Визначення концентрації альбуміну та загального білку в плазмі крові

1.7.1 Визначення вмісту загального білка у сироватці крові (біуретова реакція)

Принцип методу. Білки реагують у лужному середовищі з міддю сірчанокислою з утворенням сполук, які мають фіолетове забарвлення.

Хід роботи. До 0,1 мл сироватки крові додають 4,9 мл робочого розчину біуретового реактиву, перемішують уникаючи утворення піни.

Через ЗО хвилин (не пізніше 1 години) вимірюють оптичну густину дослідної проби на ФЕК у кюветі з товщиною шару 10 мм при довжині хвилі 540−560 нм (зелений світлофільтр) відносно контролю.

Контроль. До 4,9 мл робочого розчину біуретового реактиву додають 0,1 мл 0,9? /о розчину натрію хлористого, витримують ЗО хв. Розрахунок проводять за калібрувальним графіком.

Калібрувальний графік для визначення концентрації загального білка за допомогою біуретового реактиву Побудувати криву за даними, що наведені в таблиці.

Визначення концентрації альбуміну у сироватці крові

Принцип методу. Альбумін утворює в слабкокислому середовищі з індикатором бромкрезоловим зеленим у присутності детер генту забарвлений комплекс, інтенсивність забарвлення якого пропорційна кзнцентрації альбуміну.

Хід роботи. Дослідна проба: 0,02 мл сироватки або плазми крові ретельно перемішують, уникаючи утворення піни, з 2,0 мл робочого розчину індикатору, витримують 5 хв. та фотометрують у кюветі з товщиною робочого шару 5 мм при довжині хвилі 620−630 нм відносно холостої проби.

Холосту пробу ставлять як дослідну, але замість сироватки використовують 0,02 мл дистильованої води.

Калібрувальну пробу готують як дослідну, але замість сироватки використовують 0,02 мл калібрувального розчину альбуміну.

де С — концентрація альбуміну в сироватці, г/л;

Розрахунок вмісту альбуміну проводять за формулою, А — концентрація альбуміну в калібрувальному розчині (50 г/л);

Едос. — оптична густина дослідної проби; Е_кал. — оптична густина калібрувальної проби; [6].