Бактериальная система секреції білків першого типа

БІЛОРУСЬКИЙ ДЕРЖАВНИЙ УНИВЕРСИТЕТ.

Біологічний факультет.

Кафедра молекулярної биологии.

БАКТЕРІАЛЬНА СИСТЕМА СЕКРЕЦІЇ БЕЛКОВ.

ПЕРШОГО ТИПА.

Курсова робота студента 3 курса.

Войцицкого А. М.

Науковий керівник: к.х.н., викладач Русь Про. Б.

Мінськ 2004.

Запровадження 5.

Коротка характеристика бактеріальних систем секреції 6.

Будова системи секреції першого типу 8.

ABC-транспортеры 14 Організація генів, які кодують компоненти системи секреції першого типу 16.

Сигнальні послідовності субстратів 18.

Укладання 20.

Список літератури 21.

Список сокращений.

АТФ-связывающая касета (ATP-binding cassette).

— ABC.

Білок, зв’язуючий мембрани (Membrane fusion protein).

— MFP.

Білок зовнішньої мембрани (Outer membrane protein).

— OMP.

Ядерний магнітний резонанс.

— ЯМР.

Процес секреції білків є важливим аспектом життєдіяльності бактерій, позаяк значна кількість білків бактеріальної клітини локалізовано поза цитоплазми. Здатність до секреції білків є найважливішої для вирулентных бактерій, що у процесі інфекції багато білкові продукти повинні розташовуватися зовнішньому поверхні бактеріальної клітини, або секретироваться в навколишнє середовище. З іншого боку, секреція білків має найважливіше значення для біотехнології, оскільки очищення білків з культуральної середовища простого складу значно простіше, ніж із лизатов, які представляють складні суміші різних речовин. У зв’язку з цим вивчення процесу білкової секреції є неабияк актуальною проблемою. Результатом проведених раніше досліджень стало виявлення кількох шляхів експорту білка. Потім вони було поділено на групи, всередині яких процес секреції ідентичний або дуже схожий. Зараз виділяють п’ять основних типів секреції білків. Однією з них система секреції першого типу. З допомогою цією системою бактеріальні клітини експортують широке коло різних субстратів, до складу якого у собі ферменти, токсини, полісахариди, антибіотики, і ін. сполуки. Попри відносну простоту устрою цього апарату секреції, ще достатнє кількість нез’ясованих питань у цій галузі. Недостатня вивченість будівлі та функціонування системи секреції, і навіть незаперечна важливість секретируемых нею білків є причиною, через яку вивчення цієї теми є дуже актуальным.

Метою згаданої роботи є підставою збирання та узагальнення наявної цей день інформації про бактеріальної системі секреції першого типа.

Коротка характеристика бактеріальних систем секреции.

Для секреції білків бактеріальні клітини використовують різні системи секреції залежно від будівлі та кінцевої локалізації білка. Тому є необхідною приведення невеликого огляду систем секреції всіх типов.

Секреція першого типу. Апарат цією системою секреції влаштований щодо просто. Він охоплює у собі три компонента білкової природи. Цю систему є Sec-независимой та здійснює секрецію субстратів безпосередньо з цитоплазми до однієї стадію без периплазматических посередників. У цій шляху секретируются токсини, протеази, липазы, антибіотики, і інші сполуки (D. Thanassi et al., 2000).

Секреція другого типу. Цю систему секреції влаштована вже дуже складно. Характерною ознакою є його поділ на частини і секреція субстратів на два стадії. Перша частина, звана Sec-системой, експортує білки через цитоплазматическую мембрану, далі білки або залишаються у периплазме, або секретируются через зовнішню мембрану у вигляді термінальних компонентів системи секреції (P.S. Lory, 1998). По цьому шляху секретируются такі білки, як пектатлиазы, пектинметилэстеразы і целлюлазы роду Erwinia, целлюлаза, протеаза і амилаза Xanthomonas campestris, липаза, фосфолипаза, эластаза, энтеротоксин У Pseudomonas aeruginosa, амилаза і протеаза Aeromonas hydrophila, хитиназа, протеаза і холерний токсин Vibrio cholerae (J. Hacker at al., 2000). У зв’язку з великим кількістю і розмаїттям субстратів, секретируемых через цей апарат секреції, її називають «загальним секреторне шляхом» (General Secretory Pathway, GSP).

