Методики технологічного контролю лікарських засобів

Підвищення ефективності застосування ЛЗ в медичній практиці можливо тільки при наявності певної МКЯ, що дозволить проводити ідентифікацію якісного та кількісного складу ЛЗ.

Розробка методик якісного та кількісного визначення ДР в опрацьованих ЛЗ та послідуючі дослідження проводились на кафедрі клінічної біохімії та судово-медичної токсикології Харківської медичної академії післядипломної освіти під керівництвом професора Петюніна Г. П.

Ідентифікація метилурацилу, еритроміцину, стрептоциду проводили методом ВЕРХ. Визначення здійснюється згідно методики наведеної для кількісного визначення ДР.

На хроматограмі випробувального розчину, час утримання піку метилурацилу, еритроміцину, стрептоциду має збігатися з часом утримання піку метилурацилу, еритроміцину, стрептоциду на хроматограмі розчину.

порівняння з точністю ± 2%.

Методики кількісного визначення ДР проводили методом ВЕРХ.

Виявлення та визначення діючих речовин проводили на рідинному хроматографі «Agilent 1100» в такому режимі елювання — від 0 до 9 хв — 90%А, від 9 мін до 19 хв — від 90% до 45% А, від 19 до 22 хв — від 45% до 90% А і на протязі 22 — 30 хв — 90% А. Рухома фаза: елюєнт, А — метанол; елюєнт B — вода. Швидкість рухомої фази — 1 мл/хв. Температура колонки — 35 °C, об'єм проби 50 мкл. Хроматографічна колонка розміром 250?4.6 мм, заповнена сорбентом силікагель октилсилільний для хроматографії Р з розміром часток 5 мкм (Phenomenex Luna 5 м C18). Детектування проводилось за допомогою спектрофотометричного детектору за довжини хвилі 215 нм.

Приготування випробуваного розчину: Біля 2,0 г (точна наважка) крему (гелю) поміщали у мірну колбу місткістю 100 мл, додавали 60 мл розчинника (70% метанол), перемішували на орбітальному шейкері протягом 30 хв до повного розчинення крему, доводили об'єм розчину тим самим розчинником до мітки, перемішували та фільтрували. 2,00 мл одержаного розчину вміщували у мірну колбу місткістю 20,00 мл та доводили розчинником до мітки.

Розчин порівняння 1 (крем): 13,0 мг стандартного зразка (СЗ) стрептоциду, 25,0 мг СЗ метилурацилу, 5,0 мг СЗ еритроміцину розчиняли у розчиннику за допомогою ультразвукової бані (УЗБ) протягом 5 хв і об'єм розчину доводили тим самим розчинником до 25,0 мл. 2,00 мл одержаного розчину вміщували у мірну колбу місткістю 20,00 мл та доводили розчинником до меткі.

Розчин порівняння2 (гель): 10,0 мг СЗ стрептоциду, 17,0 мг СЗ метилурацилу, 5 мг СЗ еритроміцину розчиняли у розчиннику за допомогою ультразвукової бані (УЗБ) протягом 5 хв, і об'єм розчину доводили тим самим розчинником до 25,0 мл. 2,00 мл одержаного розчину вміщували у мірну колбу місткістю 20,00 мл та доводили розчинником до меткі.

Перевірка придатності хроматографічної системи:

Хроматографічна система вважається придатною, якщо виконуються наступні умови:

• — ефективність хроматографічної колонки, розрахована за піком метронідазолу та німесуліду на хроматограмі розчину порівняння повинна бути не менше 1500 теоретичних тарілок;
• — відносне стандартне відхилення розраховане для величин площі піку метронідазолу та німесуліду, розраховане з хроматограм розчину порівняння не повинне перевищувати 2%;
• — коефіцієнт симетрії піку розрахований за піком стрептоциду (метил урацилу, еритроміцину) має бути не більше 1.5;
• — коефіцієнт розділення між піками стрептоциду та метилурацилу має бути не менше 1,0, між піками метилурацилу та еритроміцину не менше ніж 5,0;
• — відносне стандартне відхилення, розраховане для площ піків стрептоциду або метилурацилу або еритроміцину, має бути не більше 2,0%.

Вміст стрептоциду (метилурацилу, еритроміцину) в мг на 1 г крему (гелю) (Х), розраховували за формулою (2.8):

де: S₁ — середнє значення площ піків стрептоциду або метилурацилу або еритроміцину, обчислене із хроматограм випробовуваного розчину 1 або випробовуваного розчину 2, відповідно;

S₀₁ — середнє значення площ піків стрептоциду або метилурацилу або еритроміцину, обчислене із хроматограм розчину порівняння 1 або розчину порівняння 2, відповідно;

m₁ — маса наважки препарату, г;

m₀₁ — маса наважки СЗ стрептоциду або СЗ метилурацилу або СЗ еритроміцину, взята для приготування розчину порівняння 1 або розчину порівняння 2, відповідно, мг;

P₀₁ — вміст основної речовини в СЗ стрептоциду або СЗ метилурацилу або СЗ еритроміцину, взятому для приготування розчину порівняння 1 або розчину порівняння 2, відповідно, %.

Рис. 2.2 Хроматограма для випробуваного розчину крему

Рис. 2.4 Хроматограма для розчину порівняння 1.

Рис. 2.5. Хроматограма для розчину порівняння 2.

Рис. 2.6. Хроматограма для стандартного розчину метилурацилу, еритроміцину та стрептоциду.

Хроматографічні дослідження, що були проведені методом ВЕРХ показали, що описані умови хроматографування забезпечували достатні селективність та ефективність розділення. Час утримання піків метилурацилу, еритроміцину та стрептоциду складав в середньому 9,73, 6,44; та 4,98 хв, відповідно (рис. 2.2, 2.3).

Різниця в часах утримання вказаних компонентів на хроматограмах випробувального розчину та розчину порівняння, не перевішує допустимі 2%. Коефіцієнт розділення між піками стрептоциду та метилурацилу був не менш 1,0, а між піками метилурацилу та еритроміцину не менш 5,0. Коефіцієнти симетрії піків усіх компонентів не перевішували 1,5.

Ефективність хроматографічної колонки, розрахована для піків стрептоциду, метилурацилу та еритроміцину, була не менше 1500 теоретичних тарілок. Відносне стандартне відхилення, розраховане для площ піків усіх трьох компонентів не перевішало 2,0%.

В табл. 2.2 і 2.3 наведені результати досліджень кількісного визначення ДР в опрацьованих МЛЗ.

Таблиця 2.2

Кількісний вміст діючих речовин в ЛЗ

Згідно результатів експериментальних досліджень щодо визначення активних компонентів крему встановлено (таблиця), що вміст стрептоциду в 1 г крему складає 30,35 мг (при нормі 27 — 33 мг/г), метилурацилу — 50,06 мг (45 — 55 мг/г), а еритроміцину — 10,03 мг (9 — 11 мг/г).

Висновки до розділу 2

• 1. Наведені короткі дані про властивості діючих і допоміжних речовин, що використовуються при розробці м’яких лікарських форм.
• 2. Опрацьовано методики фізико-хімічного, фізико-механічного, структурно-мехнічного дослідження м’яких лікарських засобів, що дозволяють об'єктивно оцінити їх якість.
• 3. Для технологічного контролю наведені методики якісного та кількісного визначення метилурацилу, стрептоциду та еритромицину. Ідентифікація та кількісне визначення діючих речовин проводили методом ВЕРХ.