970, v. 67, p. 249−257.

106. Panova N.G., Zemskova M.A., Axenova L.N., Medvedev A.E. Does isatin interact with rat brain monoamine oxidases in vivo?// Neurosci. Lett., 1997, v. 233, p. 58−60.

107. Pape G.R., Gerlach T.J., Diepolder H.M., Gruner N., Jung M., Santantonio T. Role of the specific T-cell response for clearance and control of hepatitis С virus // J. Viral. Hepat., 1999, v. 6, p. 36−40.

108. Patil S.D., Prakash K., Hedge S.N. Inhibition by isatin of Na±dependent glucose and amino acid transport in pigeon intestine // Indian J. Biochem. Biophys. 1985, v. 22, p. 249−251.

109. Prince A.M., Brotman В., Huima Т., Pascual D., Jaffery M., Inchauspe G. Immunity in hepatitis С infection //J. Infect. Dis., 1992, v. 165, p. 438−443.

110. Ramsden J.J., Bachmanova G.I., Archakov A.I. Kinetic evidence for protein clustering at a surface // Phys. Rev., 1994, v. 50, p. 5072−5076.

111. Ramsden J.J., Bachmanova G.I., Archakov A.I. Immobilization of proteins to lipid bilayers // Biosensor Bioelectron, 1996, v. 11, p. 523−528.

112. Robinson N.C., Tanford С. The binding of deoxycholate, Triton X-100, sodium dodecyl sulfate, and phosphatidylcholine vesicles to cytochrome b5 // Biochemistry, 1975, v. 14, p. 369−378.

113. Roseman M.A., Holloway P.W., Calabro M.A., Thompson Т.Е. Exchange of cytochrome b5 between phospholipid vesicles // J. Biol. Chem., 1977, v. 252, p. 4842−4849.

114. Ruckpaul K., Rein H., Blanck J., Coon M.J. Molecular mechanism of interactions between phospholipids and liver microsomal cytochrome P450 LM2 //Acta Biol. Med. Germ., 1982, v. 41, p. 193−203.

115. Ruckpaul K., Rein H. Cytochrome P450. Berlin, Academie Verlag, 1984, p. 111 162, 405.

116. Ruster В., Zeuzem S., Roth W.K. Hepatitis С virus sequences encoding truncated core proteins detected in a hepatocellular carcinoma // Biochem. Biophis. Res. Comm., 1996, v. 219, p. 911−915.

117. Sakaguchi M., Mihara K., Sato R. A short amino-terminal segment of microsomal cytochrome P450 functions both as an insertion signal and as a stop-transfer sequence // EMBO J., 1987, v. 6, p. 2425−2431.

118. Sareen K., Kohli R.P., Amma M.K.P., Gujral M.L. Anticonvulsant drugs based on the neurochemistry of seizures // Indian J. Physiol. Pharmacol., 1962, v. 6, p. 87−93.

119. Sato R. Distribution and physiological function. Cytochrome P450, edited by Sato R. and Omura T. (Kodansha L.T.D. Acad. Press, N.Y.- Tokyo), 1978, p. 2335.

120. Sato R., Imai Y., Taniguchi H. Reaction mechanism of liver microsomal cytochrome P450 as studied by reconstituted techniques. The induction of drug metabolism. Estabrook R.W. eds Stuttgart — N.Y., 1979, pp. 213−224.

121. Seeger C., Mason W.S. Hepatitis В virus biology // Microbiol. Mol. Biol. Rev., 2000, v. 64, p. 51−68.

122. Shaw M.A., Ostap E.M., Goldman Y.E. Mechanism of inhibition of skeletal muscle actomyosin by N-benzyl-p-toluenesulfonamide // Biochemistry, 2003, v. 42(20), p. 6128−6135.

123. Shimizu T. t Nazawa Т., Hatano M., Satake H., Imai Y., Hashimoto S., Sato R. Circular dichroism spectra of purified cytochromes P-450 from rabbit liver microsomes// Biochim. Biophys. Acta, 1979, v. 579, p. 122−133.

124. Singh В., Sharma R., Sareen K.N., Sohal M.S. Isatin enzyme interactions. V. Activation of rat liver acid phosphatase // Enzyme, 1977, v. 22, p. 256−261.

125. Skubitz К. M., Smith T. W. Determination of antibody-hapten association kinetics: a simplified experimental approach // J. Immunol., 1975, v. 114, p. 13 691 374.

126. Southern E., Mir K., Shchepinov M. Molecular interactions on microarrays // Nature Genet., 1999, v. 21, p. 5−9.

127. Spatz L., Strittmatter P. A form of cytochrome b5 that contain on additional hydrophobic sequence of 40 amino acid residues // Proc. Natl. Acad. Sci., 1971, v. 68, p. 1042−1046.

128. Ste’phenne J. Recombinant versus plasma derived hepatitis В vaccines: issues of safety, immunogenicity and cost-effectiveness//Vaccine, 1988, v. 6, p. 299−303.