Секреція третього типу. Цей тип секреції, подібно першому типу, є незалежною від Sec-системы. Характерною ознакою його доставка субстратів (чинників вірулентності) у клітину эукариотического хазяїна, також наявність великої кількості секреторных шаперонов. Сам апарат включає у собі майже двадцять білкових компонентів, більшість яких розташована у внутрішній мембрані, і за структурою досить схожий на систему складання джгутика. З допомогою системи секреції третього типу експортуються багато чинників вірулентності патогенів людини і тварин, і навіть Avr-белки, харпины інші чинники вірулентності фітопатогенних бактерій (J. Hacker еt al., 2000).

Секреція четвертого типу. Апарат секреції четвертого типу складається з двох компонентів: конъюгационного каналу, з якого відбувається транслокация субстратів, і конъюгационного пилюса, який буде необхідний контакту з реципиентной клітиною. Будова цією системою секреції подібно зі будовою апарату кон’югації деяких плазмід. Вона також має широкої специфічністю як субстратів (експортуються великі нуклеопротеидные комплекси, складні білкові токсини, мономерные білки), і реципієнтів, т.к. ними можуть бути майже всі живі організми (P.S. Lory, 1998).

Секреція п’ятого типу. У деяких публікаціях іменується системою секреції четвертого типу. Цю систему секреції включає у собі групу білків, званих автотранспортерами, до яких ставляться: протеази (IgA) Neiseria gonorrhoeae, цитотоксин (Vac) Helicobacter pylori. Автотранспортеры експортуються з цитоплазми через Sec-систему з отщеплением сигнальною аминоконцевой послідовності. Деякі їх можуть залишатися заякоренными в клітинної стінці, інші експортуються безпосередньо у внеклеточное простір (J. Hacker еt al., 2000).

Будова системи секреції першого типа.

Порівняно коїться з іншими системами секреції апарат секреції першого типу влаштований щодо просто. В усіх випадках він з трьох компонентів білкової природи. Перший належить до класу АТФаз, званих ABCтранспортерами і відданість забезпечує енергозалежні стадії процесу транспорту. Цей білок є заякоренным у внутрішній мембрані і асоційованим зі другим білком MFP, які забезпечують злиття цитоплазматической і зовнішньої мембрани, і буде що створює канал, з якого транспортується секретируемый білок. Третій білок OMP, так званий белок-щвейцар (gatekeeper), локалізований у зовнішній мембрані. Його функцією є створення секреторного мембранного каналу та його закриття відсутність субстрату (D. Thanassi еt al., 2000).

[pic].

Рис. 1. Будова системи секреції I типа.

(по D. Thanassi еt al., 2000).

Перший тип секреції використовується широким колом грамотрицательных бактерій для експорту токсинів, протеаз, липаз. З іншого боку, цю систему зберігається під час переходу від прокариот до эукариотам і експортує велике число токсинів і антибіотиків. Система секреції першого типу є Secнезалежної Польщі і експортує білки до одного етап безпосередньо з цитоплазми в навколишнє середовище через зовнішню мембрану без периплазматических посередників. Субстрати цією системою секреції позбавлені сигнальних амино-концевых послідовностей, сигнал до секреції вони розташований на карбокси-конце в межах останніх 60 амінокислотних залишків (D. Thanassi еt al., 2000).

Система секреції ?-гемолизина Escherichia сoli є прототип системи секреції першого типу, і сьогодні добре вивчена. Воно складається з трьох компонентів: TolC, HlyD, HlyB. Білок TolC є аналогом OMP для експорту ?-гемолизина, і становить тримерный комплекс, розташований у зовнішній мембрані. Передбачається, що він з пориноподобного ?-складчатого мембранного домену з гидрофильной карбокси-концевой областю, що у периплазматическом просторі. Проте, недавній аналіз послідовності зазначає, що TolC та інші OMP є поринами. OMP функціонує як канал секреції через зовнішню мембрану, було доведено порообразующим дією олигомеров TolC в експериментальних ліпідних бислоях (D. Thanassi еt al., 2000). Периплазматический MFP (HlyD) є також тримерным і взаємодіє і з OMP, і з ABC-транспортером (HlyB). HlyD містить короткий гидрофильный амино-концевой домен, заякоренный у внутрішній мембрані, до складу якого близько 150 амінокислотних залишків; великий гидрофобный домен, що у периплазме, до складу якого 275 амінокислотних залишків, і карбокси-концевой домен, має ?-складчасту структуру, здатний зв’язуватися із зовнішнього мембраною, у якому 275 амінокислотних залишків (M. J. Fath еt al., 1993). Передбачається, що MFP полегшує секрецію субстрату без проміжного периплазматического ланки, формуючи закритий канал, котрий поєднує внутрішню й зовнішню мембрани, і здійснюючи прямий контакт між ABC-транспортером і OMP. Що ж до HlyB, його точне будова доки встановлено, передбачається, що він з восьми доменів. Два їх у амино-концевой області й шість у центральній гидрофобной області. Результати експериментального вивчення цього апарату сприяли виникненню двох моделей секреції першого типу (D. Thanassi еt al., 2000).

