?-Субъединица комплекса COP I дрожжей Hansenula polymorpha: структурно-функциональная организация и роль в гомеостазе кальция

Тип работы:
Диссертация
Предмет:
Биохимия
Страниц:
138


Узнать стоимость новой

Детальная информация о работе

Выдержка из работы

Транспорт белков по секреторным путям в клетках эукариот осуществляется с помощью везикул. & laquo-Жизненный цикл& raquo- везикулы в общих чертах состоит из трёх стадий: формирование везикулы на донорской мембране- слияние везикулы с мембраной-мишеныо- и рециркуляция компонентов, осуществляющих первые две стадии. Первая стадия инициируется цитозольными белковыми комплексами, окаймляющими эти везикулы (coated complexes — & laquo-окаймляющие комплексы& raquo-), которые связываются с донорской мембраной, участвуют в формировании и отпочковывании везикул, а также в сортировке переносимых молекул, и диссоциируют при слиянии везикулы с мембраной-мишенью. Сейчас хорошо охарактеризованы три основных типа транспортных везикул, и они описаны как в клетках высших эукариот, так и у дрожжей. Первыми были описаны клатриновые везикулы в клетках млекопитающих, образующиеся за счёт клатрипового комплекса и осуществляющие эпдоцитоз и транспорт белков из я-/?ш/с-Гольджи-сети (TGN, /ra/w-Golgi-network) к эпдосомам (Pearse, 1976- Pearse and Robinson, 1990). Другой тип везикул, формирующихся с помощью цитозольного белкового комплекса COPI, был также впервые открыт в клетках млекопитающих. Было показано, что эти везикулы отпочковываются от цистерн Гольджи и направляют белки к клеточной поверхности (Orci et al., 1986- Orci et al., 1997). Однако до конца роль COPI везикул не исследована. Благодаря генетическим исследованиям, выполненным при использовании клеток дрожжей, точно известно, что эти везикулы осуществляют обратный транспорт белков из Гольджи в эндоплазматический ретикулум (ЭР), тогда как их участие на других этапах транспорта в секреторных путях остаётся спорным. Третий тип везикул формируется за счёт белков комплекса COPII и осуществляет транспорт белков из ЭР в Гольджи. Эти везикулы были впервые охарактеризованы в клетках дрожжей (Barlowe et al., 1994).

Процесс слияния мембран везикул и секреторных органелл также является немаловажным в жизнедеятельности клетки. Его можно разделить на несколько этапов: инициирующий этап (priming), этап связывания (tethering) и стыковка (docking) мембран с последующим объединением липидного бислоя и содержимого везикул. Многие компоненты, участвующие в этом процессе, уже идентифицированы как в клетках млекопитающих, так и у дрожжей: Secl8/NSF, Secl7/a-SNAP, молекулы SNARE, связывающие комплексы, Rab-ГТФазы и т. д.

Помимо белковых компонентов, немаловажную роль в везикулярном транспорте играют ионы кальция. Гомеостаз Са2+ поддерживается в клетке за счёт транспорта его из окружающей среды и высвобождения из внутриклеточных депо, аккумулирующих ионы Са2+ в ответ на различные физиологические сигналы. Поддержание постоянного л I внутриклеточного уровня Са необходимо для процессов транспорта из ЭР в Гольджи (Beckcrs and Balch, 1989- Baker et al., 1990), транспорта между цистернами Гольджи (Schwaninger et al., 1991) экзоцитоза и эндоцитоза (Burgoyne and Clague, 2003). Ионы Ca2+ играют важную роль в процессе слияния мембран на всех этих этапах.

Данная работа посвящена изучению функционирования а-субъединицы окаймляющего комплекса COPI в клетках дрожжей Hansenula polymorpha. Впервые был охарактеризован ген HpRETl, ортолог гена RET1 S. cerevisiae, кодирующего этот белок. Изучение мутанта retl-27 позволило предположить существование взаимосвязи между везикулярным транспортом и гомеостазом кальция в секреторных путях.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ВЕЗИКУЛЯРНЫЙ ТРАНСПОРТ В КЛЕТКАХ ЭУКАРИОТ

112 ВЫВОДЫ:

1. По комплементации Са2±зависимого и сверхсекреторного фенотипа мутации retl-27 клонирован ген RET1 Н. polymorpha, который кодирует а-субъединицу комплекса COPI.

Аллель retl-27 содержит нонсенс-мутацию и кодирует а-СОР, лишённый 389 С-концевых аминокислотных остатков.

Мутация retl-27 приводит к дефекту созревания белка Gaslp и секреции неправильно свёрнутых форм уроки назы. л I

Идентифицирован мультикопийный супрессор SES1 Са -зависимого фенотипа мутации retl-27. Показано, что делеция гена SES1 приводит к нарушению морфологии вакуолей в клетках Н. polymorpha.

Мутация retl-27 приводит к уменьшению количества белка Pmrlp и нарушению его локализации в клетках Н. polymorpha.

Увеличение количества белка Pmrlp в клетках Н. polymorpha супрессирует некоторые проявления мутации retl-27, а сочетание делеции гена PMR1 и мутации retl-27 летально. Полученные данные указывают на роль везикулярного транспорта в поддержании гомеостаза Са2+ в секреторных путях дрожжей.

113

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Наряду с клетками млекопитающих, дрожжи S. cerevisiae являются классическим модельным организмом для изучения общих закономерностей процесса секреции в клетках эукариот. Вместе с тем, сравнительный анализ участвующих в этих процессах гомологичных белков из разных организмов немаловажен для понимания их функционирования в клетке. В настоящее время, в связи с появлением работ по секвенированию геномов и анализу генов у многих видов дрожжей, имеется возможность изучения процессов секреции на альтернативных модельных системах. Успехи в разработке молекулярной биологии и генетики метилотрофных дрожжей II. polymorpha сделали их привлекательными не только с точки зрения биотехнологии, но и для проведения фундаментальных исследований.

Одним из способов изучения белков, принимающих участие в процессе секреции, является получение мутантов дрожжей как с блоком секреции, так и мутантов со способностью секретировать белки, которые в норме задерживаются внутри клетки. В нашей лаборатории ранее была получена коллекция мутантов дрожжей Н. polymorpha, с улучшенной способностью секретировать гетерологичный белок — урокиназу человека. Наше внимание привлёк мутант из этой коллекции, обладающий Са2±чувствительным фенотипом. Одна из задач дайной работы состояла в клонировании гена, дефект которого приводит к мутаитному фенотипу. В процессе работы был клонирован ген HpRETl, комплементирующий все фенотипические проявления мутантного штамма, и определена его нуклеотидная последовательность. Оказалось, что этот ген кодирует а-субъединицу комплекса COPI. Следующей нашей задачей было определение структурных нарушений в гене HpRETl, приводящих к появлению мутантного фенотипа. Мы показали, что мутантные проявления обусловлены нуклеотидной заменой в гене HpRETl, приводящей, по-видимому, к синтезу укороченного белкового продукта. Замена дикой копии гена HpRETl на укороченный с 3*-конца вариант также приводила к появлению мутантного фенотипа.