129. Ste’phenne J. Development and production aspects of a recombinant yeast-derived hepatitis В vaccine // Vaccine, 1990, v. 8, p. 69−73.

130. Sullivan M.R., Holloway P.W. The binding of cytochrome b5 to phosphatidylcholine vesicle//Biochem. Biophys. Res. Commun., 1973, v. 54, p. 808 815.

131. Taniguchi H., Imai Y., Sato R. Role of the electron transfer system in microsomal drug monooxygenase reaction catalyzed by cytochrome P450 // Arch. Biochem. Biophys., 1984, v. 232, p. 585−596.

132. Taton T.A., Mirkin C.A., Letsinger R.L. Scanometric DNA array detection with nanoparticle probes // Science, 2000, v. 289, p. 1757−1760.

133. Tatton W., Chalmers-Redman R., Tatton N. Neuroprotection by deprenyl and other propargylamines: glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase rather than monoamine oxidase В // J. Neural Transm., 2003, v. 110, p. 509−515.

134. Thanavala Y.M., Brown S.E., Howard C.R., Roitt I.M., Steward M.W. A surrogate hepatitis В virus antigenic epitope represented by a synthetic peptide and an internal image antiidiotype antibody//J. Exp. Med., 1986,164(1), 227−236.

135. Uvarov V. Yu., Leshenko A.V., Rukavishnikov I.G., Dzhuzenova Ch.S., Archakov A.I. Effect of microenviroment and intermolecular cross-linking on the tertiary structure of cytochrome P450LM2 // Biokhimiya, 1988, v. 53, p. 1433−1438.

136. Uvarov V. Yu., Tretiakov V.E., Leshenko A.V., Rukavishnikov I.G., Dzhuzenova Ch.S., Tretiakova L.Z., Archakov A.I. Effect of microenviroment on the tertiary structure of cytochrome P450LM2 // Eur. J. Biochem., 1990, v. 181, p. 391−396.

137. Villano S.A., Vlahov D., Nelson K.E., Kohn S., Thomas D.L. Persistence of viremia and the importance of long-term follow-up after acute hepatitis С infection // Hepatology, 1999, v. 29, p. 908−914.

138. Voznesensky A.I., Schenkman J.B. Quantitative analysis of electrostatic interactions between NADPH-cytochrome P450 reductase and cytochrome P450 enzymes//J. Biol. Chem., 1994, v. 269, p. 15 724−15 731.

139. Vuk-Pavlovic S., Blatt Y., Glaudemans C.P., Lancet D., Pecht I. Hapten-linked conformational equilibria in immunoglobulins XRPC-24 and J-539 observed by chemical relaxation // Biophys. J. f 1978, v. 24, p. 161−174.

140. Waters J.A., Kennedy M., Voet P., Hauser P., Petre J., Carman W., Thomas H. C. Loss of the common «a» determinant of hepatitis В surface antigen by a vaccine-induced escape mutant//J. Clin. Invest., 1992, v. 90, p. 2543−2547.

141. Welschof M., Terness P., Kipriyanov S.M., Stanescu D., Breitling F., Dorsam H., Dubel S., Little M., Opelz G. The antigen-binding domain of a human lgG-anti-F (ab')2 autoantibody//Proc. Natl. Acad. Sci USA, 1997, v. 94, p. 1902−1907.

142. Wiedermann G., Ambrosch F., Kremsner P., Kunz C., Hauser P., Simoen E., Andre F., Safary A. Reactogenicity and immunogenicity of different lots of a yeast-derived hepatitis В vaccine//Postgrad Med. J., 1987, v. 63, p. 109−113.

143. Yamaguchi N., Tokushige K., Yamauchi K., Hayashi N. Humoral immune response in Japanese acute hepatitis patients with hepatitis С virus infection // Can. J. Gastroenterol., 2000, v. 14, p. 593−598.

144. Yang C.S., Baskin L.B., Wu N.S. Lateral mobility and organization of microsomal proteins. In: Abstracts of 5-th International Symposium on Microsomes and Drug Oxidations. Tokio, Japan, 1981, p. 6.

145. Yasukochi Y., Maters B.S. Some properties of a detergent-solubilized NADPH-cytochrome с (cytochrome P450) reductase: purified by biospecific affinity chromatography//J. Biol. Chem., 1976, v. 251, p. 5337−5344.

146. Yeung D., Gill A., Maule C.H., Davies R.J. Detection and quantification of biomolecular interactions with optical biosensors // Trends in analytical chemistry, 1995, v. 14, p. 49−56.

147. Yun C. -H., Ahn Т., Guengerich F.P. Conformational change and activation of cytochrome P4502B1 induced by salt and phospholipid // Arch. Biochem. Biophys., 1998, v. 356, p. 229−238.

148. Zammatteo N., Jeanmart L., Hamels S., Courtois S., Louette P., Hevesi L., Remacle J. Comparison between different strategies of covalent attachment of DNA to glass surfaces to build DNA microarrays II Anal. Biochem., 2000, v. 280, p. 143 150.

Заполнить форму текущей работой