Експерименти по секреції ?-гемолизина E. coli показують, що ABCтранспортер і MFP асоціюються ще до його зв’язування з субстратом. Прикріплення субстрату до цього комплексу викликає контакт MFP з OMP. Це з'єднання є оборотним, і руйнується відразу після експорту субстрату. Енергія гідролізу АТФ у вигляді ABC-транспортера витрачається лише з транслокацию субстрату не треба для зв’язування субстрату або заради складання комплексу (D. Thanassi еt al., 2000).

Експерименти по секреції гемопротеина Serratia мarcescens і металлопротеазы Erwinia chrysanthemi свідчить про трохи інший порядок подій. За цією моделлю, ABC-транспортер і MFP не зв’язуються перед закріпленням субстрату. Субстрат насамперед пов’язують із ABCтранспортером, потім зчинений комплекс асоціюється з MFP, і лише потім відбувається зв’язування з OMP, після чого відбувається секреція субстрату. Для визначення правильної моделі, або заради уточнення можливих індивідуальних розбіжностей у функціонуванні апарату секреції першого типу необхідні подальші дослідження (D. Thanassi еt al., 2000).

Встановлено, що ОМР системи секреції ?-гемолизина (TolC), застосовується також у системі секреції колицина V й у деяких інших системах, наприклад при сегрегації хромосом, і навіть може формувати канал у зовнішній мембрані, специфічний для медикаментів. ОМР системи секреції гемопротеина P. S. marcescens, званий HasF, в високої мері ідентичним з TolC E. сoli. Для відтворення секреції HasА у E. сoli потрібна наявність як ОМР або TolC, або HasF, або PrtF. Такі гібридні секреторні системи функціонують як секреції HasA, і для секреції протеази. Це є типовим прикладом комплементации ОМР (R. Binet et al., 1997). Зокрема, ступінь гомології між компонентами системи секреції липазы P. S. marcescens, білками lipB, lipC, lipD і компонентами транспортера металлопротеазы Er. chrysanthemi PrtD, PrtE, PrtF становить 45−55%. А гомология між LipB і LipC, і HasD, і HasE у P. S. marcescens становить 45−53%. Ці показники вважаються досить високими (H. Akatsuka et al., 1998). Проте було виявлено, що не комбінації між компонентами гібридних секреторных систем є активними. Так, HasE формує активні вони й з PrtF, і з TolC, тоді як PrtE може формувати активний експортер тільки з PrtF, але з TolC. Дослідження цих мультибелковых комплексів in vitro підтвердили існування якихось функціональних різниці між HasE і PrtE. Отримані результати може бути корисними щодо сайтів, відповідальних за зв’язування MFP і OMP (H. Akatsuka et aj., 1998).

З іншого боку, дослідження in vivo і in vitro показують, що HasD і PrtD можуть утворювати активні секреторні системи з PrtE і HasE у різноманітних комбінаціях (H. Akatsuka et al., 1998).

Теж було проведено дослідження з вивченню секреції липазы LipA P. S. marcescens у вигляді систем LipB-LipC-LipD і HasD-HasE-HasF. Через війну дослідів з’ясовано, що HasD-HasE-HasF-транспортер здійснює секрецію LipA як і ефективно, як і LipB-LipC-LipD. LipB-HasE-HasF-система могла виробляти секрецію LipA, але вона була здатна секретировать HasA, система HasD-Lip-CLipD була здатна до секреції обох субстратів (H. Akatsuka et al., 1998).

Що стосується експериментів із системами секреції липазы LipA P. S. marcescens і металлопротеазы PrtC E. chrysanthemi отримано подібні результати, наведені у таблице:

Таблиця 1.