Анализ мутантного штамма выявил нарушения, которые могут указывать на то, что дефект а-СОР H. polymorpha, также как и у S. cerevisiae, приводит к нарушению обратного транспорта белков из Гольджи в ЭР, однако, дефект одинаковых областей белков HpRetlp и Retlp приводит к разным мутантным проявлениям.

Следующим этапом нашей работы было выяснение причин возникновения Са2±зависимого фенотипа у мутанта H. polymorpha с дефектом а-СОР. Мы показали, что нарушение а-СОР в клетках H. polymorpha приводит к снижению количества Са2±помпы HpPmrlp и изменению нормального распределения в клетке. Можно считать, что это и является основной причиной возникновения Са2±зависимого фенотипа. Помимо этого, мы показали, что совмещение мутаций retl-27 и Apmrl в одном штамме летально. Эти данные позволяют нам предполагать существование функциональной взаимосвязи между везикулярным транспортом и гомеостазом Са2+ в секреторных путях.

В задачи нашей работы входило также и выявление других белков, взаимодействующих с а-СОР Н. polymorpha. При клонировании генов, которые в мультикопийном состоянии супрессируют Са2±зависимый фенотип мутанта retl-27, был выявлен белок HpSeslp, функция которого ранее была неизвестна. Супрессия Са2±зависимого фенотипа и дефекта скорости роста мутанта retl-27 при сверхэкспрессии гена HpSESl, а также нарушение морфологии вакуолей у мутанта Asesl позволили нам предположить, что белок HpSeslp участвует в везикулярном транспорте и, возможно, является компонентом системы слияния мембран.

Принципиально новым в данной работе является следующее: (1) впервые клонирован ген Н. polymorpha, кодирующий а-субъединицу комплекса COPI и изучены его структурные особенности- (2) выявлена функциональная взаимосвязь между белками HpRetlp и HpPmrlp — в нашей работе было впервые показано, что дефект СОР I -зависимого везикулярного транспорта приводит к нарушению распределения белка Pmrlp в клетке и уменьшению его количества- кроме того, впервые обнаружен эффект комбинативной летальности при совмещении в одном штамме двух нелетальных мутаций — retl-27 и Apmrl- (4) в работе

2+ впервые показано, что ген HpSESl, который является мультикопийным супрессором Са -зависимого фенотипа, возникающего вследствие дефекта гена а-СОР, участвует в контроле морфогенеза вакуолей дрожжей.

ПоказатьСвернуть

Содержание

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ & laquo-ВЕЗИКУЛЯРНЫЙ ТРАНСПОРТ В КЛЕТКАХ

ЭУКАРИОТ& raquo-.

1. Организация путей секреции в клетках дрожжей.

2. Транспортные везикулы.

2.1 СОРИ везикулы.

2.1.1 Структура комплекса СОРИ.

2.1.2 Сортировка белков в СОРИ везикулы.

2.2 COPI везикулы.

2.2.1 Структура комплекса COPI.

2.2.2 Участие COPI везикул в прямом транспорте между эндоплазматическим ретикулумом и аппаратом Гольджи.

2.2.3 Участие COPI везикул в обратном транспорте между эндоплазматическим ретикулумом и аппаратом Гольджи.

2.2.2.1 Транспорт белков, содержащих дилизиновый сигнал.

2.2.2.2 Транспорт белков, содержащих сигнал K/HDEL и белка Seel2р.

2.2.3 Модели COPI-зависимого транспорта между эндоплазматическим ретикулумом и аппаратом Гольджи.

2.3 Клатриновые везикулы.

3. Транспорт между цистернами аппарата Гольджи.

3.1 Структура аппарата Гольджи.

3.2 Модели транспорта белков между цистернами аппарата Гольджи.

4. Слияние мембран.

4.1 Молекулы SNARE.

4.2 Регуляция сборки комплекса SNARE.

4.2.1 SM-белки — семейство белков Secl/Muncl8.

4.2.2 Белок Seel8р.

4.3 Система связывающих белков.

5 Роль ионов кальция в секреторных путях.

5.1 Кальциевые помпы.

5.2.1 Кальциевые помпы дрожжей.

5.3 Ответ клетки на снижение Са2+ в секреторных путях.

Список литературы

1. Агафонов, М.О., Деев, А.В., Kim, S.Y., Sohn, J.H., СЬо1, Е.8., Тер-Аванесян, М.Д. (2003). Новый подхок к клонированию и функциональному анализу геномной ДНК метилотрофных дрожжей Hansenula polymorpha. Молекулярная биология 37, 81−87.

2. Богданова, А.И., Агафонов, М.О., Тер-Аванесян, М.Д. (2000а). Нестабильность плазмид у метилотрофных дрожжей Hansenula polymorpha: захваты фрагментов хромосомной ДНК интегративными плазмидами. Молекулярная биология 34, 28−35.

3. Богданова, А.И., Агафонов, М.О., Тер-Аванесян, М.Д. (2000b). Нестабильность плазмид у метилотрофных дрожжей Hansenula polymorpha: захваты фрагментов хромосомной ДНК репликативными плазмидами. Молекулярная биология 34, 36−40.

4. Захаров, И.А., Кожин, С.А., Кожина, Т.Н., Фёдорова, И.В. (1984). Сборник методик по генетике дрожжей-сахаромицетов. Л: Наука.

5. Красатюк, Г. А., Якубов, Л.3., Синицын, В.В., Домогатский, С.П., Рохлин, О.В., Кольцова, С.В., Быняева, Н.А., Фёдорова, З.Д., Самсонов, Г. В. (1989) Моноклональные антитела для одностадийного получения высокоочищенной урокиназы. Биополимеры и клетка 5−3, 95−101.

6. Agaphonov, М.О., Beburov.M.Y., Ter-Avanesyan, M.D., and Smirnov, V.N. (1995). A disruption-replacement approach for the targeted integration of foreign genes in Hansenula polymorpha. Yeast 11, 1241−1247.

7. Agaphonov, M.O., Romanova, N.V., Trushkina.P.M., Smirnov, V.N., and Ter-Avanesyan.M.D. (2002). Aggregation and retention of human urokinase type plasminogen activator in the yeast endoplasmic reticulum. BMC. Mol. Biol. 3, 15.

