Холера

ХОЛЕРА

Владивостокский Державний Медичний Університет, кафедра мікробіології, вірусології і иммунологии Выполнил: Новак О. Л. 301 грн. л/ф Владивосток, 1998.

Этиология

Возбудитель холери належить до роду Vibrio. Це вигнута, грамотрицательная, не утворює суперечки паличка, має один полярно розташований жгутик. По чутливості до специфічного фагу (IV тип по Мукерджи) розрізняють два биотипа холерного вібріона — класичний (збудник азіатською холери) і Эль-Тор. Усі вони по 0-антигену підрозділяється на 3 сіркологічних типу: Огава (АВ), Инаба (АС) і рідко зустрічається Гикошима (АВС), який дехто автори розглядають як варіант серотипа Огава. Н-антиген холерних вібріонів — загальний всім серотипів.

Холерные вібріони утворюють термолабильный экзотоксин — холероген (відносна молекулярна маса — 82−84 кб). Він з комплексу важкої субъединицы А, активирующей аденилатциклазу, і субъединицы У, представленої 4−6 легкими ланцюгами і забезпечує зв’язування холеро-гена з рецепторами епітеліальних клітин тонкої кишки. Биолого-патогенетические властивості збудника Пройшовши шлунковий бар'єр, вібріони потрапляють у тонку кишку зі сприятливою їм середовищем і заселяють (колонізують) поверхню кишкового епітелію. Процес колонізації включає у собі хемотаксис вібріонів до верстви слизу, покриваючому верхівки ворсинок тонкої кишки, проникнення цю слиз, адгезію до рецепторам на покресленої облямівці кишкових епітеліоцитів і розмноження лежить на поверхні епітелію ворсинок і крипт. У хворих холерою збудник то, можливо виявлено по всьому протязі шлунково-кишкового тракту.

В шлунку при рН щонайменше 5,5 вібріони не виявляються, в стільці їх концентрація сягає 106−107. Розмноживши до певної концентрації, збудник викликає захворювання у вигляді вироблюваного їм холерогена. Основну роль розвитку хвороби грають вібріони, що у тісному зв’язку зі слизової оболонкою тонкої кишки, оскільки вони виділяють холероген в безпосередньої близькості з його рецепторів на епітеліальних клітинах — ган-глиозида GM1. Після прикріплення холерного токсину до ганглиозиду субъединица, А проходить через мембрани всередину епітеліальної клітини, де відбувається вивільнення фрагмента А1. Останній энзиматически розщеплює НАД і передає його АДФ-рибозную половину на регуляторний протеїн аденилатциклазного комплексу, знаходиться в внутрішньої боці мембрани эпителиоцита.

В результаті відбувається активація аденилатциклазы, яка веде до підвищення змісту цАМФ — однієї з внутрішньоклітинних стимуляторів кишкової секреції. Зв’язування холерного токсину з рецепторами на епітеліальних клітинах відбувається з надзвичайною швидкістю (через 1−3 хв); біохімічні нзменения у клітині є необоротними. Виникає захворювання супроводжується втратою величезних кількостей рідини з низьким змістом білка і високої концентрацією іонів натрію, калію, хлоридів, гидрокарбонатов. Ця рідина за складом відрізняється як від экссудата, і від транссудата і стають ближчими до складу кишкового секрету. Сприйнятливість До холерному вибриону сприйнятливі люди різного віку.

Чаще і тяжче хворіють холерою особи, які зловживають алкоголем чи що перенесли резекцію шлунка. Кислотність шлункового соку відіграє у визначенні мінімальної инфицирующей дози — в дослідах на добровольцях при нейтралізації шлункового соку гидрокарбонатом натрію кількість вібріонів, необхідні відтворення специфічного процесу в людини, зменшується з десятьма «до 104−10Ь мікробних клітин. Клінічні особливості Інкубаційний період при холеру триває від 1 до 5 днів. Клінічні прояви холери дуже варіюють, і тяжкість клінічного течії визначається ступенем зневоднення. Захворювання починається зазвичай раптово.