Ефективність гібридних систем секреції (по H. Akatsuka et al., 1998).

[pic].

Не все комбінації компонентів сприяли формуванню ефективних систем секреції. Отримані результати дозволили зробити деякі конкретні висновки. Зокрема, що PrtD-PrtE-LipD-система неспроможна експортувати ні LipA, ні PrtC, тоді як, LipB-LipC-PrtF-система виявилася настільки ж функціональної для LipA секреції в E. coli як й у P. S. marcescens. PrtE може взаємодіяти тільки з PrtF, тоді як HasE і LipC показують ширші можливості зв’язування з різними білками. Було так само встановлено, що PrtD неспроможна асоціюватися з LipC, а LipBPrtE-PrtF-система є дуже неефективною щодо експорту LipA і PrtС (H. Akatsuka et al., 1998).

У результаті досліджень було встановлено вплив шаперона SecB на процес секреції HasA у P. S. marcescens. Точне його значення нині не встановлено, але засвідчили, що інактивація цього шаперона призводить до блокування секреції HasA (P. Delepelaire et al., 1998).

На цей час встановлено будова систем секреції першого типу у багатьох мікроорганізмів, окремі наведені у таблиці 2. Проте усе є досить дуже багато секреторных систем неповного складу, котрим залишаються нез’ясованими або деякі компоненти, або субстрати (M. J. Fath еt al., 1993).

Таблица2 Деякі системи секреції першого типу (по M. J. Fath еt al., 1993). [pic].

ABC-транспортеры.

Сімейство АВС-транспортеров включає у собі специфічні АТФ-связывающие белки-транслокаторы. У 1993 року M. J. Fath (M. Fath еt al., 1993) запропонував класифікувати їх у групи: эукариотические АВСтранспортери, бактеріальні АВС-ипортеры і бактеріальні АВС-экспортеры, на мал.2 представлено будова декого з тих. Характерно, що ABC-белки є консервативними і здійснюють трансмембранный перенесення великого кількості субстратів як і прокариотических, і у эукариотических клітинах. Вони найчастіше складаються з цих двох закріплених в мембрані гидрофобных і двох консервативних гидрофильных АТФ-связывающих доменів. Ці домени може бути як частинами одного полипептида, і кількох окремих полипептидов. Досліди in vitro засвідчили, що у деяких випадках цих чотирьох доменів однієї чи кількох полипептидов виявляється достатньо здійснення трансмембранного переміщення розчинів. І всі більшість бактеріальних ABC-транспортных систем включає у собі різні додаткові білки. Цими додатковими білками є MFP і OMP (R. Binet et al., 1997).

АВС-импортеры мають будова, подібне із іншими представниками транспортних АТФ-аз. Але у освіті транспортної системи, вони приєднують інші компоненти. У системах, здійснюють імпорт, відсутні характерні системі першого типу OMP і MFP. Натомість присутній особливий периплазматический білок, який пов’язують із імпортованим субстратом і дає його АТФ-азе для безпосереднього перенесення (M. Fath еt al., 1993).

Крім АВС-экспортеров, здійснюють транспорт білків, в бактеріальних клітинах існує велика група АВС-экспортеров, виконують транспорт небілкових субстратів, наприклад, полісахаридів і іонів. Характерною рисою цих переносників і те, що які самі утворюють активну транспортну систему і вимагають ніяких додатових білків. Транспорт у разі здійснюється ні в внеклеточное простір, а периплазму (M. Saier, 2000).

Такі АВС-транспортеры виявлено як і клітинах грамположительных і грамотрицательных бактерій, і у эукариотических клітинах (M. Fath еt al., 1993).

[pic].

Рис. 2. Будова АВС-транспортеров (по M. Fath еt al., 1993).

Організація генів, які кодують компоненти системи секреції першого типа.