8. Agaphonov, M.O., Trushkina.P.M., Sohn, J.H., Choi, E.S., Rhee, S.K., and Ter-Avanesyan.M.D. (1999). Vectors for rapid selection of integrants with different plasmid copy numbers in the yeast Hansenula polymorphaDW. Yeast 15, 541−551.

9. Ahluwalia, J.P., Topp.J.D., Weirather, K., Zimmerman, M., and Stamnes.M. (2001). A role for calcium in stabilizing transport vesicle coats. J. Biol. Chem. 276, 34 148−34 155.

10. Antebi, A. and Fink, G.R. (1992). The yeast Ca (2+)-ATPase homologue, PMR1, is required for normal Golgi function and localizes in a novel Golgi-like distribution. Mol. Biol. Cell 3, 633−654.

11. Aridor, M., Fish, K.N., Bannykh, S., Weissman.J., Roberts, Т.Н., Lippincott-Schwartz, J., and Balch, W.E. (2001). The Sari GTPase coordinates biosynthetic cargo selection with endoplasmic reticulum export site assembly. J. Cell Biol. 152, 213−229.

12. Aridor, M. and Traub, L.M. (2002). Cargo selection in vesicular transport: the making and breaking of a coat. Traffic. 3, 537−546.

13. Astrup T. and Muellerts S. (1952). Fibrin plate method for estimating fibrinolytic activity. Arch. Biochcm. Biophys 40, 346−351.

14. Axelsen, K.B. and Palmgren.M.G. (1998). Evolution of substrate specificities in the P-type ATPase superfamily. J. Mol. Evol. 46, 84−101.

15. Axelsen, K.B. and Palmgren, M.G. (2001). Inventory of the superfamily of P-type ion pumps in Arabidopsis. Plant Physiol 126, 696−706.

16. Baker, D., Wuestehube, L" Schekman, R., Botstein, D., and Segev, N. (1990). GTP-binding Yptl protein and Ca2+ function independently in a cell-free protein transport reaction. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A 87, 355−359.

17. Ballou C.E. (1990). Isolation, characterisation and properties of Saccharomyces cerevisiae mnn mutants with nonconditional protein glycosylation defects. In Methods in Ensymology, Academic Press, Inc.), pp. 440−470.

18. Bannykh, S.I., Nishimura, N., and Balch, W.E. (1998). Getting into the Golgi. Trends Cell Biol. 5,21−25.

19. Bannykh, S.I., Rowe, T., and Balch, W.E. (1996). The organization of endoplasmic reticulum export complexes. J. Cell Biol. 135, 19−35.

20. Banta, L.M., Robinson, J.S., Klionsky, D.J., and Emr, S.D. (1988). Organelle assembly in yeast: characterization of yeast mutants defective in vacuolar biogenesis and protein sorting. J. Cell Biol. 107,1369−1383.

21. Barlowe, C. (1997). Coupled ER to Golgi transport reconstituted with purified cytosolic proteins. J. Cell Biol. 139, 1097−1108.

22. Barlowe, C. and Schekman, R. (1993). SEC12 encodes a guanine-nucleotide-exchange factor essential for transport vesicle budding from the ER. Nature 365, 347−349.

23. Barr, F.A., Nakamura, N., and Warren, G. (1998). Mapping the interaction between GRASP65 and GM130, components of a protein complex involved in the stacking of Golgi cisternae. EMBO J. 17, 3258−3268.

24. Barrowman.J., Sacher, M., and Ferro-Novick, S. (2000). TRAPP stably associates with the Golgi and is required for vesicle docking. EMBO J. 19, 862−869.

25. Beams, H.W. and Kessel, R.G. (1968). The Golgi apparatus: structure and function. Int. Rev. Cytol. 23: 209−76., 209−276.

26. Becker, B. and Melkonian, M. (1996). The secretory pathway of protists: spatial and functional organization and evolution. Microbiol. Rev. 60, 697−721.

27. Beckers, C.J. and Balch, W.E. (1989). Calcium and GTP: essential components in vesicular trafficking between the endoplasmic reticulum and Golgi apparatus. J. Cell Biol. 108, 12 451 256.

28. Bednarek.S.Y., Ravazzola, M., Hosobuchi, M., Amherdt, M., Perrelet, A., Schekman, R., and Orci, L. (1995). COPI- and COPII-coated vesicles bud directly from the endoplasmic reticulum in yeast. Cell 83, 1183−1196.

29. Belden, W.J. and Barlowe.C. (2001). Role of Erv29p in collecting soluble secretory proteins into ER-derived transport vesicles. Science 294, 1528−1531.

30. Bennett, M.K., Garcia-Arraras, J.E., Elferink, L.A., Peterson, K., Fleming, A.M., Hazuka, C.D., and Scheller, R.H. (1993). The syntaxin family of vesicular transport receptors. Cell 74, 863 873.

31. Boehm, J., Letourncur, F., Ballensiefen, W., Ossipov, D., Demolliere, C., and Schmitt, H.D. (1997). Secl2p requires Rerlp for sorting to coatomer (COPI)-coated vesicles and retrieval to the ER. J. Cell Sci. 110,991−1003.

32. Boehm, M. and Bonifacino, J.S. (2001). Adaptins: the final recount. Mol. Biol. Cell 12, 29 072 920.

33. Bogdanova, A.I., Agaphonov, M.O., and Ter-Avanesyan, M.D. (1995). Plasmid reorganization during integrative transformation in Hansenula polymorpha. Yeast 11, 343 353.

34. Bogdanova, A.I., Kustikova, O.S., Agaphonov, M.O., and Ter-Avanesyan, M.D. (1998). Sequences of Saccharomyces cerevisiae 2 microns DNA improving plasmid partitioning in Hansenula polymorpha. Yeast, 15- 14(l),-9.

35. Booth, C. and Koch, G.L. (1989). Perturbation of cellular calcium induces secretion of luminal ER proteins. Cell 59, 729−737.

36. Brigance, W.T., Barlowe, C., and Graham, T.R. (2000). Organization of the yeast Golgi complex into at least four functionally distinct compartments. Mol. Biol. Cell 11,171−182.

37. Bryant, N.J. and James, D.E. (2001). Vps45p stabilizes the syntaxin homologue Tlg2p and positively regulates SNARE complex formation. EMBO J. 20, 3380−3388.

38. Burgoyne, R.D. and Clague, M.J. (2003). Calcium and calmodulin in membrane fusion. Biochim. Biophys. Acta 1641, 137−143.

39. Burk, S.E., Lytton, J., MacLennan, D.H., and ShuIl, G.E. (1989). cDNA cloning, functional expression, and mRNA tissue distribution of a third organellar Ca2+ pump. J. Biol. Chem. 264, 18 561−18 568.