Первым клінічно вираженим ознакою холери є пронос. Типові холерні випорожнення є водянисту, мутновато-беловатую рідина з плаваючими пластівцями, нагадують по зовнішнім виглядом рисовий відвар не мають запаху. М’язова що слабкість і судоми в икроножных м’язах — ранні симптоми холери. Після рідким стільцем з’являється багата повторна блювота, быс діагноз холери підтвердила бактериологически в хворих, в анамнезі значної частини, яких було вказівку вживання антибіотиків у разі перших ознак захворювання. З допомогою РНГА захворювання холерою вдалося додатково встановити ще в 21% хворих [Поляков І. І. та інших., 1973]. При дослідженні випорожнення, вмісту кишечника і жовчного міхура померлих гострих кишкових захворювань, випорожнення здорових осіб і проб води зазвичай, у практичних умовах спостерігали повне збіг результатів серологического і бактеріологічної методів дослідження, що дозволяє вважати РНГА з антительным эритроцитарным диагностикумом досить надійним экспресс-методом при масовому обстеженні на холеру.

Некоторыми авторами при індикації специфічних антигенів холерного вібріона віддається перевагу РТНГА. Холерні діагностикуми з цією реакції готують з баранячих чи людських Про (I) групи еритроцитів, сенсибилизированных холерными 0-антигенами. Чутливість методу — 104−106 бактерій один мл при дослідженні нативных випорожнення і десяти «-105 — після попереднього подращивания. Мінімальна кількість 0-антигена, выявляемого з допомогою РТНГА, одно 0,04−0,16мкг/мл. РТНГА дає позитивні результати в 91% хворих холерою, у 40% ре-конвалесцентов та дванадцяти% які контактували з хворими, 0-антиген холерного вібріона то, можливо визначено через 1 міс з початку захворювання на фекаліях у всіх перехворілих людей, через 5−6 міс — половина обстежених, що, очевидно, свідчить про тривалішої экскреции специфічного антигену в нежиттєздатною формі. Збіг результатів бактеріологічної методу і РТНГА, за даними, зокрема у 63−100% випадків.

Имеющиеся матеріали дають підстави вважати доцільним широке випробування РТНГА. Позитивну оцінку при діагностиці холери отримав МФА, дозволяє виявляти холерні вібріони при змісті їх менш 10° один мл. Використовувати МФА доцільно для дослідження нативного матеріалу від з онкозахворюваннями та трупів. У хворих холерою позитивні результати з допомогою МФА були отримані протягом 2 год в 70−90% спостережень за повної збігу з результатами бактеріологічної аналізу. Застосування МФА для дослідження води та змивів можливо лише після попереднього подращивания чи концентрування матеріалу. Звісно ж перспективним використання иммунотушевой забарвлення холерних вібріонів. Для виявлення антигенів холерного вібріона застосовують агрегат гемаг-глютинационную пробу (АГГ).

В основі її лежить використання для агрегації і фіксування білків імунної сироватки на еритроцитах хімічного речовини із групи диазосоединений як препарату диазоль чорного З. Еритроцити, сенсибилизированные агрегированными білками холерної 0-сыворотки, мають високої специфічністю і чутливістю. З їхніми допомогою вдається визначити 0,01−0,005 мкг/мл «незбираного «розчиненої антигену, приготовленого методом Буавена, і 4000−480 000 клітин холерного вібріона в мікробних взвесях. Це дозволяє вважати АГГ однією з чутливих імунологічних методів, який виправдав себе під час обстеження людей. З допомогою АГГ 0-антиген холерного вібріона виявлено в 88,2% хворих холерою і 78,3% вибриононосителей, причому у титрах 1: 40 і від 0-антиген визначено у 76,1% з онкозахворюваннями та у 57,1% вибриононосителей. Серологически активний компонент эндотоксина виявляють у «високих титрах, частіше у хворих й у перші 3−5 днів хвороби. У період реконвалесценції кількість антигену в сироватці крові знижується, але в 33% хворих він зберігається до 20−25 днів [Покровський У. І., Малєєв У. У., 1978]. Для визначення холерогена, крім биопроб, використовують і імунологічні методи — РНГА і АГГ. Досліди з бесклеточными супернатантами культур холерних вібріонів поріг чутливості обох методів становив 0,01−0,005 мкг/мл.