Зазвичай, гени, які кодують все три компонента системи, зорганізовані у один оперон, зазвичай разом із генами, кодирующими секретируемый білок. До прикладу, гени, які кодують чотири подібних за будовою металлопротеазы E. chrysanthemi: PrtA (50кДа), PrtB (53 кДа), PrtC (55 кДа), PrtG (58 кДа) зорганізовані у один оперон з генами, кодирующими все три компонента системи їх секреції: PrtD (ABC-транспортер), PrtE (MFP), PrtF (OMP). Що стосується E. coli, ген hlyA, який кодує ?-гемолизин, об'єднаний із генами hlyB і hlyD, кодирующими відповідно ABC-транспортер і MFP. Також і у P. S. marcescens. Ген hasA, який кодує внеклеточный гемопротеин, організований один оперон з генами hsaD (ABC-транспортер) і hasE (MFP). У цих двох випадках ген, який кодує OMP, у єдиний оперон не включається міститься окремо. З іншого боку, у P. S. marcescens виявлено оперон, у якому лише гени, які детермінують компоненти системи секреції і жодного гена, відповідального за синтез експортних білків. Він має три гена: lipB (ABCтранспортер), lipC (MFP), lipD (OMP) (H. Akatsuka et al., 1998). Був виявлено також кілька оперонов, які містять гени, не що стосуються ні з системі секреції, ні є генами секретируемых білків. Ці гени кодують білки, які так чи іншим чином виконують регуляторну функцію (M. Fath еt al., 1993).

Організація Hly-оперона та інших оперонов представлена на рис. 3. Ген hlyA кодує 1023 амінокислоти ?-гемолизина (HlyA), hlyB кодує 707 амінокислот ABC-транспортера (HlyB), hlyD кодує 477 амінокислот MFP (HlyD), і hlyC кодує 170 амінокислот білка, який має секреторній функції, але полегшує активацію HlyA. Ген tolC, який кодує 495 амінокислот OMP (TolC) у цей оперон не включається міститься отдельно.

На цей час виявлено і розшифровані опероны систем секреції першого типу багатьох мікроорганізмів (M. Fath еt al., 1993).

[pic].

Рис. 3. Оперонная організація генів, які кодують компоненти системи секреції I типу деяких бактерій. Згори донизу: система секреції ?- гемолизина E. coli, протеаз E. chrysanthemi, колицина V E. coli, субтилина B. subtilis, капсулярного полисахарида E. coli (по M. Fath еt al., 1993).

Сигнальні послідовності субстратов.

Субстрати, секретируемые через систему секреції першого типу, не мають сигнальних амино-концевых послідовностей. Натомість є карбокси-концевые секреторні сигнали, які працюють у межах останніх 60 амінокислотних залишків, вперше виявлені на ?-гемолизине. У експериментах з протеазой PrtG E. chrysanthemi було встановлено, що найменша карбокси-концевая послідовність, що дозволяє розпочати ефективну секрецію, містить останні 29 амінокислот PrtG, ще, низька, проте істотна секреція то, можливо индуцирована останніми 15 амінокислотами PrtG (R. Binet et al., 1997). З іншого боку, засвідчили, що карбокси-концевая сигнальна послідовність, що складається з негативно заряджених амінокислотних залишків, є консервативної для гомологичных протеаз. Порівняння послідовностей показало, що протеази і липазы теж мають дуже подібні карбокси-концевые послідовності. Проте важливим є також те, що гомология послідовностей цих сполук є неповної. І це секреторні сигнали протеаз і різноманітних токсинів є дуже різними й специфічними, ще, комплементация між компонентами систем секреції цих двох сімейств білків є дуже незначною. Проте він менш, кожен сигнал може індукувати секрецію чужорідного білка з допомогою свого специфічного транспортера (R. Binet et al., 1997).

Вивчення фрагмента карбокси-конца очищеної протеази G у вигляді ЯМР показало, що він являє собою стабільну ?-спіраль, розташовану перед 7 — 8 кінцевими аминокислотными остатками.

Під час вивчення процесів секреції білків було показано роль особливої області, розташованої вище карбокси-концевой сигнальною послідовності на більшості експортованих субстратів. Токсини, протеази і липазы, секретируемые системою секреції першого типу, мають таку область, що складається з багатою глицином послідовності (GGXGXD), яка повторюється 4−36 разів у залежність від белка.

При порівнянні процесів секреції різних білкових субстратів, містять такі послідовності, було встановлено, що вони відіграють найважливішу роль при секреції деяких пептидів. Можливо, що багаті глицином повтори діють як внутрішні шапероны, сприяючи кращому поділу секреторного сигналу і залишку білка (R. Binet et al., 1997).

Заключение

.