40. Button, D. and Eidsath, A. (1996). Aequorin targeted to the endoplasmic reticulum reveals heterogeneity in luminal Ca++ concentration and reports agonist- or IP3-induced release of Ca++. Mol. Biol. Cell 7,419−434.

41. Cao, X., Ballew, N., and Barlowe, C. (1998). Initial docking of ER-derived vesicles requires Usolp and Yptlp but is independent of SNARE proteins. EMBO J. 17, 2156−2165.

42. Carafoli, E. and Brini, M. (2000). Calcium pumps: structural basis for and mechanism of calcium transmembrane transport. Curr. Opin. Chem. Biol. 4, 152−161.

43. Carlson, M. and Botstein, D. (1982). Two differentially regulated mRNAs with different 5' ends encode secreted with intracellular forms of yeast invertase. Cell 28, 145−154.

44. Carr, C.M., Grote, E., Munson, M., Hughson, F.M., and Novick, P.J. (1999). Scclp binds to SNARE complexes and concentrates at sites of secretion. J. Cell Biol. 146, 333−344.

45. Cosson, P., Demolliere, C., Hennecke, S., Duden, R., and Letoumeur, F. (1996). Delta- and zeta-COP, two coatomer subunits homologous to clathrin-associated proteins, are involved in ER retrieval. EMBO J. 15,1792−1798.

46. Cosson, P. and Letoumeur, F. (1994). Coatomer interaction with di-lysine endoplasmic reticulum retention motifs. Science 263, 1629−1631. ft

47. Cox, J.S., Chapman, R.E., and Walter, P. (1997). The unfolded protein response coordinates the production of endoplasmic reticulum protein and endoplasmic reticulum membrane. Mol. Biol. Cell 8, 1805−1814.

48. Cronin, S.R., Khoury, A., Ferry, D.K., and Hampton, R.Y. (2000). Regulation of HMG-CoA reductase degradation requires the P-type ATPase Codlp/Spflp. J. Cell Biol. 148, 915−924.

49. Cronin, S.R., Rao, R., and Hampton, R.Y. (2002). Codlp/Spflp is a P-type ATPase involved in ER function and Ca2+ homeostasis. J. Cell Biol. 157, 1017−1028.

50. Cunningham, K.W. and Fink, G.R. (1994a). Ca2+ transport in Saccharomyces cerevisiae. J. Exp. Biol. 196: 157−66., 157−166.

51. Cunningham, K.W. and Fink, G.R. (1994b). Calcineurin-dependent growth control in Saccharomyces cerevisiae mutants lacking PMC1, a homolog of plasma membrane Ca2+ ATPases. J. Cell Biol. 124, 351−363.

52. Cunningham, K.W. and Fink, G.R. (1996). Calcineurin inhibits FCA7-dependent H+/Ca2+ exchange and induces Ca2+ ATPases in Saccharomyces cerevisiae. Mol. Cell Biol. 16, 22 262 237.

53. Donaldson, J.G. and Jackson, C.L. (2000). Regulators and effectors of the ARF GTPases. Curr. Opin. Cell Biol. 12, 475−482.

54. Duden, R., Hosobuchi, M., Hamamoto, S., Winey.M., Byers, B., and Schekman.R. (1994). Yeast beta- and beta'-coat proteins (COP). Two coatomer subunits essential for endoplasmic reticulum-to-Golgi protein traffic. J. Biol. Chem. 269, 24 486−24 495.

55. Duden, R., Kajikawa, L., Wuestehube, L., and Schekman, R. (1998). epsilon-COP is a structural component of coatomer that functions to stabilize а-СОР. EMBO J. 17, 985−995.

56. Dulubova, I., Sugita, S., Hill, S., Hosaka, M., Fernandez, I., Sudhof, T.C., and Rizo, J. (1999). A conformational switch in syntaxin during exocytosis: role of Muncl8. EMBO J. 18, 43 724 382.

57. Dumas, J.J., Merithew, E., Sudharshan, E., Rajamani, D., Hayes, S., Lawe, D., Corvera, S., and Lambright, D.G. (2001). Multivalent endosome targeting by homodimeric EEA1. Mol. Cell 8, 947−958.

58. Dunn, Т., Gable, К., and Beeler, T. (1994). Regulation of cellular Ca2+ by yeast vacuoles. J. Biol. Chem. 269, 7273−7278.

59. Eugster, A., Frigerio, G., DaIe, M., and Duden, R. (2000). COP I domains required for coatomer integrity, and novel interactions with ARF and ARF-GAP. EMBO J. 19, 39 053 917.

60. Farquhar, M.G. and Palade, G.E. (1998). The Golgi apparatus: 100 years of progress and controversy. Trends Cell Biol. 8, 2−10.

61. Fasshauer.D. (2003). Structural insights into the SNARE mechanism. Biochim. Biophys. Acta 1641, 87−97.

62. Fasshauer.D., Sutton, R.B., Brunger, A.T., and Jahn, R. (1998). Conserved structural features of the synaptic fusion complex: SNARE proteins reclassified as Q- and R-SNAREs. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A 95, 15 781−15 786.

63. Fernandez, С J. and Warren, G. (1998). In vitro synthesis of sulfated glycosaminoglycans coupled to inter-compartmental Golgi transport. J. Biol. Chem. 273, 19 030−19 039.

64. Fiedler, K., Veit, M., Stamnes, M.A., and Rothman, J.E. (1996). Bimodal interaction of coatomer with the p24 family of putative cargo receptors. Science 273, 1396−1399.

65. Gascon, S., Neumann, N.P., and LampenJ.O. (1968). Comparative study of the properties of the purified internal and external invertases from yeast. J. Biol. Chem. 243, 1573−1577.

66. Gaynor, E.C. and Emr, S.D. (1997). COPI-independent anterograde transport: cargo-selective ER to Golgi protein transport in yeast COPI mutants. J. Cell Biol. 136, 789−802.

67. Gaynor, E.C., Graham, T.R., and Emr, S.D. (1998). COPI in ER/Golgi and intra-Golgi transport: do yeast COPI mutants point the way? Biochim. Biophys. Acta 1404, 33−51.

68. Gaynor, E.C., te, H.S., Graham, T.R., Aebi, M., and Emr, S.D. (1994). Signal-mediated retrieval of a membrane protein from the Golgi to the ER in yeast. J. Cell Biol. 127, 653 665.

69. Gerst, J.E. (2003). SNARE regulators: matchmakers and matchbreakers. Biochim. Biophys. Acta 1641, 99−110.

70. Gething, M.J. and Sambrook, J. (1992). Protein folding in the cell. Nature 355, 33−45.

71. Gietz, R.D., Schiestl.R.H., Willems, A.R., and Woods, R.A. (1995). Studies on the transformation of intact yeast cells by the LiAc/SS-DNA/PEG procedure. Yeast 11, 355 360.