Антительный відповідь. Інфікування людини холерним вибрионом веде до місцевому і системному відповіді. Клінічно виражене захворювання холерою супроводжується зростанням рівня сывороточн продукуються, навпаки, високоактивні IgG-антитела. Активність IgA-антител в сироватці крові вибриононосителей незначно вищою, порівняно з хворими. Чим важче протікає захворювання, то вище активність продукованих антитіл, які стосуються иммуноглобули-нам класу М, і від активність IgG-антител. Найбільш простим й легко відтвореним методом визначення антимікробних антитіл є РА з живими культурами холерного вібріона, але чутливість цієї реакції обмежена. Діагностичні титри (1:: 40 і від) з’являються, зазвичай, до кінця 1-ї тижня захворювання, але тільки у 19,7% хворих холерою. Дослідження парних сироваток, отримані з інтервалом 7−10 днів із наявності 4-кратного і більше наростання титрів антитіл збільшує частоту позитивних результатів до 89,6% Набагато великої ваги надається в час виявлення виб-риоцидных антитіл. Вибриоцидный тест (ЗТ) є чутливим тоді як РА, даючи високі титри, особливо в реконвалесцентов холери (до 1: 100 000). Потрібно, проте, пам’ятати, що вибриоцидные антитіла (титри до 1: 1000) можуть виявлятися й у сыворотках невакцинированных здорових людей, будь-коли що на холерою, і в осіб, інфікованих бруцеллами, Yersinia enterocolitica 09, цитробактером. Агглютинины щодо менше чутливі до такої неспецифічної стимуляції. Як багато і РА, ЗТ дозволяє реєструвати підйом специфічних антитіл (4-кратный і більше) у 90−95% хворих на бактериологически підтвердженим діагнозом холери [Watanabe Y., 1974]. Як антигену в РА і ЗТ використовують холерні вібріони обох серотипів. За необхідності користуватися одним перевагу віддають серотипу Огава, який частіше, ніж Инаба, входить у перехресні реакції з гетерологичным серотипом холерного вібріона і рідше дає неспецифічні реакції з мікробами інших сімейств. Хоча ці серологические реакції є чутливими, необхідність застосування у яких живих вібріонів створює певні труднощі при масових опитуваннях. Тому найбільшого уваги заслуговують антигенні эритроцитарные діагностикуми, що дозволило впровадити у практику РНГА і РТНГА. Ці реакції мають достатньої чутливістю і специфічністю, дозволяючи виявляти антитіла в хворих і перехворілих холерою в титрах 1: 640−1: 1280. Спостережувані розбіжності у титрах при паралельному використанні РНГА і ЗТ обумовлені головним чином відмінностями в фізико-хімічної природі виявлених антитіл: IgG-антитела ефективніше виявляють бактерицидною методом (ЗТ), IgM-антитела — в РНГА.

Для виявлення антитоксинів в сыворотках застосовують РН, результати якої враховують по відсутності холерогенного ефекту в перев’язаній зашморгу тонкої кишки дорослих кроликів, в кишечнику крольчат-сосунков, на шкірі морських свинок (кроликів) в дослідах in vivo і за відсутністю цитото-нического дії культурі клітин СНО і Y-1 — в дослідах in vitro. Найбільш стандартизовані шкірна проба і модель перев’язаній кишкової петлі. У 73% хворих на эндемичном по холеру районі з допомогою шкірної проби виявлено диагностически значиме 9-кратное й більше збільшення титрів токсиннейтрализующих антитіл. Частота сероконверсии вибриоцидных антитіл і агглютининов у цій самій групі хворих була вищою і становить 98 і 88% відповідно [Watanabe Y., 1974]. Аналіз титрів антитоксических антитіл при діареях нехолерной етіології показав, що у пробах сироваток, взятих у гострої стадії хвороби, вони коливалися від.