З допомогою системи секреції першого типу секретируется широке коло субстратів, до складу якого у собі ряд ферментів, токсинів, антибіотиків, і інших біологічно активних сполук. Цю систему секреції характерна як прокариотических, так эукариотических клітин. В усіх життєвих випадках вона з трьох компонентів білкової природи: ABC-транспортера, що є АТФ-азой, здійснює енергозалежні стадії транслокации; білка, формує периплазматический канал, який би з'єднав ABCтранспортер з третім компонентом системи — белком-швейцаром, що створює секреторный канал у зовнішній мембрані. Система секреції першого типу є Sec-независимой та здійснює секрецію субстрату до однієї стадію з цитоплазми безпосередньо у внеклеточное простір без присутності будь-яких периплазматических посередників. Сигналом до секреції за цим типом є послідовністю 60 амінокислотних залишків, які перебувають на карбокси-конце полипептида. Виявлено також гібридні системи секреції першого типу, які з компонентів властиві різним системам цього. Попри щодо простий пристрій даної системи секреції тоді як іншими апаратами секреції, існує досить дуже багато незрозумілих і спірних питань у цій галузі. Зокрема, недостатньо вивчена послідовність подій у процесі секреції субстратів, і навіть видова специфічність будівлі самої системи. У зв’язку з цим правилом і важливим значенням секретируемых сполук, вивчення цього питання є дуже актуальним і перспективным.

1. H. Akatsuka, R. Binet, E. Kawai, З. Wandersman, and K. Omori. Lipase secretion by bacterial hybrid ATP-Binding Cassette Exporters: molecular recognition of the LipBCD, PrtDEF, and HasDEF exporters. //.

Journal of bacteriology. — 1997. — Vol. 179. № 15 — Р. 4754−4760.

2. R. Binet, P. S. Leґtoffe, J. M. Ghigo, P. Delepelaire, З. Wandersman.

Protein secretion by Gram-negative bacterial ABC exporters — a review.

// Gene. — 1997. — Vol. 192. — Р. 7−11.

3. W. H. Bingle, J. F. Nomellini, and J. Smit. Secretion of the.

Caulobacter crescentus S-Layer potein: further localization of the Зterminal secretion signal and its use for secretion of recombinant proteins. // Journal of bacteriology. — 2000. — Vol. 182. № 11. — Р.

3298−3301.

4. P. Delepelaire, З. Wandersman. The SecB chaperone is involved in the secretion of the Serratia marcescens HasA protein through an ABC transporter. // EMBO J. — 1998. — Vol. 17. № 4. — P. 936−944.

5. M. J. Fath, R. Kolter. ABC Transporters: Bacterial Exporters. //.

Microbiological reviews. -1993. — Vol. 57. № 4. — Р. 995−1017.

6. J. Hacker, J. B. Kaper. Pathogenicty islands and the evolution of microbes. // Annu. Rev. Microbiol. — 2000. — Vol. 54. — Р. 641−79.

7. З. J. Hueck. Type III Protein Secretion Systems in Bacterial Pathogens of Animals and Plants. // Microbiology and molecular biology reviews.

— 1998. — Vol. 62. № 2. — Р. 379−433.

8. P. S. Letoffe and З. Wandersman. Secretion of CyaA-PrtB and HlyA-PrtB.

Fusion Proteins in Escherichia coli: Involvement of the Glycine-rich repeat domain of Erwinia chrysanthemi protease B. // Journal of bacteriology. — 1992. — Vol. 174. № 15 — Р. 4920−4927.

9. P. S. Lory. Secretion of proteins and assembly of bacterial surface organelles: shared pathways of extracellular protein targeting. //.

Current Opinion in Microbiology. — 1998. — Vol. 1. — Р. 27−35. 10. L. M. Moreira, J. D. Becker, A. P. and A. Becker. The Sinorhizobium meliloti ExpE1 protein secreted by a type I secretion system involving.

ExpD1 and ExpD2 is required for biosynthesis or secretion of the exopolysaccharide galactoglucan. // Microbiology. — 2000. — Vol. 146.

— Р. 2237−2248. 11. M. H. Saier. Families of transmembrane sugar transport proteins. //.

Molecular Microbiology. — 2000. — Vol. 35. № 4. — P. 699−710. 12. D. G. Thanassi, P. S. J Hultgren. Multiple pathways allow protein secretion across the bacterial outer membrane. // Current Opinion in.

Cell Biology. — 2000. — Vol. 12. — Р. 420−430.