72. Gietz, R.D. and Woods, R.A. (2002). Transformation of yeast by lithium acetate/single-stranded carrier DNA/polyethylene glycol method. Methods Enzymol. 350: 87−96., 87−96.

73. Gill, D.L., Waldron, R.T., Rys-Sikora, K.E., Ufret-Vincenty, C.A., Graber.M.N., Favre, C.J., and Alfonso, A. (1996). Calcium pools, calcium entry, and cell growth. Biosci. Rep. 16, 139 157.

74. Gleeson M.A. and Sudbeiy P.E. (1988). The Methylotrophic Yeasts. Yeast 4, 1−15.

75. Glick, B.S. (2000). Organization of the Golgi apparatus. Curr. Opin. Cell Biol. 12, 450−456.

76. Greene, В., Liu, S.H., Wilde, A., and Brodsky, F.M. (2000). Complete reconstitution of clathrin basket formation with recombinant protein fragments: adaptor control of clathrin self-assembly. Traffic. 1, 69−75.

77. Gunteski-Hamblin, A.M., Clarke, D.M., and Shull, G.E. (1992). Molecular cloning and tissue distribution of alternatively spliced mRNAs encoding possible mammalian homologues of the yeast secretory pathway calcium pump. Biochemistry 31, 7600−7608.

78. Hauri, H.P., Kappeler, F., Andersson, H., and Appenzeller, C. (2000). ERGIC-53 and traffic in the secretory pathway. J. Cell Sci. 113, 587−596.

79. Herbert, D, Phipps P.J., and Strange R.E. Chemical analysis of microbial cells. Methods Microbiol 5,244−249. 1971.

80. Herscovics, A. and Orlean.P. (1993). Glycoprotein biosynthesis in yeast. FASEB J. 7, 540 550.

81. Hollander, I.J. (1987). Plasminogen activators and their potential in therapy. Crit Rev. Biotechnol. 6,253−271.

82. Holroyd, C., Kistner, U., Annaert, W., and Jahn, R. (1999). Fusion of endosomes involved in synaptic vesicle recycling. Mol. Biol. Cell 10, 3035−3044.

83. Hosobuchi, M., Kreis, T., and Schekman, R. (1992). SEC21 is a gene required for ER to Golgi protein transport that encodes a subunit of a yeast coatomer. Nature 360, 603−605.

84. Hsu, S.C., Ting.A.E., Hazuka.C.D., Davanger, S., Kenny, J.W., Kee, Y., and Scheller, R.H. (1996). The mammalian brain rsec6/8 complex. Neuron 17,1209−1219.

85. Huh, W.K., Falvo, J.V., Gerke.L.C., Carroll, A.S., Howson, R.W., Weissman, J.S., and 0'Shea, E.K. (2003). Global analysis of protein localization in budding yeast. Nature 425, 686−691.

86. Inoue, H., Nojima, H., and Okayama, H. (1990). High efficiency transformation of Escherichia coli with plasmids. Gene 96, 23−28.

87. Iodice, L., Sarnataro, S., and Bonatti, S. (2001). The carboxyl-terminal valine is required for transport of glycoprotein CD8 alpha from the endoplasmic reticulum to the intermediate compartment. J. Biol. Chem. 276,28 920−28 926.

88. Itin, C., Kappeler, F., Linstedt, A.D., and Hauri, H.P. (1995). A novel endocytosis signal related to the KKXX ER-retrieval signal. EMBO J. 14, 2250−2256.

89. Jackson, С.L. and Casanova, J.E. (2000). Turning on ARF: the Sec7 family of guanine-nucleotide-exchange factors. Trends Cell Biol. 10, 60−67.

90. Jedd, G., Richardson, C., Litt, R., and Segev.N. (1995). The Yptl GTPase is essential for the first two steps of the yeast secretory pathway. J. Cell Biol. 131, 583−590.

91. Kaiser, C.A. and Schekman, R. (1990). Distinct sets of SEC genes govern transport vesicle formation and fusion early in the secretory pathway. Cell 61, 723−733.

92. Kang, H.A., Kim, J.Y., Ko, S.M., Park, C.S., Ryu, D.D., Sohn, J.H., Choi, E.S., and Rhee, S.K. (1998a). Cloning and characterization of the Hansenula polymorpha homologue of the Saccharomyces cerevisiae PMR1 gene. Yeast 14, 1233−1240.

93. Kang, H.A., Sohn, J.H., Choi, E.S., Chung, B.H., Yu, M.H., and Rhee, S.K. (1998b). Glycosylation of human alpha 1-antitrypsin in Saccharomyces cerevisiae and methylotrophic yeasts. Yeast 14, 371−381.

94. Kim, M.D., Kang, H.A., Rhee, S.K., and Seo, J.H. (2001). Effects of methanol on expression of an anticoagulant hirudin in recombinant Hansenula polymorpha. J. Ind. Microbiol. Biotechnol. 27,58−61.

95. Klumperman, J. (2000). Transport between ER and Golgi. Curr. Opin. Cell Biol. 12, 445 449.

96. Kornfeld, R. and Komfeld, S. (1985). Assembly of asparagine-linked oligosaccharides. Arinu. Rev. Biochem. 54: 631−64., 631−664.

97. Kushnirov, V.V. (2000) Rapid and reliable protein extraction from yeast. Yeast. 30−16(9), 857−60.

98. Kuranda, M.J. and Robbins, P.W. (1991). Chitinase is required for cell separation during growth of Saccharomyces cerevisiae. J. Biol. Chem. 266, 19 758−19 767.

99. Ladinsky, M.S., Mastronarde, D.N., Mcintosh, J.R., Howell, K.E., and Staehelin, L.A. (1999). Golgi structure in three dimensions: functional insights from the normal rat kidney cell. J. Cell Biol. 144, 1135−1149.

100. Laemmli, U.K. (1970). Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature 227, 680−685.

101. Lavoie, C., Paiement, J., Dominguez, M., Roy, L., Dahan, S., Gushue, J.N., and Bergeron, J.J. (1999). Roles for a (2)p24 and COPI in endoplasmic reticulum cargo exit site formation. J. Cell Biol. 146, 285−299.

102. Letourneur, F., Gaynor, E.C., Hennecke, S., Demolliere, C., Duden, R., Emr, S.D., Riezman, H., and Cosson, P. (1994). Coatomer is essential for retrieval of dilysine-tagged proteins to the endoplasmic reticulum. Cell 79, 1199−1207.

103. Lewis, M.J., Nichols, B.J., Prescianotto-Baschong, C., Riezman, H., and Pelham.H.R. (2000). Specific retrieval of the exocytic SNARE Snclp from early yeast endosomes. Mol. Biol. Cell 77,23−38.

104. Lewis, M.J. and Pelham, H.R. (1996). SNARE-mediated retrograde traffic from the Golgi complex to the endoplasmic reticulum. Cell %19−85, 205−215.

105. Lewis, M.J., Rayner, J.C., and Pelham, H.R. (1997). A novel SNARE complex implicated in vesicle fusion with the endoplasmic reticulum. EMBO J. 16, 3017−3024.

106. Lijncn, H.R. and Collen, D. (1991). Strategies for the improvement of thrombolytic agents. Thromb. Haemost. 66, 88−110.

107. Lin, R.C. and Scheller, R.H. (2000). Mechanisms of synaptic vesicle exocytosis. Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 16: 19−49., 19−49.

108. Locke, E.G., Bonilla, M., Liang, L., Takita, Y., and Cunningham, K.W. (2000). A homolog of voltage-gated Ca24″ channels stimulated by depletion of secretory Ca24″ in yeast. Mol. Cell Biol. 20, 6686−6694.

109. Lodish, H.F. and Kong, N. (1990). Perturbation of cellular calcium blocks exit of secretory proteins from the rough endoplasmic reticulum. J. Biol. Chem. 265, 10 893−10 899.

110. Lowe, M. and Kreis, T.E. (1995). In vitro assembly and disassembly of coatomer. J. Biol. Chem. 270, 31 364−31 371.

111. Martinez-Menarguez, J.A., Geuze, H.J., Slot, J.W., and Klumperman, J. (1999). Vesicular tubular clusters between the ER and Golgi mediate concentration of soluble secretory proteins by exclusion from COPI-coated vesicles. Cell 98, 81−90.

112. Matsuoka, K., Orci, L., Amherdt, M., Bednarek, S.Y., Hamamoto, S., Schekman, R., and Yeung, T. (1998). COPII-coated vesicle formation reconstituted with purified coat proteins and chemically defined liposomes. Cell 93, 263−275.

113. Mayer, A., Wickner, W., and Haas, A. (1996). Secl8p (NSF)-driven release of Seel7p (a-SNAP) can precede docking and fusion of yeast vacuoles. Cell 85, 83−94.

114. Meldolesi, J. and Pozzan, T. (1998). The endoplasmic reticulum Ca2+ store: a view from the lumen. Trends Biochem. Sci. 23, 10−14.

115. Mellman, I. and Simons, K. (1992). The Golgi complex: in vitro Veritas? Cell 68, 829−840.

116. Mironov, A.A., Beznoussenko, G.V., Nicoziani, P., Martella, 0., Trucco, A" Kweon, H.S., Di Giandomenico, D., Polishchuk, R.S., Fusella, A., Lupetti, P., Berger, E.G., Geerts, W.J. ,

117. Koster.A.J., Burger, K.N., and Luini, A. (2001). Small cargo proteins and large aggregates can traverse the Golgi by a common mechanism without leaving the lumen of cisternae. J. Cell Biol. 155,1225−1238.

118. Misura, K.M., Scheller, R.H., and Weis, W.I. (2000). Three-dimensional structure of the neuronal-Secl-syntaxin la complex. Nature 404, 355−362.

119. Miyawaki, A., Llopis, J., Heim, R., McCaffery, J.M., Adams, J.A., Ikura, M., and Tsien, R.Y. (1997). Fluorescent indicators for Ca2+ based on green fluorescent proteins and calmodulin. Nature 388, 882−887.

120. Mollenhauer, H.H. and Morre, D.J. (1991). Perspectives on Golgi apparatus form and function. J. Electron Microsc. Tech. 17, 2−14.

121. Morin-Ganet, M.N., Rambourg, A., Deitz, S.B., Franzusoff, A., and Kepes, F. (2000). Morphogenesis and dynamics of the yeast Golgi apparatus. Traffic. 1, 56−68.

122. Mousavi, S.A., Malerod, L., Berg, Т., and Kjeken, R. (2004). Clathrin-dependent endocytosis. Biochem. J. 377, 1−16.

123. Muniz, M., Nuoffer, C., Hauri, H.P., and Riezman, H. (2000). The Emp24 complex recruits a specific cargo molecule into endoplasmic reticulum-derived vesicles. J. Cell Biol. 148, 925 930.

124. Musacchio, A., Smith, C.J., Roseman, A.M., Harrison, S.C., Kirchhausen, T., and Pearse.B.M. (1999). Functional organization of clathrin in coats: combining electron cryomicroscopy and X-ray crystallography. Mol. Cell 3, 761−770.

125. Neer, E.J. and Smith, T.F. (2000). A groovy new structure. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A 97, 960−962.

126. Nicholson, K.L., Munson, M., Miller, R.B., Filip.T.J., Fairman, R., and Hughson, F.M. (1998). Regulation of SNARE complex assembly by an N-terminal domain of the t-SNARE Ssolp. Nat. Struct. Biol. 5, 793−802.

127. Novick, P., Field, C., and Schekman, R. (1980). Identification of 23 complementation groups required for post-translational events in the yeast secretory pathway. Cell 21, 205−215.

128. Nufer, 0., Guldbrandsen, S., Degen, M., Kappeler, F., Paccaud, J.P., Tani, K., and Hauri, H.P. (2002). Role of cytoplasmic C-terminal amino acids of membrane proteins in ER export. J. Cell Sci. 115,619−628.

129. Odorizzi, G., Babst, M., and Emr, S.D. (1998). Fablp PtdIns (3)P 5-kinase function essential for protein sorting in the multivesicular body. Cell 95, 847−858.

130. Ohno, H., Stewart, J., Fournier, M.C., Bosshart, H., Rhee, I., Miyatake, S., Saito, T., Gallusser, A., Kirchhausen, T., Bonifacino, J.S. (1995). Interaction of tyrosine-based sorting signals with clathrin-associated proteins. Science 269, 1872−1875.

131. Orci, L., Glick, B.S., and Rothman, J.E. (1986). A new type of coated vesicular carrier that appears not to contain clathrin: its possible role in protein transport within the Golgi stack. Cel 46, 171−184.

132. Orci, L., Perrelet, A., Ravazzola, M., Amherdt, M., Rothman, J.E., and Schekman, R. (1994). Coatomer-rich endoplasmic reticulum. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A 91, 11 924−11 928.

133. Orci, L., Stamnes, M., Ravazzola, M., Amherdt, M., Perrelet, A., Sollner, T.H., and Rothman, J.E. (1997). Bidirectional transport by distinct populations of COPI-coated vesicles. Cell 90, 335−349.

134. Packeiser, A.N., Urakov, V.N., Polyakova.Y.A., Shimanova, N.I., Shcherbukhin, V.D., Smirnov, V.N., and Ter-Avanesyan, M.D. (1999). A novel vacuolar protein encoded by SSU21 /MCD4 is involved in cell wall integrity in yeast. Yeast 15,1485−1501.

135. Pavel, J., Harter, C., and Wieland, F.T. (1998). Reversible dissociation of coatomer: functional characterization of a р/5-coat protein subcomplex. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A 95, 2140−2145.

136. Pearse, B.M. (1976). Clathrin: a unique protein associated with intracellular transfer of membrane by coated vesicles. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A 73, 1255−1259.

137. Pearse, B.M. and Robinson, M.S. (1990). Clathrin, adaptors, and sorting. Annu. Rev. Cell Biol. 6: 151−71., 151−171.

138. Pelham, H.R. (1994). About turn for the COPs? Cell 79, 1125−1127.

139. Pelham, H.R. (1999). SNAREs and the secretory pathway-lessons from yeast. Exp. Cell Res. 247,1−8.

140. Pelham, H.R. (2002). Insights from yeast endosomes. Curr. Opin. Cell Biol. 14,454−462.

141. Pelham, H.R. and Rothman, J.E. (2000). The debate about transport in the Golgi two sides of the same coin? Cell 102, 713−719.

142. Peter, F., Plutner, H., Zhu, H., Kreis.T.E., and Balch.W.E. (1993). p-COP is essential for transport of protein from the endoplasmic reticulum to the Golgi in vitro. J. Cell Biol. 122, 1155−1167.

143. Peters, C. and Mayer, A. (1998). Ca2+/calmodulin signals the completion of docking and triggers a late step of vacuole fusion. Nature 396, 575−580.

144. Pinton, P., Pozzan, T., and Rizzuto, R. (1998). The Golgi apparatus is an inositol 1,4,5-trisphosphate-sensitive Ca2+ store, with functional properties distinct from those of the endoplasmic reticulum. EMBO J. 17, 5298−5308.

145. Porat, A. and Elazar, Z. (2000). Regulation of intra-Golgi membrane transport by calcium. J. Biol. Chem. 275, 29 233−29 237.

146. Powers, J. and Barlowe, C. (2002). Ervl4p directs a transmembrane secretory protein into COPII-coated transport vesicles. Mol. Biol. Cell 13, 880−891.

147. Pozos, T.C., Sekler, I., and Cyert, M.S. (1996). The product of HUM1, a novel yeast gene, is required for vacuolar Ca2+/H+ exchange and is related to mammalian Na+/Ca2+ exchangers. Mol. Cell Biol. 16, 3730−3741.

148. Pringle, J.R., Adams, A.E., Drubin, D.G., and Haarer, B.K. (1991). Immunofluorescence methods for yeast. Methods Enzymol. 194: 565−602., 565−602.

149. Pryor, P.R., Mullock, B.M., Bright, N. A., Gray, S.R., and Luzio, J.P. (2000). The role of intraorganellar Ca2+ in late endosome-lysosome heterotypic fusion and in the reformation of lysosomes from hybrid organelles. J. Cell Biol. 149, 1053−1062.

150. Putney, J.W., Jr. (1986). A model for receptor-regulated calcium entry. Cell Calcium 7, 1−12.

151. Putney, J.W., Jr. (1990). Capacitative calcium entry revisited. Cell Calcium 11, 611−624.

152. Raymond, C.K., Howald-Stevenson, I., Vater, C.A., and Stevens, Т.Н. (1992). Morphological classification of the yeast vacuolar protein sorting mutants: evidence for a prevacuolar compartment in class E vps mutants. Mol. Biol. Cell 3, 1389−1402.

153. Rexach, M.F. and Schekman, R.W. (1991). Distinct biochemical requirements for the budding, targeting, and fusion of ER-derived transport vesicles. J. Cell Biol. 114, 219−229.

154. Rieckmann.P., Albrecht, M., Ehrenreich, H., Weber, Т., and Michel, U. (1995). Semiquantitative analysis of cytokine gene expression in blood and cerebrospinal fluid cells by reverse transcriptase polymerase chain reaction. Res. Exp. Med. (Berl) 195,17−29.

155. Rothman, J .E. and Warren, G. (1994). Implications of the SNARE hypothesis for intracellular membrane topology and dynamics. Curr. Biol. 4, 220−233.

156. Rothman, J.E. and Wieland, F.T. (1996). Protein sorting by transport vesicles. Science 272, 227−234. Щ

157. Rudolph, H.K., Antebi, A., Fink, G. R" Buckley, C.M., Dorman, T.E., LeVitre, J., Davidow, L.S., Mao, J.I., and Moir, D.T. (1989). The yeast secretory pathway is perturbed by mutations in PMR1, a member of a Ca2+ ATPase family. Cell 58, 133−145.

158. Sambrook, J., Fritsch, E.E., and Maniatis, T. (1989). Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 2nd ed. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Press.

159. Sambrook, J.F. (1990). The involvement of calcium in transport of secretory proteins from the endoplasmic reticulum. Cell 20−61, 197−199.

160. Sapperstein, S.K., Walter, D.M., Grosvenor, A.R., Heuser, J.E., and Waters, M.G. (1995). pi 15 is a general vesicular transport factor related to the yeast endoplasmic reticulum to Golgi transport factor Usolp. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A 92, 522−526.

161. Sato, Т.К., Darsow.T., and Emr, S.D. (1998). Vam7p, a SNAP-25-like molecule, and Vam3p, a syntaxin homolog, function together in yeast vacuolar protein trafficking. Mol. Cell Biol. 18, 5308−5319.

162. Scarborough, G.A. (1999). Structure and function of the P-type ATPases. Curr. Opin. Cell Biol. 77,517−522.

163. Schekman, R. and Orci, L. (1996). Coat proteins and vesicle budding. Science 271, 15 261 533.

164. Schindler, R., Itin, C., Zerial, M., Lottspeich, F., and Hauri, H.P. (1993). ERGIC-53, a membrane protein of the ER-Golgi intermediate compartment, carries an ER retention motif. Eur. J. Cell Biol. 61, 1−9.

165. Schmid, S.L. (1997). Clathrin-coated vesicle formation and protein sorting: an integrated process. Annu. Rev. Biochem. 66: 511−48., 511−548.

166. Schroder-Kohne, S., Letoumeur, F., and Riezman, H. (1998). a-COP can discriminate between distinct, functional di-lysine signals in vitro and regulates access into retrograde transport. J. Cell Sci. Ill, 3459−3470.

167. Schroder, S., Schimmoller, F., Singer-Kruger, B., and Riezman, H. (1995). The Golgi-localization of yeast Emp47p depends on its di-lysine motif but is not affected by the ret 1−1 mutation in a-COP. J. Cell Biol. 131, 895−912.

168. Schwaninger.R., Beckers, C.J., and Balch, W.E. (1991). Sequential transport of protein between the endoplasmic reticulum and successive Golgi compartments in semi-intact cells. J. Biol. Chem. 266, 13 055−13 063.

169. Seals, D.F., Eitzen, G., Margolis, N., Wickner.W.T., and Price, A. (2000). A Ypt/Rab effector complex containing the Seel homolog Vps33p is required for homotypic vacuole fusion. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A 97, 9402−9407.

170. Segev, N. (1991). Mediation of the attachment or fusion step in vesicular transport by the GTP-binding Yptl protein. Science 252, 1553−1556.

171. Shaywitz, D.A., Espenshade, P.J., Gimeno, R.E., and Kaiser, C.A. (1997). COPII subunit interactions in the assembly of the vesicle coat. J. Biol. Chem. 272, 25 413−25 416.

172. Sherman, F., Fink, G.R., and Hicks, J.B. (1986). Methods in Yeast Genetics. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Press).

173. Short, B. and Barr, F.A. (2002). Membrane traffic: exocyst III makes a family. Curr. Biol. 12, R18-R20.

174. Sogaard, M., Tani, K., Ye, R.R., Geromanos, S., Tempst, P., Kirchhausen, T., Rothman, J.E., and Sollner, T. (1994). A rab protein is required for the assembly of SNARE complexes in the docking of transport vesicles. Cell 78, 937−948.

175. Sohn, J.H., Choi, E.S., Kim, C.H., Agaphonov, M.O., Ter-Avanesyan, M.D., Rhee, J.S., and Rhee, S.K. (1996). A novel autonomously replicating sequence (ARS) for multiple integration in the yeast HansemdapolymorphaDL-l. J. Bacteriol. 178, 4420−4428.

176. Sonnichsen.B., Lowe, M., Levine, T., Jamsa, E., Dirac-Svejstrup, B., and Warren, G. (1998). A role for giantin in docking COPI vesicles to Golgi membranes. J. Cell Biol. 140, 1013−1021.

177. Sorin, A., Rosas, G., and Rao, R. (1997). PMR1, a Ca2±ATPase in yeast Golgi, has properties distinct from sarco/endoplasmic reticulum and plasma membrane calcium pumps. J. Biol. Chem. 272, 9895−9901.

178. Stenbeck, G., Schreiner, R., Herrmann, D., Auerbach, S., Lottspeich, F., Rothman, J.E., and Wieland, F.T. (1992). y-COP, a coat subunit of non-clathrin-coated vesicles with homology to Sec21p. FEBS Lett. 314, 195−198.

179. Strayle, J., Pozzan.T., and Rudolph, H-K. (1999). Steady-state free Ca2+ in the yeast endoplasmic reticulum reaches only 10 цМ and is mainly controlled by the secretory pathway pump Pmrlp. EMBO J. 18, 4733−4743.

180. Sutterlin, C., Doering, T.L., Schimmoller, F., Schroder, S., and Riezman, H. (1997). Specific requirements for the ER to Golgi transport of GPI-anchored proteins in yeast. J. Cell Sci. 110, 2703−2714.

181. Suzuki, C. and Shimma, Y.I. (1999). P-type ATPase spfl mutants show a novel resistance mechanism for the killer toxin SMKT. Mol. Microbiol. 32, 813−823.

182. TerBush, D.R., Maurice, Т., Roth, D., and Novick, P. (1996). The Exocyst is a multiprotein complex required for exocytosis in Saccharomyces cerevisiae. EMBO J. 15, 6483−6494.

183. Todorow, Z., Spang, A., Carmack, E., Yates, J., and Schekman, R. (2000). Active recycling of yeast Golgi mannosyltransferase complexes through the endoplasmic reticulum. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A 97,13 643−13 648.

184. Towbin, H., Staehelin, T., and Gordon, J. (1979). Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A 76, 4350−4354.

185. Vida, T.A. and Emr, S.D. (1995). A new vital stain for visualizing vacuolar membrane dynamics and endocytosis in yeast. J. Cell Biol. 128, 779−792.

186. Vieira, J. and Messing, J. (1991). New pUC-derived cloning vectors with different selectable markers and DNA replication origins. Gene 100: 189−94., 189−194.

187. Voos, W. and Stevens, Т.Н. (1998). Retrieval of resident late-Golgi membrane proteins from the prevacuolar compartment of Saccharomyces cerevisiae is dependent on the function of Grdl9p. J. Cell Biol. 140, 577−590.

188. Wada, Y., Ohsumi, Y., and Anraku, Y. (1992). Genes for directing vacuolar morphogenesis in Saccharomyces cerevisiae. I. Isolation and characterization of two classes of vam mutants. J. Biol. Chem. 267, 18 665−18 670.

189. Waters, M.G. and Hughson, F.M. (2000). Membrane tethering and fusion in the secretory and endocytic pathways. Traffic. 1, 588−597.

190. Weimbs, T., Mostov, K., Low, S.H., and Hofmann, K. (1998). A model for structural similarity between different SNARE complexes based on sequence relationships. Trends Cell Biol. 8, 260−262.

191. Whyte, J.R. and Munro, S. (2001). The Sec34p/Sec35p Golgi transport complex is related to the exocyst, defining a family of complexes involved in multiple steps of membrane traffic. Dev. Cell 1, 527−537.

192. Whyte, J.R. and Munro, S. (2002). Vesicle tethering complexes in membrane traffic. J. Cell Sci. 115,2627−2637.

193. Wickner, W. and Haas, A. (2000). Yeast homotypic vacuole fusion: a window on organelle trafficking mcchanisms. Annu. Rev. Biochem. 69: 247−75., 247−275.

194. Wileman, T., Kane, L.P., Carson, G.R., and Terhorst, C. (1991). Depletion of cellular calcium accelerates protein degradation in the endoplasmic reticulum. J. Biol. Chem. 266, 45 004 507.

195. Wuestehube, L.J., Duden, R., Eun, A., Hamamoto, S., Korn.P., Ram, R., and Schekman, R. (1996). New mutants of Saccharomyces cerevisiae affected in the transport of proteins from the endoplasmic reticulum to the Golgi complex. Genetics 142, 393−406.

196. Yamakawa, H., Seog.D.H., Yoda.K., Yamasaki, M., and Wakabayashi, T. (1996). Usol protein is a dimer with two globular heads and a long coiled-coil tail. J. Struct. Biol. 116, 356−365. 1381. БЛАГОДАРНОСТИ

197. Выражаю глубокую благодарность моему научному руководителю М.Д. Тер-Аванесяну за проявленный интерес к данной работе, ценные советы при проведении экспериментов и помощь при обсуждении результатов.

Заполнить форму текущей работой